難溶性小分子藥物微球體內(nèi)外釋放及相關(guān)性研究進展

陳玉璽，浦益瓊，張 彤，陶建生，王 冰

(上海中醫(yī)藥大學，上海 201203)

藥物體外篩選過程中，很多難溶性小分子藥物都表現(xiàn)出很高的藥理活性，比如羥基喜樹堿、人參皂苷、紫杉醇等［1-3］。但由于這類藥物溶解度低，生物利用度不高，或劑型選用不合理等因素限制了此類藥物的臨床使用［4］。結(jié)合需長期治療的疾病，將難溶性小分子藥物制成微球制劑發(fā)揮其長效和緩釋作用，是解決此類藥物長期給藥及提高生物利用度的制劑手段之一。微球(Microspheres)是一種骨架型的骨架微粒，是液體或固體類藥物溶解和(或)分散于高分子材料基質(zhì)中，形成的粒徑通常在1～250μm之間的類球形或球形微粒［5-6］。該劑型可以通過控制藥物的釋放速率達到緩控釋的目的;可以通過控制其粒徑使其具有靶向性，快速達到靶向區(qū)域所需的藥物濃度，這樣就可以降低藥物給藥劑量，減少藥物對正常細胞組織的毒副作用;其制備方法廣泛，適用于水溶性、難溶性藥物，也適用于多肽蛋白類藥物的制備。通過將難溶性小分子藥物制成微球，使其發(fā)揮控制藥物釋放目的，已成為近年來開發(fā)難溶性小分子藥物緩控釋制劑的研究趨勢。對于緩控釋制劑研究來講，如果能保證制劑中藥物的體外釋放實驗與體內(nèi)吸收實驗結(jié)果具有較好的相關(guān)性，這樣的實驗數(shù)據(jù)才有實際意義［7］。

本文對難溶性小分子藥物微球的體內(nèi)外釋放及體內(nèi)外相關(guān)性方面的文獻進行整理和分析，對已有期刊論文或?qū)W位論文常用研究方法進行了歸納和比較，列舉了在考察難溶性小分子藥物微球釋放和吸收時常用的實驗方法和條件，希望為該類藥物微球制劑的體內(nèi)外評價提供借鑒或參考。

1 難溶性小分子藥物微球體外釋放研究

微球體外釋放試驗主要考察在特定條件下微球中藥物釋放的速率，一般分為體外長期釋放和體外加速釋放試驗兩種。

1.1 體外長期釋放試驗 體外長期釋放試驗是在與體內(nèi)生理環(huán)境相似的條件下考察藥物的釋放情況。在《美國藥典》(USP34-NF29)和《英國藥典》(BP2010)中緩釋制劑的釋放度檢查項下均收載了流通池法。2000年以后，流通池法多被用于一些特殊劑型如藥物釋放支架、混懸劑、植入劑及微球等研究中，很多著名國際藥企、藥品研發(fā)機構(gòu)的QC實驗室經(jīng)開始應用流通池法進行制劑的質(zhì)量控制［8］，該方法操作簡便、重復性好，適合于微球制劑的體外釋放評價。目前《中國藥典》2010年版未明確收載專門用于微球制劑的體外釋放度測定法，文獻調(diào)研表明，難溶性小分子藥物微球大多采用動態(tài)透析法或槳法進行體外釋放度測定。

1.1.1 動態(tài)透析法 動態(tài)透析法，即稱取適量載藥微球放入已平衡好的透析袋中，然后將其置于釋放介質(zhì)中進行振搖，定時取樣檢測的一種體外釋放評價方法。該方法有利于透析膜內(nèi)外介質(zhì)的交換，避免了釋放度測定中微球的損失以及介質(zhì)pH的改變［9］。

