金毛鱗傘液體培養基優化試驗

摘要：以金毛鱗傘液體培養基優化為研究目標，在單因素試驗的基礎上進行正交試驗，對金毛鱗傘液體培養基配方的碳源、氮源、無機鹽（K2HPO4、MgSO4·7H2O）成分濃度進行篩選比較，以尋求最佳的液體培養基配方。結果表明，金毛鱗傘液體培養基最佳配方為：葡萄糖20 g/L、玉米粉 50 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L。

關鍵詞：金毛鱗傘；液體培養；配方優化

中圖分類號：Q949.329+.81；S646.1+9；Q93-335 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）02-0378-03

金毛鱗傘[Pholiota attrivella（Fr.）Kumm.]屬于擔子菌門（Basidiomycota）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）球蓋菇科（Strophariaceae）鱗傘屬[Pholiota（Fr.）Kumm.][1，2]，為珍貴的野生食用菌，不但營養豐富、味道鮮美，還具有較高的藥用價值[3]。野生金毛鱗傘主要分布在黑龍江、云南、新疆、吉林等?。ㄗ灾螀^），其野生菌種的馴化已經取得了良好進展[4，5]，并且金毛鱗傘作為一種大型木腐真菌相對較容易進行人工栽培。試驗旨在對金毛鱗傘的液體培養基進行優化，從而為其人工栽培奠定基礎，以推動金毛鱗傘的開發與利用。

1 材料與方法

1.1 供試菌種及基礎培養基

1.1.1 菌種 金毛鱗傘菌種引自吉林農業科技學院食用菌研究所，為斜面一級菌種。

1.1.2 菌種活化培養基 采用加富的PDA培養基（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L、瓊脂粉20 g/L）制作斜面培養基，用以活化菌種[6]。

1.1.3 對照培養基 選擇馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L作為液體培養基（空白對照）。

1.2 試驗設計

1.2.1 碳源單因素試驗 分別以玉米粉、洋蔥、柞木及可溶性淀粉來替換對照培養基中的碳源馬鈴薯，比較金毛鱗傘在各碳源處理培養基培養后的菌絲體干重產量[7]。其中，玉米粉取其浸提液，設置濃度梯度分別為40、45、50、55、60 g/L；洋蔥取其浸提液，設置濃度梯度分別為100、150、200、250、300 g/L；柞木依然取其浸提液，濃度梯度設置為200、250、300、350、400 g/L；可溶性淀粉取其溶液，設置濃度梯度分別為17、20、23、26、29 g/L。將不同碳源的濃度梯度由低到高分別編號為a、b、c、d、e，即a代表該碳源在單因素試驗中的最低濃度，e代表其最高濃度。

1.2.2 氮源單因素試驗 分別用豆粕、麩皮、硫酸銨及酵母浸膏替換對照培養基中的氮源蛋白胨，比較金毛鱗傘在各氮源處理培養基培養后的菌絲體干重產量。其中，豆粕取其浸提液，設置濃度梯度為40、45、50、55、60 g/L；麩皮取其浸提液，設置濃度梯度為20、25、30、35、40 g/L；酵母浸膏取其溶液，濃度梯度設置為3、4、5、6、7 g/L；硫酸銨取其溶液，濃度梯度設置為2、3、4、5、6 g/L。依照對碳源試驗組編號的方法，將不同氮源的濃度梯度由低到高分別編號為f、g、h、i、j，即f代表該氮源在單因素試驗中的最低濃度，j代表其最高濃度。

1.2.3 無機鹽濃度篩選 在對照培養基的基礎上，把處理中的無機鹽成分K2HPO4和MgSO4·7H2O的濃度分別設置為1、2、3、4、5 g/L梯度。比較金毛鱗傘在各無機鹽處理培養基中培養后對菌絲體干重產量最適宜的濃度。

1.2.4 正交試驗L9（34） 根據碳源單因素試驗、氮源單因素試驗、無機鹽處理濃度試驗的綜合結果，設計了L9（34）正交試驗，4個因素、3個水平分別是因素A：玉米粉，浸提液3個濃度水平分別為45、50、55 g/L；因素B：豆粕，浸提液3個濃度水平分別為40、45、50 g/L；因素C：K2HPO4，3個濃度水平分別為1、2、3 g/L；因素D：MgSO4·7H2O，3個濃度水平分別為3、4、5 g/L，各因素、水平組合見表1。其中葡萄糖濃度不變，仍舊是20 g/L，比較各水平組合對金毛鱗傘培養后菌絲體干重產量的影響[8，9]；并根據正交試驗的結果進行驗證培養試驗。

1.3 培養方法

液體培養基盛裝于規格為250 mL的三角瓶中，每瓶裝液量為80 mL，使用普通棉塞。培養基在121 ℃、0.105 MPa壓力下滅菌30 min，冷卻，放置24 h。打開超凈工作臺，調為慢風，并用紫外燈照射30 min，在超凈工作臺將斜面菌種接種到液體培養基上，每支斜面菌種接4個三角瓶。在26 ℃條件下靜置24 h。然后置于恒溫搖床上，設置轉速160 r/min、溫度26 ℃，培養7 d[8]；每個試驗單元、每個處理設置5次重復。

