P-選擇素和p16基因在乳腺癌中的表達及意義

張占東

·論著·

P-選擇素和p16基因在乳腺癌中的表達及意義

張占東

目的探討P-選擇素和p16基因在乳腺癌組織中的蛋白表達及其與侵襲轉移和TNM分期的關系。方法采用免疫組化方法(S-P法)檢測52例乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達。結果乳腺癌組織P-選擇素蛋白表達陽性率明顯增高，而正常乳腺組織中未見陽性表達(P＜0.01);乳腺癌組織p16基因蛋白表達陽性率明顯低于正常乳腺組織(P＜0.01)。乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達均與淋巴結轉移和TNM分期有關(P＜0.05或＜0.01)。乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達呈顯著負相關(r=－0.72，P＜0.01)。結論P-選擇素和p16基因蛋白表達與乳腺癌的發生發展、侵襲轉移和TNM分期密切相關，二者表達的聯合檢測對評估乳腺癌淋巴結轉移程度和TNM分期可能有一定價值。

P-選擇素;p16;乳腺癌

乳腺癌是發達國家女性最常見的惡性腫瘤，國內的發病率也呈逐年上升趨勢。傳統的一些預后因素如腋窩淋巴結轉移情況、腫瘤大小、臨床分期以及組織學類型、分級等在判斷其預后方而雖有意義，但存在著一定的局限性。P-選擇素是一種黏附分子受體，由Johnmaton等［1］首先在激活的血小板膜上發現，其可介導癌細胞與內皮細胞、血小板的黏附，在腫瘤的發生發展和轉移中起重要作用。多腫瘤抑癌基因p16定位于9p21區域由三個外顯子和兩個內含子組成編碼相對分子量16 000蛋白質，即p16蛋白。P16蛋白的表達不但與多種惡性腫瘤的發生密切相關，而且可能與惡性腫瘤晚期的生物學行為及預后有關［2］。聯合檢測P-選擇素和p16在乳腺癌中的表達，國內外罕見報道。為此我們采用免疫組化方法檢測二者在乳腺癌中的表達，并結合臨床進行分析探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇于2006年10月至2011年9月在我院行乳腺癌根治術并經病理證實的乳腺癌標本52例，均為女性，年齡32～76歲，平均年齡54歲。標本均經10%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋。此外，選取同期22例正常乳腺組織作為對照組。

1.2 試劑與方法 P-選擇素和即用型兔抗人p16蛋白抗體均為美國Santa-Cruz公司產品。S-P試劑盒為美國Zymed公司產品。操作步驟按說明書進行。

2 結果

2.1 2組P-選擇素和p16的陽性表達比較 在乳腺癌組中P-選擇素陽性染色率為65.4%(34/52)，對照組未見陽性染色，2組差異有統計學意義(P＜0.01);乳腺癌組織中p16陽性表達率為53.8%(28/52)，對照組為81.8%(18/22)，2組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 乳腺癌P-選擇素與淋巴結轉移和TNM分期的關系 P-選擇素表達在乳腺癌腫瘤＞5 cm組、有淋巴結轉移組和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期組均分別明顯高于乳腺癌腫瘤≤5 cm組、無淋巴結轉移組和TNM分期Ⅰ、Ⅱ期組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 乳腺癌P-選擇素與淋巴結轉移和TNM分期的關系

2.3 乳腺癌p16表達與淋巴結轉移和TNM分期的關系 無淋巴結轉移組和TNM分期Ⅰ/Ⅱ期組明顯高于有淋巴結轉移組和TNM分期Ⅲ/Ⅳ期組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 乳腺癌p16表達與淋巴結轉移和TNM分期的關系

2.4 乳腺癌P-選擇素和p16表達的相關性 乳腺癌P-選擇素和p16表達呈負相關(r=－0.72，P＜0.01)。

3 討論

P-選擇素是選擇素家族的重要成員，Johnmaton等［1］首次報道了胰腺癌腫瘤細胞株有P-選擇素的表達。其在腫瘤轉移中的具有雙重作用。一方面，直接介導腫瘤細胞與血管內皮細胞的黏附。Pottratz等［3］研究表明，內皮細胞P-選擇素的表達的提高可以增強小細胞肺癌細胞與激活的內皮細胞之間的黏附。另一方面，P-選擇素與整合素協同介導激活的血小板與腫瘤細胞的結合。Borsig等［4］的實驗發現，血小板通過P-選擇素與某些人的癌細胞系發生黏附，在體內抑制這種相互作用會減弱腫瘤的轉移。本研究顯示，乳腺癌P-選擇素表達水平明顯高于正常乳腺組織，提示其在乳腺癌的發生過程中可能起重要作用。正常乳腺組織未見P-選擇素陽性表達，這可能由于在正常條件下內皮細胞未受刺激和激活。還有，P-選擇素表達在乳腺癌腫瘤＞5 cm組、淋巴結轉移陽性組和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期組均分別明顯高于其對應組，提示高表達的P-選擇素通過介導內皮細胞、血小板與癌細胞黏附，參與了乳腺癌浸潤轉移過程，亦說明P-選擇素陽性表達的乳腺癌易于浸潤轉移。總之，P-選擇素與乳腺癌的原發腫物大小、淋巴結轉移和TNM分期密切相關。