李像等［10］采用乳化溶劑揮發(fā)法(S/O/W)制備多西紫杉醇聚乳酸羥基乙酸(PLGA)/納米羥基磷灰石(nHA)復合微球，選用動態(tài)透析法考察兩種微球的體外釋放，釋放介質(zhì)為0.1%(W/V)吐溫80的PBS溶液(pH 7.4)，將透析袋置于37℃恒溫水浴振蕩器內(nèi)以80 r/min速度振蕩，定時取出10 mL釋放液，并補充等量新鮮釋放介質(zhì)，測定并計算微球中累積藥物釋放率。結(jié)果表明，微球中的藥物經(jīng)過體外突釋后，在復合微球中比在常規(guī)PLGA微球中釋放速度慢，而到達30 d時，復合微球和常規(guī)PLGA微球累積釋放率分別為62.40%和72.70%。李祥等［11］制備脂溶性藥物塞來昔布的PLGA緩釋微球，并用動態(tài)透析法考察其體外釋藥特征，將塞來昔布微球和釋放介質(zhì)裝入透析袋內(nèi)，扎緊后將其置于含0.02%的疊氮鈉的PBS(pH 7.4)溶液中，(37.0±1.0)℃水浴恒溫，70 r/min攪拌;分別在設(shè)定的時間點取出1 mL介質(zhì)，同時立即補加等量新鮮介質(zhì)。結(jié)果表明，微球在1 d內(nèi)無突釋現(xiàn)象，40 d時藥物累積釋放69.1%。王海鷗等［12］采用動態(tài)透析法考察了姜黃素聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)微球的體外累積釋放度;釋放介質(zhì)為含0.5%SDS-Na的PBS溶液(pH 7.4)，恒溫(37℃)水浴振蕩(70 r/min)，結(jié)果表明，微球71 h體外累積釋藥率為77%，表明微球具有良好的體外緩釋作用。周榮平等［13］采用動態(tài)透析法，精密稱取適量微球(含藥約2 mg)，均勻分散于6 mL生理鹽水中，裝入密閉透析袋，置于 100 mL生理鹽水中，在(37.0±0.5)℃，500 r/min條件下振蕩，定時取出釋放介質(zhì)5 mL，同時補充新鮮生理鹽水5 mL，進行處理檢測分析，結(jié)果表明:微球在剛開始24 h內(nèi)，藥物有突釋現(xiàn)象，利于藥物的快速起效;24 h后藥物大致呈現(xiàn)零級釋放;釋藥9 d可達累積藥物釋放量87%。

1.1.2 漿法 漿法具有通用性強、耐用性高、儀器最為普及的特點，2010版《中國藥典》二部附錄X C有載，建議首選該法進行體外釋放研究。

楊亞蘭等［14］采用乳化交聯(lián)固化法制備依托泊苷鼻用殼聚糖微球，槳法測定其釋放度，以pH7.4磷酸鹽緩沖液(含10%乙醇)250 mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，溫度(37±0.5)℃。結(jié)果表明其體外釋藥符合Higuchi模型。趙琳琳等［15］采用縮聚法制備姜黃素殼聚糖微球，采用漿法考察其體外釋放，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為37℃，溶出介質(zhì)為人工胃液，其中含有30%無水乙醇、2.0%十二烷基硫酸鈉，結(jié)果顯示微球在第5小時達到釋放平衡狀態(tài)，累積釋放率高達90%以上。郭振勇等［16］利用槳法測定丙硫異煙胺微球及原料藥的體外釋放性能，精密稱取丙硫異煙胺－PLGA微球適量，置透析袋內(nèi)，緊密封口后混懸于50 mL含0.1%聚山梨酯-80的PBS(pH 7.4)的釋放介質(zhì)中，在(37±1)℃ 恒溫水浴振蕩器上震蕩，取樣后補充新鮮介質(zhì);結(jié)果表明，微球體外釋藥符合 Higuchi方程(Q=4.4303t1/2+7.7241)，釋藥較慢。

1.2 體外加速釋放試驗 微球是一種緩釋劑型，藥物從微球中釋藥一般需要數(shù)天、幾個月甚至1年以上的時間，采用模擬體內(nèi)條件的釋放實驗對其進行質(zhì)量評價在實際操作中具有一定難度，因此用體外加速釋放預測微球的釋藥速率，對微球的質(zhì)量控制具有十分重要的現(xiàn)實意義［5，17］。

