筆筒草對四氯化碳所致急性肝損傷小鼠保肝作用研究

[摘要]目的 探討壯藥筆筒草醇提物對CCl4所致小鼠急性肝損傷的作用。 方法 采用CCl4腹腔注射造成急性肝損傷模型，將小鼠隨機分成6組（空白對照組、模型組、聯苯雙酯陽性藥組和筆筒草高、中、低劑量組），觀察各劑量組對小鼠血清谷丙轉氨酶（GPT）及谷草轉氨酶（GOT）的影響。 結果 與模型相比，給藥組能降低GPT、GOT活性，聯苯雙酯模型組及筆筒草醇提取高、中、低劑量組均有顯著性差異。 結論 筆筒草對于CCl4所致小鼠急性肝損傷具有一定的保肝降酶作用。

[關鍵詞]急性肝損傷；筆筒草；四氯化碳

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）02-28-02

筆筒草，又稱節(jié)節(jié)草（Equisetum ramosissimum），為木賊科木賊屬植物，全草入藥。主要分布于東北、云南、貴州、陜西、甘肅等地，也分布于世界熱帶、亞熱帶地區(qū)[1]。筆筒草主要成分為黃酮等[2]，中藥學記載木賊有利尿作用，之前有文獻報道過木賊草合劑治療急性黃疸型肝炎有較好效果[3]。近年來，藥理實驗表明本科植物具有抗心肌缺血、降血壓、調血脂、降血糖的作用。本實驗通過研究筆筒草醇提物對于CCl4所致的急性肝損傷降酶保肝作用，為進一步研究保肝壯藥，篩選其合理的組方提供科學實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明小鼠（SPF級），雌雄兼用，體重18～22 g，2月齡，共90只，購自廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，動物證號（SCXK桂2009—0002）。

研究所用筆筒草采自廣西南寧市老虎嶺水庫，經過廣西中醫(yī)藥大學壯醫(yī)藥學院韋松基教授鑒定為木賊科木賊屬植物筆筒草Equisetum ramosissimum全草。采集回來經打粉機打碎后過40目篩，其有效成分采用滲漉法提取，溶劑為95%乙醇。

1.2 藥物及試劑

CCl4（成都市科龍化工試劑廠，批號：20110222）；花生油（魯花一級壓榨花生油）；氯化鈉注射液（貴州科倫藥業(yè)有限公司，批號：8110101G）；GOT試劑（南京建成生物工程研究所 批號：20110616）；GPT試劑（南京建成生物工程研究所，批號：20110616）；聯苯雙酯滴丸（浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號：101207）。

1.3 實驗儀器

半自動生化分析儀RT—9000，（深圳雷杜生命科學股份有限公司，注冊標準號：YZB/粵0294—2006）；高速壹式離心機（上海安亭科學儀器廠）；數顯恒溫水浴鍋HH—4（國華電器有限公司）；手提式壓力蒸汽消毒器（上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司，產品標準：Q/CYAB10—2001）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械廠，標準號：Q/BKYY31—2000）。

1.4 四氯化碳肝損傷模型建立及動物分組

取體重18～22 g小鼠，雌雄兼用，隨機分成6組，每組15只。分設空白對照組、CCl4肝損傷對照組（即肝損組）、聯苯雙酯對照組和筆筒草高劑量40 g/kg、中劑量20 g/kg、低劑量10 g/kg組。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10 d。末次藥后1 h，除空白對照組外，各組均腹腔注射0.08% CCl4-花生油0.1 mL/10 g，造模后禁食不禁水，16 h后摘眼球取血約1.5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離約200 μL血清。測定血清GPT及GOT含量[4]。

1.5 指標測量

GOT指標測量：在室溫25℃放置10 min，505 nm，1 nm光徑，蒸餾水調零，測各管的血清的OD值，以（絕對OD=測定管OD-對照管OD），查標準曲線，通過擬合公式來求得相應的GOT活力單位。

