高效液相色譜法測定青葉膽片中齊墩果酸含量

摘 要：目的：建立青葉膽片中齊墩果酸的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法，Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃。結果：齊墩果酸進樣量線性范圍為46～230 ng，y=5487x+39280，R2=0.9991，平均加樣回收率為100.00%，RSD為1.24%（n=6）。結論：HPLC法簡單可行、結果可靠，可用于定量控制青葉膽片的質量。

關鍵詞：青葉膽片 齊墩果酸 高效液相色譜法

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2013）01（c）-0244-01

青葉膽片收載于中國藥典2010版一部中，由為青葉膽經加工制成的片，主治清肝利膽，清熱利濕。用于黃疸尿赤，熱淋澀痛。該標準采用薄層色譜法只對青葉膽片中的齊墩果酸進行了定性鑒別。本文建立了高效液相色譜法的外標法對青葉膽片中齊墩果酸進行含量測定，結果表明本文方法簡便、準確、可靠，可作為該制劑的含量測定方法。

1 儀器與試藥

日本島津全自動高效液相色譜儀，型號：LC-20AT，配備LC工作站；UV—2600型紫外分光光度計。齊墩果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110709-200505，供含量測定用）；青葉膽片（云南白藥集團麗江藥業有限公司，產品批號為20120901、20120906、20120907）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 mm）；流動相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。按外標法以峰面積計算含量。

2.2 溶液制備

對照品溶液的制備：取齊墩果酸對照品約10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

供試品溶液的制備：取重量差異項下的樣品，研細，細粉末約3.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取100 mL甲醇，加入錐形瓶中，稱定重量。加熱回流30 min，放冷，稱定重量，以甲醇補充失去的重量，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

陰性對照溶液的制備：按青葉膽片處方比例制成不含青葉膽的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 陰性干擾試驗

取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定。供試品溶液與對照品溶液色譜圖中具有相同保留時間的色譜峰，而陰性無干擾。

2.3.2 線性關系考察

精密稱取齊墩果酸對照品11.50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取對照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系列對照品溶液，分別吸取10 mL，按2.1項下色譜條件測定，以進樣量（ng）為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線。（表1）

得回歸方程y=5487x+39280，R2=0.9991。結果表明齊墩果酸進樣量線性范圍是46～230 ng。

2.3.3 精密度試驗

取齊墩果酸對照品約10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密吸取對照品溶液10 mL，連續進樣6次，依法測定。結果的RSD=0.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，在放置0，2，4，6，8 h時分別進樣測定。（表2）

結果含量的RSD=1.27%（n=5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.3.5 重現性試驗

分別稱取同批號20120901重量差異項下樣品6份，研細，細粉末約3.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取100 ml甲醇，加入錐形瓶中，稱定重量。加熱回流30 min，放冷，稱定重量，以甲醇補充失去的重量，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進樣測定。結果含量的RSD=1.21%（n=6），表明方法重現性良好。

2.3.6 加樣回收試驗

在已知含量的樣品粉末中，加入一定量的齊墩果酸對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定并計算回收率。由結果可見，回收率在95%～105%之間，RSD值為1.24%。測定方法回收率良好。

2.4 樣品含量測定（表3）

3 討論

取齊墩果酸對照品適量，用流動相溶液溶解，在200～400 nm波長范圍內掃描，結果齊墩果酸在210 nm處有最大吸收，故選210 nm作為檢測波長。

在試驗過程中，曾采用乙腈-水（20∶80）、甲醇-0.3%磷酸酸溶液（80∶20）等多種流動相，結果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動相甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）分離效果較好，且保留時間較短。實驗中還考察了不同柱溫（10、25、35、40℃）對色譜分離效果的影響，結果各柱溫對分離效果、保留時間的影響有明顯區別，柱溫為30℃分離效果好。因此確定以柱溫為30℃。

HPLC法簡單可行、結果可靠，可用于定量控制青葉膽片的質量。

參考文獻

[1]中華人民共和國藥典[M].化學工業出版社，2010，一部.