1.2.1 升溫法 蔣朝軍等［18］在研究微球體外加速釋放時采用對釋放介質(zhì)升溫的方法來達到。實驗顯示利培酮在不同溫度下均呈零級釋放，當溫度從37℃升高到45℃時，釋放時間也由15 d加速到了3 d。將45℃加速釋放的0、1、2、3 d累積釋放度與長期釋放0、5、10、15 d累積釋放度進行線性關(guān)系擬合，相關(guān)性良好，即可通過45℃的加速釋放來快速評價此微球的釋放特性。王辰允［19］在紫杉醇長效緩釋注射微球的體外釋放度加速測定中，采用50℃作為加速釋放溫度，同時振蕩頻率也由100 r/min提高到200 r/min，實驗結(jié)果表明加速釋放與體外常規(guī)釋放的相關(guān)性良好。冼遠芳等［20］在阿司匹林微球在體外加速釋放實驗中發(fā)現(xiàn)，載藥量不同的兩種微球37℃與55℃加速條件下釋放均具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.99574和0.99338，提示當釋放溫度高于聚乳酸玻璃化溫度2～3℃的條件可以加速聚乳酸微球的釋放。王愷源報道［21］，G2407-5微球在含 0.5%SDS的磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，37℃和55℃的釋放條件下，結(jié)果證明提高溫度可以有效升高G2407-5微球的降解速度，使微球釋放更快，可以很好的完成G2407-5微球在短時間釋放的目的。

1.2.2 調(diào)整介質(zhì)pH法 符旭東等［22］研究發(fā)現(xiàn)石杉堿甲微球的釋藥速度與釋放介質(zhì)的pH有著密切的關(guān)系;釋藥72 h內(nèi)，釋放介質(zhì)鹽酸濃度在0.1～1 mol/L時，微球的釋藥速度隨pH降低而降低，當鹽酸濃度降低至0.0001～0.01 mol/L時，釋藥速度則隨氫離子濃度的增加而加快;72 h后微球在0.1～1 mol/L鹽酸中的釋藥速度明顯加快。楊陽等［23］為快速評價鹽酸噻吩諾啡的釋藥特性，在加速釋放實驗中采用鹽酸為釋放介質(zhì)，通過實驗確定以0.0001 mol/L的鹽酸(5%乙醇)溶液為加速釋放介質(zhì)，在55℃條件下，加速釋藥與體外長期釋藥實驗具有良好的相關(guān)性。賀云霞研究發(fā)現(xiàn)［24］，pH值的變化對雙氯芬酸鈉殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微球釋放具有顯著性影響，微球在酸性條件下和水中釋藥速率最慢，8 h累積釋放量不超過40%;在人工腸液環(huán)境中緩慢釋藥，可達理想緩釋效果;在pH梯度環(huán)境下，微球初期釋藥較少，當pH值升至6.8時微球釋藥出現(xiàn)突釋，6 h內(nèi)釋藥完全。

2 難溶性小分子藥物微球體內(nèi)釋放

微球制劑中藥物含量一般較低，為檢測此類制劑體內(nèi)釋藥情況，通常采用以下兩種方法，即體內(nèi)滯留法［5，25］和血藥濃度法［5，26-27］。體內(nèi)滯留法通過給藥部位微球殘余藥量的測定來間接反映藥物體內(nèi)釋放速度，大多選用大鼠、小鼠為實驗動物，此法較易推廣，但必須具有熟練的解剖技巧及操作技巧。血藥濃度法為測定腦脊液或血中藥物濃度以評價體內(nèi)藥物吸收情況，多選用大鼠、兔、犬等實驗動物，此法要求有高精密度的分析儀器及熟練的操作技術(shù)。

2.1 體內(nèi)滯留法 潘峰等［28］采用改良國外檢測黃體激素釋放激素的方法，考察O/O法制備的石杉堿甲注射用緩釋微球體內(nèi)釋藥，具體為:將石杉堿甲微球注入大鼠腹部皮下后，定時取出注射部位的微球和肌肉組織，勻漿處理后測定藥物殘留量，間接獲取微球的體內(nèi)釋藥速率。實驗結(jié)果表明，微球釋藥呈三相模式，第一相是藥物首日突釋作用，第二相是藥物緩慢釋放的過程(1～3 d)，第三相藥物以每日6.7%的釋藥速度按零級速率(r=0.9978)幾乎釋放全部藥物(3～14 d)。楊陽等［29］在研究鹽酸噻吩諾啡緩釋微球體內(nèi)釋藥時，混懸后于大鼠皮下注射，給藥后定時剪取注射部位的皮下組織，測定殘留藥物量，計算出實際注射微球在大鼠體內(nèi)的釋藥率。結(jié)果表明其在大鼠體內(nèi)釋藥速率符合Higuchi方程 Q=20.49 t1/2－ 5.87，R2=0.9891。王彥君［30］研究微球粒徑對白藜蘆醇微球體內(nèi)釋藥情況的影響時，以小鼠為研究對象，皮下注射微球后定時取樣檢測藥物在體內(nèi)的滯留量，結(jié)果顯示，釋放開始4 h，藥物從5μm微球中釋放量(20.36%)與20μm微球中的釋放量(20.08%)相當;1 d后5μm微球中藥物釋放量(49.13%)明顯快于20μm微球(35.20%);第3天開始，5μm微球體內(nèi)釋放量則明顯慢于20μm微球;到第15天，20μm微球釋放量已達97.25%，而5μm微球僅為75.16%。