GPT指標測量：在室溫25℃放置10 min，505 nm，1 nm光徑，蒸餾水調零，測各管的血清的OD值，以（絕對OD=測定管OD-對照管OD），查標準曲線，通過擬合公式來求得相應的GOT活力單位。

1.6 統(tǒng)計學分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，單因素方差分析檢驗組間顯著性差異，數據用（）表示，組間差異顯著性采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

實驗結果表明給藥組和聯苯雙酯組能降低GOT、GPT水平的升高，與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。見表1～2。

由表1、2 可知，CCl4損傷肝細胞后，促進肝細胞內酶釋放，模型組即CCl4組的GOT、GPT活性較空白組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），說明急性肝損傷病理模型成立。給藥組能降低GPT的含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）；給藥組和聯苯雙酯組能降低GOT的含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。說明筆筒草醇提物對CCl4所致急性肝損傷小鼠肝組織具有一定的保護作用。

3 討論

肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復雜過程。四氯化碳引起肝損傷是傳統(tǒng)的肝毒模型，它對肝損傷的毒性作用是通過脂質過氧化作用進行的，CCl4在肝微粒體細胞色素P-450酶激活下產生活性自由基CCl3，CCl3可進一步與氧反應，形成具有更強反應活性 的CCL3O-這些自由基與肝細胞內大分子發(fā)生共價結合，也可攻擊肝細胞膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化，損傷肝細胞膜的結構和功能，使膜通透性升高，導致細胞腫脹壞死[5-6]。筆筒草 Equisetum ramosissimum Desf.為木賊科木賊屬植物，全草入藥。分布于東北、云南、貴州、陜西、甘肅等地，也分布于世界熱帶、亞熱帶地區(qū)。近年來，藥理實驗研究表明本科植物具有抗心肌缺血、降血壓、調血脂、降血糖作用，是開發(fā)利用前景十分廣闊的中藥。國內外學者對木賊科多種植物的化學成分和藥理活性進行了研究，節(jié)節(jié)草的主要成分為3，4二烴基肉桂酸，芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、α-香樹脂醇（3）、β-谷甾醇（4）、β-胡蘿卜苷（5）、無羈萜-3β-醇（6）、3，4'，5，7-四羥基黃酮（7）、芹菜素 （8）、3，5，7，3'，4'-五羥基黃酮（9）、木犀草素（10）、3- 甲氧基-4-羥基肉桂酸（11）、槲皮素-3-O-α-L- 鼠李糖苷（12）、槲皮素-3-O-α-L- 吡喃鼠李糖苷（13）[7]。本研究表明筆筒草對于急性肝損的小鼠具有一定的保護作用，其作用機制可能是抑制血清中的GOT與GPT含量從而達到改善肝功能的作用，這對于研究廣西保肝壯藥作用有一定的現實意義。

[參考文獻]

[1] 李德坤，李靜，李平亞，等.木賊科植物研究概況Ⅱ.藥理活性[J].中草藥，2000，31（8）：附7-9.

[2] 斯拉衣，李國慶，周賢春，等.節(jié)節(jié)草有效成分的提取及鑒定[J].新疆大學學報，2007，24（3）：42.

[3] 湖南省常寧縣水口礦務局職工醫(yī)院傳染病室.木賊草合劑治療急性黃疸型傳染性肝炎73例小結[J].新醫(yī)藥學雜志，1974（3）：35.

[4] 徐淑云.現代藥理試驗方法（下冊）[M].北京：北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯合出版社，2001：1397.

[5] 吳東方，周本宏，羅順德，等.銀杏葉總黃酮對化學性肝損傷的影響[J].中草藥，1997，28（6）：348.

[6] Kalt FG，Past GB，Snyder R.Sewent toxicology recent advances in the toxicology of benzene，the glycolethers，and carbon tetrachloride[J].Ann Rev Pharmcol Toxicol，1987，27：379.

[7] 于紅威，嚴銘銘，楊智，等.節(jié)節(jié)草化學成分研究[J].中草藥，2011，42（3）：450.

（收稿日期：2012-09-28）