飲料中6種防腐劑的高效液相色譜法同時測定

　　摘要：目的:建立高效液相色譜法同時測定飲料中苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯等6種防腐劑的分析方法。方法：樣品用水溶解，去除蛋白后過濾待測。檢測時以甲醇-乙酸銨（0.02M）為流動相，經梯度洗脫，在238nm波長處進行檢測，以外標法定量。結果：6種防腐劑的加標回收率在93.2%～103.8%，相關系數0.9996～0.9999，檢出限0.01～0.03g/kg。結論：本方法簡單，快速，靈敏度高，重現性好，可以滿足飲料中防腐劑的檢測要求。
　　關鍵詞：高效液相色譜法防腐劑 飲料
　　中圖分類號：TQ文獻標識碼：A文章編號：1672-3791(2012)03(a)-0000-00
　　防腐劑是用于保持食品原有品質和營養價值為目的的食品添加劑，但是有研究表明，食用含過量防腐劑的食品有可能對人體健康產生不利影響。目前，在飲料中常見的添加劑有苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯等，這六種防腐劑均有相應的國標檢測方法，但并無同時測定方法。本文利用高效液相色譜對其進行了同時測定，且處理方法簡單快速，分析時間短，靈敏度高。
　　1 材料和方法
　　1.1 分析方法
　　1.1.1樣品前處理
　　乳飲料和果汁飲料：稱取5.00g（精確到0.01g）樣品于50ml比色管中，加少量水后分別加入5ml亞鐵氰化鉀溶液和5ml乙酸鋅溶液，再用水定容至刻度，搖勻后離心，取上清液過0.22μm濾膜，待測。
　　 碳酸飲料：稱取5.00g（精確到0.01g）樣品于50ml比色管中，超聲脫氣后用水定容至刻度，搖勻后過0.22μm濾膜，待測。
　　1.1.2檢測條件
　　檢測波長：238nm、柱溫：30℃、進樣量：10μl、流速：0.7ml/min、采用甲醇和0.02M乙酸銨溶液進行梯度洗脫，洗脫程序為：0~6min，甲醇10%；7~11min，甲醇70%；12~15min，甲醇10%；
　　2 結果
　　2．1．1 檢測波長的選擇 由苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸酯類的紫外吸收光譜圖可知，它們的最大吸收波長分別為223.3、254.0、256.4。本方法選定238nm為最測定波長，實驗結果表明，在此波長下，各組分分離良好，均可獲得較為滿意的吸光強度，且加標樣品中，樣品的溶劑峰和雜質峰對所測定組分不產生干擾。
　　2．1．2 流動相的選擇
　　由于苯甲酸、山梨酸與對羥基苯甲酸酯類的極性差異較大，因此無法采用等度洗脫在合適的時間將其全部洗脫，本方法用甲醇和0.02M乙酸銨溶液進行梯度洗脫，可以獲得滿意的分離度，而且檢測時間較短，可以在15min內同時檢測六種防腐劑。標準品譜圖見圖1
　　2．1．3 方法的線性
　　用超純水分別配制濃度為0.01mg/ml、0.02 mg/ml 、0.03 mg/ml 、0.05 mg/ml 、0.1 mg/ml的6種防腐劑混合標準溶液，測定峰面積，以峰面積Y和溶液濃度X（mg/ml）作標準曲線，得線性回歸方程及相關系數R。（見表1）
　　
　　2．1．4 方法的靈敏度和檢出限
　　在以上方法條件下，以3倍基線噪音確定方法的檢出限，得出苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯的檢出限分別為0.01g/Kg、0.003g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg。
　　2．1．5回收率和精密度
　　在空白樣品中分別添加三個不同濃度的混合標準溶液，各平行測定六次，計算回收率和精密度。測得苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯的回收率范圍分別為93.5%~102.9%、94.1%~101.5%、95.3%~101.2%、94.8%~103.8%、95.7%~100.6%、93.2%~99.3%。精密度分別是1.03%、1.22%、0.92%、
　　0.64%、1.35%、0.86%。
　　2．2樣品分析
　　應用本方法對市場采集的各種飲料樣本共30個進行檢測，其中碳酸飲料部分檢測出含苯甲酸，果汁飲料中部分檢出含山梨酸，對羥基苯甲酸酯類均未檢出。
　　3 小結
　　本方法能同時測定飲料中可能添加的6種防腐劑，縮短了工作時間，且靈敏度高，分離度好，適合于日常檢驗。