紫藤根莖葉化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)

宋 曉 姜國(guó)良 趙雪梅

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

紫藤(Wisteriasinensis(Sims)sweet)屬豆科紫藤屬，喜纏繞上升，花序總狀下垂，花期4、5月，花藍(lán)紫色，先葉開放，穗大而美，具芳香，花粉為扁球形，觀賞價(jià)值高，廣泛應(yīng)用于園林、庭院綠化及盆景用材[1]。該物種為有毒植物，其豆莢、種子和莖皮有毒。紫藤花精油的主要成分是龍涎香精內(nèi)酷、里哪醇、α-淞油醇等，提煉芳香油，并有解毒、止吐瀉等功效[2-3]，紫藤花對(duì)香瓜枯萎病菌和白菜軟腐病菌具有良好抑制作用[4]。紫藤的種子有小毒，含有氰化物，可治筋骨疼。紫藤皮具有殺蟲、止痛、祛風(fēng)通絡(luò)等功效，可治筋骨疼、風(fēng)痹痛、蟯蟲病等[5-6]。據(jù)文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道紫藤瘤具有治療胃癌的作用，民間也有利用紫藤莖瘤配伍適量惹仁、野菱、訶子子治療胃癌。但目前為止對(duì)紫藤治療胃癌的活性成分研究尚未見(jiàn)到有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究旨在通過(guò)對(duì)紫藤的根莖葉三個(gè)部位的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，有望在抗癌領(lǐng)域有一定的應(yīng)用前景，開辟治療胃癌的新領(lǐng)域。

1 儀器與試劑

1.1儀器

電子天平，電熱恒溫水浴鍋(北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司)、DESAGA型雙波長(zhǎng)掃描儀CD60(上海康華生化儀器制造廠)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A(上海亞榮生化儀器廠)、SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)、硅膠板(青島市紅星硅膠試劑廠)、玻璃棒、50 ml容量瓶、500 ml圓底燒瓶、100 ml量筒、燒杯、25 ml錐形瓶、三角瓶。

1.2材料

紫藤的根、莖、葉分別采于2011年6月10日泰山醫(yī)學(xué)院校區(qū)。

1.3試劑

pH試紙、濾紙、稱量紙，95%乙醇、60%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、石油醚、甲醇、醋酸，茚三酮、三氯化鐵、硅鎢酸、碘-碘化鉀、碘化秘鉀、硫酸香草醛、鹽酸、鎂粉、α-萘酚、枸櫞酸、2%二氯氧化鋯、25%二氯乙酸乙酯。

2 方法與結(jié)果

2.1化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)

2.1.1提取液的制備

石油醚提取：取紫藤根、莖、葉各5 g，加入50 ml石油醚，加熱回流3 h，過(guò)濾。濾液待進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

醇提取：取紫藤根、莖、葉各5 g，加入95%乙醇50 ml，加熱回流2 h，過(guò)濾。濾液待進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

水提取：取紫藤的根、莖、葉各5 g，加入蒸餾水50 ml，80℃水浴加熱回流2 h，過(guò)濾。濾液待進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

2.1.2化學(xué)成分的預(yù)試

將上述所得濾液進(jìn)行化學(xué)成分的預(yù)試，用碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、硅鎢酸試劑檢查生物堿成分，用鹽酸-鎂粉反應(yīng)、ZrOCl2-枸櫞酸反應(yīng)檢查黃酮類化合物，用泡沫實(shí)驗(yàn)、氯仿-濃硫酸反應(yīng)檢查皂苷成分，用茚三酮試劑檢查蛋白質(zhì)、氨基酸，用三氯化鐵試劑檢查酚性成分，用Molish反應(yīng)檢查糖及苷類化合物，用堿性反應(yīng)檢查蒽醌類成分，用酸性苦味酸試劑檢查強(qiáng)心苷，用硫酸香草醛試劑檢查甾體萜類成分，用油脂實(shí)驗(yàn)檢查揮發(fā)油、油脂成分，用pH試紙檢查有機(jī)酸成分。

2.2薄層色譜預(yù)試法

2.2.1化學(xué)成分系統(tǒng)提取法

紫藤根、莖、葉各25 g，分別置于500 ml圓底燒瓶中，加入60%乙醇100 ml加熱回流1 h，過(guò)濾，濾液待用，濾渣再加入60%乙醇100 ml加熱回流1 h，過(guò)濾，合并濾液；濾渣加入95%乙醇75 ml加熱回流1 h，過(guò)濾，合并濾液；濾渣再加入95%乙醇75 ml加熱回流1 h，過(guò)濾，合并濾液待用，濾渣棄掉。

將上述濾液分次用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀35～40℃，減壓濃縮，濃縮至無(wú)醇味。 然后將濃縮浸膏置于分液漏斗中按1∶1分別加入石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取兩次，分別合并石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取液，每種萃取液依次轉(zhuǎn)移至各三角瓶中待用。