2.2 血藥濃度法 王九成等［31］制備包載氟維司群的3種微球，大鼠皮下給予3種不同處方的微球50 mg/kg 1次，利用LC-MS/MS法測定血藥濃度并計算主要藥動學參數(shù)，結(jié)果顯示，制備的3種微球均具有緩釋作用，從藥物釋放91 d的趨勢可見，在3種微球制劑載藥量相近的情況下，PLA-block-mPEG(相對分子質(zhì)量比為40000∶2000)包載藥物的微球半衰期較長，釋放效果較好。程國華等［32］制備了漢防己甲素肺靶向聚乳酸(TET-PLA)微球，并采用反相液相色譜法測定家兔注射微球后的血藥濃度，結(jié)果表明TET-PLA微球在家兔體內(nèi)藥動學過程符合二室模型，t1/2β為(286.49±237.55)min，AUC為(810.33±287.49)μg min/mL，該藥在體內(nèi)體現(xiàn)出緩釋效果。

3 體內(nèi)外相關(guān)性評價

按照2010年版《中國藥典》二部中“緩控釋制劑指導原則”中“只有當體內(nèi)外具有相關(guān)性，才能通過體外釋放曲線預測體內(nèi)的情況”，指導原則將體內(nèi)外相關(guān)性歸納為三種:①體外釋放曲線與體內(nèi)釋放曲線(即由血藥濃度數(shù)據(jù)去卷積而得到的曲線)上對應的各個時間點分別相關(guān)，這種相關(guān)簡稱為點對點相關(guān)，表明兩條曲線可以重合;②應用統(tǒng)計矩分析原理建立體外釋放的平均時間與體內(nèi)平均滯留時間之間相關(guān)，由于能產(chǎn)生相似的平均滯留時間可有很多不同的體內(nèi)曲線，因此體內(nèi)平均滯留時間不能代表體內(nèi)完整的血藥濃度－時間曲線;③將一個釋放時間點(t50%，t90%等)與一個藥動學參數(shù)(如AUC，Cmax或tmax)之間單點相關(guān)，但只能說明部分相關(guān)［33］。

體內(nèi)外相關(guān)性是指利用數(shù)學模型來描述藥物的體外釋放規(guī)律與體內(nèi)特性(藥物吸收量或血藥濃度)之間的關(guān)系［34］。體內(nèi)外相關(guān)程度的高低不僅與體外釋放度和體內(nèi)藥動學測定方法有關(guān)，也與采用的數(shù)據(jù)處理及分析方法有關(guān)［35］。難溶性小分子微球體內(nèi)釋放/吸收數(shù)據(jù)處理多選用模型依賴法、反卷積法、統(tǒng)計矩法，然后再利用線性最小二乘法回歸原理，將同批次微球體外釋放曲線和體內(nèi)釋藥/吸收曲線上對應的各個時間點的釋放率和吸收率回歸，判斷其體內(nèi)外相關(guān)程度。