P16作為一種多種腫瘤抑制基因是1992年Traris在研究黑色素瘤的細胞周期依賴激酶(CDKs)和相應周期蛋白結合的蛋白時發現的p16蛋白可直接與細胞周期素D(cyclinD)競爭性結合細胞周期素依賴激酶CDK4和CDK6的結合，阻止細胞從G1期進入S期，抑制細胞無限增殖，防止癌變［5－7］。因此，當p16基因缺失、突變而失活時使p16蛋白表達缺失時抑制腫瘤增生的能力降低，導致細胞異常生長。其表達與多種腫瘤的轉移潛能密切負相關，突變后其抑制腫瘤的能力喪失。本研究發現其乳腺癌組織表達陽性率明顯低于正常乳腺組織，提示p16抑制基因的喪失或突變使其抑制腫瘤的能力喪失，可引起細胞癌變的發生。本研究還發現p16表達陽性率在乳腺癌有淋巴結轉移組和TNM分期III、IV期組均分別明顯低于其對應組，表明抑癌基因p16與乳腺癌的淋巴結轉移和TNM分期密切相關。

通過本研究還顯示乳腺癌P-選擇素和p16表達呈顯著負相關(r=－0.72，P＜0.01)，我們認為P-選擇素可能影響乳腺癌組織中抑癌基因p16的表達促進腫瘤轉移，而抑癌基因p16也可能通過影響乳腺癌組織中P-選擇素的表達抑制腫瘤轉移，P-選擇素高表達和抑癌基因p16低表達共同提示乳腺癌侵襲轉移的可能性，二者的聯合檢測對評估乳腺癌淋巴結轉移程度和TNM分期可能有一定價值。

1 Johnmaton GI，Cook RG，McEver PR，et al.Cloning of GMP-140，a granulemembrane protein of platelets and endothelium sequence of similamity to proteins involved in cell adhesion an infammation.Cdll，1989，56: 1033-1044.

2 Mc Carty QJ，Mousa SA，Bray PF，et al.Immobilized platelets support human colon carcinoma cell tethering，rolling and firm adhesion under dynamic flow conditions.Blood，2000，96:1789-1797.

3 Pottratz ST，Hall TD，Scribbner WM，et al.P-selectin mediated attachment of small cell lung carcinoma to endothelium cells.Am J Physiol，1996，217:1918-1923.

4 Borsig L，Wong R，Feramisco J，et al.Heparin and cancer revisited:mechanistic connections involving platelets，P-selectin，carcinoma mucins and tumor metastasis.Proc Natl Acad Sci USA，2001，98:3352-3357.

5 郭洪斌，張培，王斌，等.p16蛋白、CerbB 2在乳腺癌中表達的意義.中國老年學雜志，2005，25:718-719.

6 曾谷清，周秀田，程愛蘭，等.p16蛋白和VEGF在乳腺癌組織中的表達及相關性研究.腫瘤防治研究，2004，31:257-260.

7 衛生部醫政司.中國常見惡性腫瘤診治規范(乳腺癌).北京:北京醫科大學與中國協和醫科大學聯合出版，1991.53-56.

R 737.9

A

1002－7386(2012)17－2582－02

10.3969/j.issn.1002－7386.2012.17.008

063000 河北省唐山市婦幼保健院普外科

1.3 判定標準 P-選擇素表達以整張切片中陽性(棕黃色)染色血管≥5條為陽性。p16以腫瘤細胞漿或細胞膜呈棕黃色為陽性表達。根據腫瘤細胞陽性數進行判斷，采用高倍視野隨機記數500個腫瘤細胞中的陽性細胞所占比例，分為4級，陽性細胞數＜5%為陰(－);陽性細胞數占6%～25%為輕度陽性(+);陽性細胞數占26%～50%為中度陽性(++);≥51%以上為強陽性(+++)。

1.4 統計學分析 計數資料比較采用χ2檢驗，相關性采用Spearman相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2012－04－17)