高效液相色譜法測定復方中藥強骨片中淫羊藿苷含量

[摘要] 目的 建立測定強骨片中淫羊藿苷含量的高效液相色譜法。 方法 色譜柱Kromasil100A C18 柱（250 mm× 4.6 mm，5 mm），以乙腈-水（28∶72）為流動相，檢測波長為270 nm。 結果 淫羊藿苷檢測濃度在1～128 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好，加樣回收率為86.34%，RSD為13.77%（n=5）。 結論 高效液相色譜法簡便、準確，可用于該制劑的質量控制。

[關鍵詞] 淫羊藿苷；強骨片；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）02-52-03

強骨片是用淫羊藿、骨碎補、龜板、補骨脂等中藥材制備的中藥復方制劑，具有強筋壯骨，預防骨質疏松的功效，用于調節中老年人因腎虛所致的性激素分泌不足而防止鈣的流失，預防和治療骨質疏松癥。淫羊藿具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效[1-4]，淫羊藿苷作為該方中臣藥淫羊藿的主要成分，其含量將直接影響該藥的療效。因此，筆者采用高效液相色譜法對復方中藥強骨片中的淫羊藿苷進行測定，為該制劑的質量控制提供客觀的評價方法。為有效控制該藥劑質量，采用高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量，以期建立復方中藥強骨片的質量控制方法[5-6]。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津SHIMADZU高效液相色譜儀（LBM-10A），多功能粉碎機（ST-02A型，永康市帥通工具有限公司）

1.2 藥品

淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110737-200415）；強骨片（安徽省生物制藥工程技術研究中心研制，批號分別為20102，20111，20112，20113，20114）；乙腈為色譜純，水為去離子水，甲醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100A C18柱（250 mm×4.6 mm，5 mm）；流動相：乙腈-水（28∶72）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm。

2.2 溶液制備

取所制備的強骨片15 g，用多功能粉碎機制成粉末，稱取12.5 g，加入燒瓶中，加甲醇40 mL，環流1 h，濾過，重復3次，合并濾液，冷至室溫并移至100 mL量瓶中，加甲醇定溶至100 mL，0.22 μm濾膜過濾，濾液即供試品溶液。精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1毫升含0.14 mg的溶液，作為對照品溶液。按強骨片制備工藝，制備缺淫羊藿的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取濃度（μg/mL）為1、2、4、8、16、32、64、128的對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進樣濃度（μg/mL）為橫坐標峰面積為縱坐標（Y）進行回歸分析，得回歸方程Y=27 916X-12 196，r=0.999 5（n=8）。結果表明，淫羊藿苷進樣濃度在1～128 μg/mL范圍內線性關系良好。R2=0.999 5。

2.4 專屬性試驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按上述相同的色譜條件分別進樣。結果，供試品溶液中淫羊藿苷與雜質分離完全，分離度高；陰性對照無干擾。保留時間為20.92 min，色譜見圖2。專屬性考察：照上述色譜條件，取對照品溶液、

圖1 淫羊藿苷對照品的線性回歸方程

供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀，供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖在同一保留時間有一相同色譜峰出現，陰性對照品在此保留時間無吸收峰，陰性對照品對測定無干擾。見圖2。

A.對照品溶液32 μg/mL

B.供試品溶液

C.陰性對照品溶液

A：對照品溶液32 μg/mL；B：供試品溶液；C：陰性對照品溶液

圖2 淫羊藿苷高效液相色譜圖

2.5 精密度試驗

取對照品溶液1 mL置于離心管中，用進樣針重復進樣5次。經數據處理，峰面積的RSD為0.92%，表明該方法重復性好。

2.6 穩定性試驗

供試品溶液1 mL置于離心管中，于0、3、6、9、24、36 h時進樣，數據處理結果顯示，淫羊藿苷峰面積的RSD為0.71%，供試品溶液在36 h之內具有穩定性。

2.7 重現性試驗

取批號為20102的強骨片5份，按照同一測定方法測定此批次強骨片中淫羊藿苷的峰面積，用外標法計算淫羊藿苷的含量。平均含量的計算結果為0.193 6 mg/g，RSD為1.30%，該方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

所制備的5個批次的藥品（批號為20102，20111，20112，20113，20114）各取1份，依供試品溶液制備方法制備溶液，分別加入淫羊藿苷對照品混合均勻，測定含量，計算加樣回收率。見表1。

2.9 樣品含量測定

樣品含量測定取5批樣品，按溶液制備項下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定含量。結果批號為20102，20111，20112，20113，20114的樣品中，每克藥粉中淫羊藿苷含量分別為0.192 0、0.215 8、0.186 2、0.201 3、0.177 1 mg/g。

3 討論

本實驗選用的測定方法是參照中國藥典（2005年版）規定的方法進行的[7]淫羊藿苷的檢測波長選為270 nm。對照品、供試品的淫羊藿苷吸收峰的峰型相同，供試品中淫羊藿苷的色譜峰與相鄰色譜峰分離良好，與陰性對照品吸收峰沒有干擾。

國家食品藥品監督管理局的《新藥審批辦法》規定，質量標準研究應以檢測方中君、臣藥為主，顧此選則方中臣藥淫羊藿苷的含量作為檢測指標，通過查閱大量文獻，選擇Kromasil 100A C18柱為色譜柱進行檢測。流動相乙腈/水之比為 28∶72。

目前，國內大多數廠家仍然采用紫外法對中藥復方制劑中有效成分進行含量測定，雖然簡便、快捷，但干擾因素多，準確度差。高效液相色譜法測定強骨片中淫羊藿苷的含量，準確度高，有利于對強骨片的質量有效控制[8-10]。

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（收稿日期：2012-12-17）