3.1 模型依賴法 在點對點相關(guān)水平的分析中，體內(nèi)吸收數(shù)據(jù)的處理可以采用模型依賴法，是根據(jù)藥物動力學模型來計算，在實際應用時選擇幾個時間段將不同時間的體內(nèi)參數(shù)吸收分數(shù)等對應時間的體外釋放參數(shù)作圖，建立相關(guān)性，該相關(guān)性水平較高且確定了體外釋放與體內(nèi)吸收之間的直接關(guān)系。對于在體內(nèi)吸收呈一室模型的藥物，按Wagner-Nelson公式計算各時間點的吸收百分率，而對于雙室模型藥物則可采用簡化的Loo-Riegelman公式進行計算［35-36］。楊明世等［37］對尼群地平微球進行犬體內(nèi)藥代動力學以及體內(nèi)外相關(guān)性的研究，根據(jù)藥物在體內(nèi)的過程為一室(單室)模型，采用Wagner-Nelson法計算藥物在犬體內(nèi)的吸收百分數(shù)，對0.5～6 h藥物累積吸收百分數(shù)與對應時間的體外累積釋放百分率(ft)進行線性回歸方程擬合，其中當釋放介質(zhì)為17.4 mmol/L十二烷基硫酸鈉時，體外累積釋放百分數(shù)與體內(nèi)吸收分數(shù)相關(guān)系數(shù)較好(r=0.9851)，方程為Fa=1.6458 ft－27.642。李鳳前等［38］對靶向漢防己甲素緩釋制劑進行體內(nèi)外相關(guān)性評價，其中將體外釋藥百分數(shù)作為體外指標，靶部位的藥效學指標作為體內(nèi)釋藥指標，將漢防己甲素緩釋制劑在1、5、10、20、30、60 min時藥物的體外釋放百分數(shù)對平均肺動脈壓力下降百分數(shù)進行相關(guān)性分析，結(jié)果表明其相關(guān)性良好(r=0.9707)。王津等［39］對布洛芬微球進行體內(nèi)外相關(guān)性評價，體外實驗顯示布洛芬的釋藥行為符合Higuchi方程，在大鼠體內(nèi)的釋藥情況與單室模型擬合程度較高，同時對體外累積釋放度(X)和體內(nèi)吸收百分率(F)進行線性回歸，得回歸方程為F=1.5481X+5.1587(r=0.9887)，說明體外釋放度與體內(nèi)吸收分數(shù)具有良好的相關(guān)性。

3.2 反卷積法 反卷積(Deconvolution)法［40］是一種不依賴室模型而直接根據(jù)藥代動力學數(shù)據(jù)得到藥物體內(nèi)動態(tài)信息的數(shù)學計算方法，尤其適用于隔室模型模擬困難和緩控釋制劑的體內(nèi)外相關(guān)性研究，其擬合結(jié)果準確可靠。梅康康等［41］研究非諾貝特緩釋微球片的體內(nèi)外相關(guān)性時，采用了反卷積法，將各時間點的體內(nèi)吸收百分數(shù)與其對應的體外累積釋放百分數(shù)進行回歸分析，結(jié)果表明體外累積釋放百分數(shù)和體內(nèi)吸收百分數(shù)相關(guān)性較好(r=0.9225)。朱海燕［42］給家兔肌肉注射單劑量尼群地平聚乳酸微球，給藥后定時從耳緣靜脈取血，血樣處理后HPLC法測定，采用反卷積法計算，結(jié)果尼群地平微球的體內(nèi)累積吸收百分數(shù)與其體外累積釋放百分率相關(guān)性顯著(df=30，r1－0.001/2=0.554)。賀云霞［24］分別采用Wagner-Nelson法和反卷積法計算雙氯芬酸鈉殼聚糖－海藻酸鈉緩釋微球藥物體內(nèi)吸收百分數(shù)，與相應時間點的體外累積釋放百分數(shù)進行線性回歸，考察微球的體內(nèi)外相關(guān)性，由試驗結(jié)果可知:與Wagner-Nelson法相比，采用反卷積法計算得到的體內(nèi)吸收曲線與體外釋放曲線吻合度更好，相關(guān)系數(shù)更大(ft=1.1274 Ft-D+21.907，r=0.9711)，表明由反卷積法得到的體內(nèi)外關(guān)系的數(shù)學模型優(yōu)于Wagner-Nelson法，其體內(nèi)外相關(guān)性研究結(jié)果更可靠。

