家兔膽汁的光譜特性及降壓效應觀察

羅紅梅 萬 潔 白森文

廣東醫學院生理科學實驗室，廣東東莞 523808

動物膽汁是我國的傳統用藥，其藥用價值一直受到關注，臨床上有來源熊膽、蛇膽、雞膽、牛膽和豬膽等的制劑，具有消炎、止咳、解痙和降壓等方面的功效。家兔的飼養在中國逐漸走向產業化，但其膽汁目前大多被當作廢料丟棄。家兔膽汁有獨特的理化特性和藥理作用，具有開發為臨床用藥的前景。家兔膽汁含去氧膽酸最多，去氧膽酸有消炎、鎮痙、降壓、降血脂等方面的功效。本實驗觀察了家兔膽汁的紫外、紅外光譜，作為鑒別家兔膽汁的可靠指標，同時還觀察了其降壓效應，為將其開發為降壓藥做前期研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

3月齡SD大鼠（廣東醫學院實驗動物中心提供，許可證號：2009029），Med Lab生物信號采集系統（南京美易公司），島津紫外光譜儀（UV-3101PC，日本），紅外光譜-紅外顯微鏡聯用系統（FTS175C-UMA500，美國BIO-RAD）。

1.2 實驗試劑

家兔膽汁（廣東醫學院實驗用兔采集），青霉素鈉（悅康藥業集團有限公司，批號：090219）。

1.3 實驗方法

1.3.1 膽汁紫外光譜測定 家兔新鮮膽汁蒸餾水稀釋200倍后紫外光譜掃描，掃描波長范圍是200～600 nm。

1.3.2 膽汁紅外光譜測定 將新鮮家兔膽汁置于培養皿中，于60℃水浴箱中加熱烘干后，密閉保存，取少許干燥膽汁與溴化銀一起壓片，在紅外光譜儀中進行紅外光譜掃描。

1.3.3 降壓作用觀察 21只3月齡Sprague-Dawley大鼠，體重范圍250～300 g，隨機分成三組：假手術組、模型組和膽汁組，每組各7只。模型組和膽汁組大鼠通過結扎左腎動脈建立高血壓模型，具體方法是：大鼠在全麻下做腹部正中切口，找到并暴露左腎，小心分離腎動脈和腎靜脈，然后平行腎動脈放置一去尖5號針頭，一并結扎動脈和針頭，抽出針頭，逐層關腹，關腹后腹腔注射20萬單位青霉素防止感染[1]。假手術組大鼠在分離腎動脈后，不做動脈結扎，直接關腹。術后1個月大鼠基本康復，開始給藥。模型組、假手術組用生理鹽水灌胃，膽汁組用新鮮的家兔膽汁灌胃，用量為0.3 mL/100 g。1個月后，全麻下進行頸總動脈插管，插管與Med Lab生物信號采集系統連接，測定大鼠血壓，連續測定5 min。

1.4 統計學處理

采用SPSS 15.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差表示，兩組間比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 新鮮家兔膽汁紫外光譜、紅外光譜圖

紫外光譜顯示，276 nm和386 nm波長處各有一吸收峰，強度分別是0.419和0.314（圖1），不同于雞、牛、豬、魚羊的紫外光譜（圖2）。紅外光譜中，指紋區1 015.39～1 090.64 cm-1處有一組特征峰（3個），在918.26～968.4 cm-1處也有一組特征峰（3個）（圖3）。

圖1 新鮮家兔膽汁的紫外光譜

圖2 其他動物膽汁的紫外光譜

圖3 新鮮家兔膽汁紅外光譜

2.2 家兔膽汁對大鼠動脈體重、血壓的影響

模型組大鼠的血壓值高于假手術組，兩組平均動脈壓分別為15.8 kPa和12.8 kPa，說明高血壓模型建立成功。而膽汁組大鼠的血壓明顯較模型組低，平均動脈壓從15.8 kPa降到12.3 kPa，說明膽汁降壓有效果。同時膽汁組大鼠體重較假手術組及模型組低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 家兔膽汁對大鼠體重和血壓的影響（±s）

表1 家兔膽汁對大鼠體重和血壓的影響（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05

組別 只數 體重（g） 平均動脈壓（kPa）假手術組模型組膽汁組777 302±10 308±8 290±11 12.8±0.8*15.8±1.2 12.3±1.8*