2.2.2薄層色譜分析

分別用毛細(xì)管吸取紫藤根、莖、葉的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取液適量，點(diǎn)到硅膠薄層板的起始線上，使用適當(dāng)?shù)恼归_劑展開，當(dāng)展開至距薄層板上邊緣1 cm處時(shí)，將板取出做好標(biāo)記，揮干展開劑，及時(shí)用鉛筆將斑點(diǎn)標(biāo)出，記錄Rf。將上述根莖葉四種萃取液的硅膠薄層色譜板在以氘燈為光源，200～600 nm下進(jìn)行紫外薄層色譜-雙波長(zhǎng)薄層掃描。

2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 通過(guò)進(jìn)行生物堿，氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)，有機(jī)酸，酚性成分，糖及苷類，皂苷，黃酮體，揮發(fā)油及油脂類，蒽醌類檢查，得出如下結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 紫藤根莖葉化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表

注：(1)A:水提取液；B:醇提取液；C:石油醚提取液；(2)“+++”表明反應(yīng)很顯著；“++”表明反應(yīng)較顯著；“+”表明有反應(yīng)現(xiàn)象；“-”表明無(wú)反應(yīng)現(xiàn)象或很弱。

2.3.2薄層掃描結(jié)果 通過(guò)薄層色譜掃描，得到掃描圖譜的分析結(jié)果見(jiàn)表2～4。

表2 紫藤根的薄層掃描分析結(jié)果

表3 紫藤莖的薄層掃描結(jié)果

表4 紫藤葉的薄層掃描結(jié)果

3 討 論

由表1結(jié)果分析可以推斷：①紫藤根莖葉中可能含有生物堿、黃酮類、蛋白質(zhì)、酚性成分、蒽醌類、甾體萜類及有機(jī)酸成分；其中根和莖中還含有皂苷、糖及苷類成分，莖中含有強(qiáng)心苷類成分；通過(guò)油脂實(shí)驗(yàn)，根莖葉三部分均未檢測(cè)出揮發(fā)油及油脂。②水提液中和醇提液中檢測(cè)出的化學(xué)成分類型較石油醚提取液中多。③水提液中含有的皂苷、蛋白質(zhì)和糖及苷類成分較醇提液和石油醚提液中多，醇提液中所含有的生物堿、黃酮類成分及蒽醌類較水提液和石油醚提液中多。④對(duì)石油醚提液所進(jìn)行的化學(xué)成分檢測(cè)，三氯化鐵試驗(yàn)有反應(yīng)現(xiàn)象，為陽(yáng)性結(jié)果，其他反應(yīng)均為陰性結(jié)果，說(shuō)明石油醚提液中可能含有少量的酚性成分。

由表2紫藤根氯仿的萃取液第一個(gè)點(diǎn)掃描結(jié)果，最大吸收波長(zhǎng)在320 nm和265 nm，由此推測(cè)，可能是黃酮類化合物的特征吸收，說(shuō)明根中可能存在黃酮類化合物；由表2紫藤根正丁醇提取液第二點(diǎn)的掃描結(jié)果，最大吸收波長(zhǎng)在240 nm和270 nm有吸收峰，蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280 nm處左右有較強(qiáng)的吸收，肽鍵在238 nm處左右有較強(qiáng)吸收，由此推斷根中可能含有蛋白質(zhì)類物質(zhì)；由表3紫藤莖氯仿萃取液第二點(diǎn)的掃描結(jié)果，最大吸收波長(zhǎng)在240 nm和280 nm，因?yàn)楸锦愒?40 nm左右有強(qiáng)吸收峰，在285 nm左右有中強(qiáng)吸收峰，由此可推斷可能是苯醌類化合物；由表4中葉-石油醚萃取液三個(gè)點(diǎn)紫外薄層掃描在420 nm和440 nm左右有特征吸收，推斷這些可能是色素類物質(zhì)。

綜上所述，紫藤根莖葉中可能含有生物堿、黃酮類、蛋白質(zhì)、酚性成分、蒽醌類、甾體萜類及有機(jī)酸等化學(xué)成分。本文首次對(duì)紫藤根莖葉進(jìn)行了化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)，初步確定了其可能含有的化學(xué)成分，為進(jìn)一步進(jìn)行該植物生物活性成分的確定、提取、分離研究提供了研究基礎(chǔ)。

[1] 包啟偉．福建西北部術(shù)本攀援植物觀賞與應(yīng)用[J]．浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，17(2)：225-228．

[2] 李峰，傅佑麗．紫藤花油化學(xué)成分的氣相色譜∕質(zhì)譜法分析[J]．曲阜師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，8(2)：81-83．

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[5] 全國(guó)中草藥匯編:下冊(cè)[M].第2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：620．

[6] 周國(guó)平．癌癥秘方驗(yàn)方偏方大全[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1992：175．