1.4 檢測方法

培養結束后，將獲得的培養物置于離心機中，設置轉速3 000 r/min、離心10 min，菌絲體水洗處理2次，在60 ℃烘箱內烘干至恒重[10-12]，分別測取各處理菌絲體的干重（g/L），取其中長勢正常的各重復均值，以此作為評價參考。

2 結果與分析

2.1 碳源對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響

各碳源處理及其濃度對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響結果見表2。由表2可見，金毛鱗傘對碳源的選擇性不高，對玉米粉、洋蔥、柞木、可溶性淀粉這幾種碳源均可利用。不過在以玉米粉為碳源的培養基中長勢良好，菌絲干重明顯優于其他碳源的菌絲干重；其中玉米粉濃度由50 g/L增加到55 g/L時，金毛鱗傘菌絲干重只有十分微小的增加，但卻要多消耗5 g/L的原料，所以從經濟角度比較上看，選取玉米粉50 g/L作為最佳的培養濃度是非常劃算的。由于玉米粉來源廣泛、價格適中，農民很容易買到，因此作為金毛鱗傘菌液體培養基原料就非常有現實意義。

2.2 氮源對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響

各氮源處理及其濃度對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響結果見表3，由表3可見，無機氮源硫酸銨對金毛鱗傘菌絲的生長效果不佳，而使用豆粕的效果卻非常突出。豆粕是大豆加工后的工業殘料，價格十分低廉，所以豆粕作為金毛鱗傘液體培養基的氮源是比較理想的選擇。在本次試驗中，豆粕的最佳添加量為50 g/L。

2.3 無機鹽對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響

各無機鹽處理濃度對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響結果見表4。由表4可見，無機鹽K2HPO4的最佳濃度并不是3 g/L，而是2 g/L；而MgSO4·7H2O的最佳濃度是4 g/L。

2.4 正交試驗對金毛鱗傘菌絲干重產量的影響

4因素、3水平正交試驗L9（34）對金毛鱗傘菌絲干重產量的比較結果見表5。由表5的極差分析可知，不同因素對金毛鱗傘菌絲干重產量影響的順序依次為玉米粉、豆粕、K2HPO4、MgSO4·7H2O。根據正交試驗結果得出的最佳組合為A2B3C3D2，即玉米粉浸提液濃度為 50 g/L，豆粕浸提液濃度為50 g/L， K2HPO4 3 g/L，MgSO4·7H2O 4 g/L。由于對照在正交設計中未出現，因此選取正交試驗中的A2B3C1D2組合作為正交試驗的對照，對最佳組合A2B3C3D2進行驗證。結果在驗證培養試驗中，A2B3C3D2組合培養后的菌絲體干重可達7.03 g/L，而A2B3C1D2為6.75 g/L，由此證明A2B3C3D2確實是最佳的組合。

3 小結

金毛鱗傘菌絲培養試驗結果顯示，在碳源單因素試驗中，濃度為50 g/L的玉米粉（玉米粉50 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的碳源培養基適合金毛鱗傘菌絲培養。在氮源單因素試驗中，濃度為50 g/L的豆粕（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的氮源培養基適合金毛鱗傘菌絲培養。在無機鹽試驗中，濃度為2 g/L的K2HPO4（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 2 g/L、MgSO4·7H2O 3 g/L）的培養基、濃度為4 g/L的MgSO4·7H2O（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨3 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L）的培養基適于金毛鱗傘菌絲培養。在上述試驗的基礎上，通過正交試驗L9（34）得到的金毛鱗傘菌絲培養最佳配方為：葡萄糖20 g/L、玉米粉 50 g/L、豆粕50 g/L、K2HPO4 3 g/L、MgSO4·7H2O 4 g/L。

參考文獻：

[1] 圖力古爾，田恩靜，王 歡.中國的球蓋菇科（一）鱗傘屬[J].菌物研究，2005，3（3）：1-50.

[2] 卯曉嵐.中國大型真菌[M].鄭州：河南科學技術出版社，1999. 231-235.

[3] 王 歡.鱗傘屬（Pholiota）真菌個體發育研究[D]. 長春：吉林農業大學，2006.

[4] 田恩靜，圖力古爾.中國鱗傘屬（廣義）已知種類及其分布[J].菌物研究，2004，2（1）：25-34.

[5] 楊 雪，曹哲明，劉吉開.金毛鱗傘的分離、鑒定及營養特性的初探[J].食用菌，2003，25（2）：11-12.

[6] 常 驥，曾憲錄，何 顯.白鱗傘的特性及栽培馴化研究[J].食用菌，2002，24（4）：15-17.

[7] 圖力古爾，王 歡，宋瑞清.光帽鱗傘子實體個體發育[J]. 東北林業大學學報，2008，36（1）：45-47，74.

[8] 唐玉琴，李長田，趙義濤.食用菌生產技術[M].北京：化學工業出版社，2008.28-68.

[9] 黃清榮，楊立紅，劉書濤，等.黃傘液體培養碳氮源的優選[J].吉林農業大學學報，2003，25（6）：611-614.

[10] 林應興，田景芝，童金華.黃傘的研究進展[J].亞熱帶農業研究，2009，5（2）：90-93.

[11] 常明昌.食用菌栽培學[M].北京：中國農業出版社，2003.27-31.

[12] 陳士瑜.珍稀菇菌栽培與加工[M].北京：金盾出版社，2003. 286-301.