3 討論

家兔飼養在中國具有較大的規模，家兔膽汁是其副產品之一，具有獨特的理化特性和藥理作用，它的開發利用逐漸受到關注，研究清楚其質量標準、藥理作用有利于其開發利用。動物膽汁成分和各成分的比例相對固定，其紫外、紅外光譜應該是固定不變的，可作為鑒別膽汁的一種可靠方法。劉養清等[2]觀察了牛、羊、魚、雞、豬等的紫外光譜，結果顯示各種動物的紫外光譜形狀各異，具有特征性。本實驗首次檢測了家兔膽汁的紫外光譜，與雞、牛、豬、魚、羊等動物膽汁的紫外光譜有明顯的區別，家兔膽汁在波長276 nm和386 nm處有吸收，吸收強度分別是0.419和0.314。對于單一化合物，紅外光譜可提供化合物的官能團、結構異構、氫鍵等信息，是研究分子結構的主要手段之一，紅外光譜分特征區和指紋區，4 000～1 250 cm-1范圍為特征區，主要來源于含氫原子的單鍵、各種三鍵和雙鍵的伸縮振動；4 00～1 250 cm-1范圍為指紋區，主要來源于各單鍵的伸縮振動和多數基團的彎曲振動，彎曲振動的能級差別小，因此指紋區的譜帶較密集，指紋區圖譜猶如人的指紋，能敏感反應化學結構上的細小差別。動物膽汁雖然不是單一化合物且化學成分復雜，但是其成分固定且各組分比例固定，因此在相同條件下測定其紅外光譜應該是一致的。劉養清等[3]證明各種動物膽汁的紅外光譜是確定的，可作為鑒別指標之一。本實驗所測得的家兔膽汁紅外光譜，在特征區與其他動物膽汁無明顯區別[4]，在指紋區則有特征性變化，1 015.39～1 090.64 cm-1處有一組3個小峰組成的吸收峰，其中，在1 043.77 cm-1處有一強吸收峰，在918.26～968.4 cm-1處也有一組小吸收峰，可作為鑒別家兔膽汁的可靠指標。

膽汁性寒、味苦，具有多種功效，是我國中藥的傳統用藥，近年膽制劑的研究開發和臨床運用取得一定成績，例如蛇膽川貝液，用于治療感冒咳嗽、氣管炎，受患者青睞；雞膽汁加糖調勻，治療小兒百日咳療效顯著；牛黃降壓片，降壓效果確切，其主要成分是牛黃、冰片等，牛黃中的磺酸去氧膽酸是主要的降壓成分。家兔膽汁的膽汁酸提取物制劑也有少量運用于臨床，例如利咽靈片，用于治療小兒急性咽喉炎，也有制成利膽片，用于利膽、促消化。家兔膽汁含去氧膽酸和膽酸兩種膽汁酸，比例為9∶1，是提取去氧膽酸的理想材料。吳克霞等[4]證明從家兔膽汁中提取的去氧膽酸有降壓作用。楊履艷等[5]報道兔膽粉濾過液能降低垂體后葉素引起的ST段、T波抬高，提示家兔膽汁有擴張血管作用，具有開發為降壓藥的前景。但在膽汁提取過程中存在提取率低（只有3%）、破壞膽綠素、牛磺酸等降壓成分以及引入有毒化學物質等問題。膽汁是體內的正常成分，毒性較低，臨床上有直接利用豬膽汁綠豆浸膏治療高血壓[6]的做法，因此，本實驗直接觀察了家兔新鮮膽汁的降壓作用，結果顯示，膽汁能降低腎性高血壓大鼠的血壓，同時還能降低大鼠的體重，這可能與家兔膽汁中去氧膽酸舒張血管和降低血脂的功效有關。

[1]鄭惠珍，陳小源，梁洪英，等.川芎嗪對壓力超負荷大鼠血液流變學的影響[J].中國流變學雜志，2006，16（1）：9-11.

[2]劉養清，苑戎，趙慧輝.雞膽汁的紅外吸收光譜特性[J].光譜學與光譜分析，2002，22（5）：779-782.

[3]劉養清，劉二保.動物膽汁理化特性及藥用[M].北京：化學工業出版社，2002：50-55.

[4]吳克霞，李方才，張憲黨，等.兔膽酸類物質的制備及降壓活性的研究[J].山東醫藥工業，1999，18（6）：28.

[5]楊履艷，馮芹喜.兔膽對垂體后葉素所致家兔心肌缺血保護作用[J].牡丹江醫學院學報，1997，18（2）：7-9.

[6]李建平，楊正華.綠豆豬膽降壓片的制備及臨床應用[J].中華醫藥雜志，2005，5（12）：36-37.