3.3 統(tǒng)計矩法 統(tǒng)計矩法(Statistical moment method)［35-36，43］是應用統(tǒng)計矩分析法分別算出平均體內(nèi)殘留時間、平均吸收時間、平均體內(nèi)釋藥時間以及體外平均溶出時間，從而通過處理體內(nèi)外數(shù)據(jù)得到較高水平的相關(guān)關(guān)系。Chu等［44］在研究可降解的石杉堿甲微球制劑體內(nèi)外相關(guān)性時，也嘗試使用了統(tǒng)計矩法，并獲得了較好的擬合相關(guān)性。李靜［45］研究報道采用統(tǒng)計矩分析原理建立體外釋放平均時間與體內(nèi)平均滯留時間之間的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，對應時間點的體外累積釋放量與體內(nèi)藥動學參數(shù)顯著相關(guān)(Y=3.4463X+4.6675，R2=0.9930)，提示可根據(jù)體外累積百分釋放量預測體內(nèi)對應時間點的體內(nèi)藥動學參數(shù)。

4 結(jié)語

對微球藥物體外釋放度測定，2000年以后國外多采用流通池法，而《中國藥典》至今還未明確收載專用于微球的體外釋放度測定方法，從已有研究來看，國內(nèi)研究者多采用動態(tài)透析法或槳法測定，對于方法簡便、重復性好的流通池法的相關(guān)實驗研究則較少。

進行體外加速釋放時，一般采用升溫或調(diào)整釋放介質(zhì)pH等方法。升溫多采用比聚合物玻璃化溫度稍高的溫度來縮短聚合物降解時間，該條件下聚合物變得松軟，通透性有所增強，藥物的分子運動也有一定程度地加劇。另外，由于聚合物微球的降解主要為酯鍵水解，故調(diào)整釋放介質(zhì)pH也可加速微球的降解，但相對于升高介質(zhì)溫度，調(diào)整pH加速的效果較為溫和，因此只單純通過調(diào)整pH不易達到加速微球釋放，需要結(jié)合升溫等其他操作來協(xié)同促進微球的加速釋放。

在微球體內(nèi)外相關(guān)性評價方法中，模型依賴法與反卷積法的分析結(jié)果是一致的，前者是后者的良好近似，后者對任何模型的藥物均適用;反卷積法則是雙向的，可以根據(jù)體內(nèi)藥動數(shù)據(jù)推算體內(nèi)藥物吸收數(shù)據(jù)，也可根據(jù)體外釋放數(shù)據(jù)預測體內(nèi)藥時數(shù)據(jù)［35］。

本文主要是希望通過體外特性研究來預測藥物在體內(nèi)的釋放行為，達到減少動物數(shù)量最終節(jié)省研究成本的目的。體外特性與體內(nèi)行為兩者之間相關(guān)程度，對于以微球藥物體外釋放特征預測體內(nèi)藥時曲線，指導和優(yōu)化微球處方設(shè)計，以及確立更合理的微球藥物體外釋放測定方法都具有指導意義。現(xiàn)有研究文獻多集中于微球體外或體內(nèi)釋放評價，對于體內(nèi)外相關(guān)性的研究并不多，研究者可以多進行一些各種聚合物微球的體內(nèi)外相關(guān)性研究。

［1］邢志華.載羥基喜樹堿葉酸-殼聚糖微球制備及其緩釋性［J］.哈爾濱商業(yè)大學學報:自然科學版，2012，28(4):390.

［2］曾燁婧，王連艷，馬光輝，等.快速膜乳化法制備載紫杉醇聚乳酸類微球［J］.過程工程學報，2010，10(3):568.

［3］Surh Y J，Na H K，Lee J Y，et al.Molecular mechanisms underlying anti-tumor promoting activities of heatprocessed Panax ginseng C.A.Meyer［J］.J Korean Med Sci，2001，16(suppl):S38-S41.

［4］蔡敏嫻，陳志奎，林禮務，等.載多烯紫杉醇聚乳酸-羥基乙酸微球的制備、表征及其藥物穩(wěn)定性［J］.中國組織工程研究與臨床康復，2010，14(21):3856.

［5］陳慶華，張 強.藥物微囊化新技術(shù)及應用［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.

［6］梅興國.微載體藥物遞送系統(tǒng)［M］.武漢:華中科技大學出版社，2009.

［7］曹德英.藥物劑型與制劑設(shè)計［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2009.

