HPLC法測定蜜環(huán)菌中麥角甾醇含量

[摘要] 目的 建立蜜環(huán)菌中麥角甾醇含量的測定方法。 方法 采用高效液相色譜方法，采用Diamonsil（TM）C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇，流速1.0 mL/min，檢測波長283 nm；柱溫25℃。 結(jié)果 麥角甾醇進(jìn)樣量在2～8μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率為99.72%，RSD為0.19%。方法具有較高的專屬性、準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性和可行性。 結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、線性范圍寬、靈敏度好，為蜜環(huán)菌質(zhì)量評價提供了可靠依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 蜜環(huán)菌；麥角甾醇；高效液相色譜法

[中圖分類號] R284 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）02-104-02

蜜環(huán)菌[armillariella mellea（Vahl ex Fr.El.）]，別名榛蘑，隸屬于真菌門，層菌綱，傘菌目，白蘑科，蜜環(huán)菌屬[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，蜜環(huán)菌具有祛風(fēng)通絡(luò)、強(qiáng)壯筋骨作用，用于治療癲癇，腰腿痛及風(fēng)濕病等；也具有抗癌防癌、防治病毒性疾病、降低膽固醇、防止動脈硬化、穩(wěn)定血壓等功能[2]。麥角甾醇在蜜環(huán)菌中含量較高，可作為蜜環(huán)菌的質(zhì)量控制指標(biāo)之一，故本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測定蜜環(huán)菌中麥角甾醇含量的方法，以期為蜜環(huán)菌的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。麥角甾醇對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜醇（美國Fisher公司），其他試劑均為分析純（北京化工廠）；水為超純水（18.2ΩPa），0.45μm濾膜（安捷倫公司）；蜜環(huán)菌購于長春市歐亞商都。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取麥角甾醇對照品2.50 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得（0.50 mg/mL）。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取蜜環(huán)菌子實(shí)體粉末5 g，加石油醚（60～90℃）200 mL索氏提取6 h，提取物水浴蒸干，甲醇溶解，定容至5mL量瓶中，即得樣品液。

2.3 色譜條件[3-4]

色譜柱為Diamonsil（TM）C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇，流速1.0 mL/min，檢測波長283 nm；柱溫25℃。進(jìn)樣量為10μL。理論塔板數(shù)以麥角甾醇峰計(jì)不得少于3 000。色譜圖見圖l、圖2。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液4、6、8、10、12、14、16μL，注入液相色譜儀，測定吸收峰面積。峰面積分別為2 574.1，3 840.2，5 119.6，6 394.2，7 681.2，8 950，10 253.8。以麥角甾醇質(zhì)量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：Y=127 9.3X+5.389 3，r=0.999 9，麥角甾醇在2～8μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取麥角甾醇對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)5次，依法測定。吸收峰面積分別為6 439.1、6 433.8、6 438.2、6 435.8、6 440.5，RSD為0.04%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0、4、8、16、24 h注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為10μL，記錄峰面積積分值。吸收峰面積分別為3 591.2、3 477.5、3 463.5、3 519.8、3 542.4，RSD為1.46%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批蜜環(huán)菌子實(shí)體5份，按供試品制備方法制備，依法測定，峰面積分別為3 644.4、3 697.7、3 672.1、3 605.6、3 698.3，RSD為1.07%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知麥角甾醇含量的供試品6份，分別精密加入麥角甾醇對照品，按供試品方法制備樣品，按照含量測定項(xiàng)下操作，分別計(jì)算回收率。見表1。平均加樣回收率為99.72%，RSD值為0.19%，表明此方法穩(wěn)定可靠，準(zhǔn)確性高。

2.5 樣品含量測定

取蜜環(huán)菌子實(shí)體粉末，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算樣品中麥角甾醇的含量，結(jié)果為0.29 mg/g。此方法穩(wěn)定可靠，準(zhǔn)確性高，操作簡單。

3 討論

采用高效液相色譜法測定蜜環(huán)菌子實(shí)體中麥角甾醇含量，在流動相為甲醇，檢測波長為283 nm，柱溫為25℃，理論塔板數(shù)按麥角甾醇計(jì)不低于3 000的條件下，麥角甾醇在2～8 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，加樣平均回收率為99.72%，RSD值為0.19%。方法穩(wěn)定可靠，準(zhǔn)確性高，操作簡單，為蜜環(huán)菌的質(zhì)量評價提供了科學(xué)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 秦俊哲，呂嘉櫪.食用菌栽培學(xué)[M].西安：西北農(nóng)業(yè)科技大學(xué)出版社，2003：213.

[2] 李巧云，翟春，居紅芳，等.榛蘑粗多糖提取工藝的研究[J].化學(xué)世界，2004，45（7）：372-375.

[3] 張方英，方保梅，張靜.靈芝制品中麥角甾醇的檢測方法[J].江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，19（1）：22.

[4] 張麗，王瑜杰，丁安偉.HPLC法測定靈芝孢子油中麥角甾醇的含量[J].江蘇中藥，2009，41（6）：52-53.

（收稿日期：2012-10-17）