［8］孫 悅.流通池法控制制劑釋放的應用前景及體內(nèi)外相關(guān)性的探討［J］.天津藥學，2010，22(5):53-57.

［9］李 靜，蘇 慶，趙 剛，等.生物降解微球制劑的體內(nèi)外相關(guān)性研究進展［J］.中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2011，6(1):47-49.

［10］李 像，魏 坤，羅 云，等.多西紫杉醇PLGA/nHA復合微球的制備及體外釋放研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2009，19(19):2946-2950.

［11］李 祥，陳志良.塞來昔布微球的制備及體外釋放考察［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2010，30(11):918-919.

［12］王海鷗，李 攀，張良珂，等.載姜黃素的可生物降解微球的制備及其體外釋藥研究［J］.中國中藥雜志，2009，34(23):3021-3023.

［13］周榮平，姚雯雯，傅紅興，等.撲爾敏PLGA緩釋微球的制備及體外質(zhì)量評價［J］.藥物研究，2012，2(9):52-53.

［14］楊亞蘭，杜 青，敦潔寧.依托泊苷鼻用殼聚糖微球的制備及體外釋放度考察［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28(7):532-534.

［15］趙琳琳，韓 剛，宋樹美，等.姜黃素殼聚糖微球的制備及體外藥物釋放研究［J］.中藥材，2007，30(2):230-232.

［16］郭振勇，張 強.丙硫異煙胺肺靶向微球的制備及體內(nèi)外評價［J］.中國藥學雜志，2012，47(12):1834-1838.

［17］高科攀，陳慶華.聚酯類微球注射劑體外加速釋放試驗方法的研究進展［J］.中國新藥雜志，2009，18(7):614-617.

［18］蔣朝軍，楊清敏，胡筱菲，等.新型利培酮PLGA微球的制備及體外釋放研究［J］.中國藥學雜志，2011，46(2):126-127.

［19］王辰允.紫杉醇長效緩釋注射微球的研究［D］.北京:軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，2006.

［20］冼遠芳，程鳳梅，陳鴻玉.阿司匹林聚乳酸微球的體外加速釋放試驗［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28(16):1364-1367.

［21］王愷源.G2407-5緩釋微球注射劑的研究［D］.北京:軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，2011.

［22］符旭東，高永良，平其能，等.石杉堿甲乳酸-羥基醋酸共聚物微球的加速釋放度試驗研究［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2005，25(11):1007.

［23］楊 陽，高永良.鹽酸噻吩諾啡乳酸羥乙酸共聚物微球的加速釋放度實驗研究［J］.中國藥學雜志，2011，46(5):353-356.

［24］賀云霞.雙氯芬酸鈉殼聚糖-海藻酸鈉緩釋微球的研究及體內(nèi)外相關(guān)性評價［D］.沈陽:沈陽藥科大學，2004.

［25］Zolnik B S，Burgess D J.Evaluation of in vivo-in vitro release of dexamethasone from PLGA microspheres［J］.J Control Release，2008，127(2):137-145.

［26］Abazinge M，Jackson T，Yang Q，et al.In vitro and in vivo characterization of biodegradable enoxacin microspheres［J］.Eur J Pharm Biopharm，2000，49(2):191-194.

［27］Blanco-Prieto M J，Besseghir K，Zerbe O，et al.In vitro and in vivo evaluation of a somatostatin analogue released from PLGA microspheres［J］.J Controlled Release，2000，67(1):19-28.

［28］潘 峰，陳慶華，包泳初，等.石杉堿甲注射用緩釋微球制備方法的比較及其體內(nèi)外評價［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(6):423.

［29］楊 陽，高永良.鹽酸噻吩諾啡緩釋微球的體外釋放度及其體內(nèi)外相關(guān)性研究［J］.藥學實踐雜志，2010，28(5):369-371.

［30］王彥君.注射用白藜蘆醇生物可降解緩釋微球的研究［D］.沈陽:沈陽藥科大學，2011.

［31］王九成，劉繼三，梁 丹，等.氟維司群PLA-block-mPEG微球在大鼠體內(nèi)的藥動學研究［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(11):833-836.

［32］程國華，羅佳波.漢防己甲素肺靶向聚乳酸微球兔體內(nèi)藥動學的研究［J］.中國藥房，2005，16(10):737-738.

［33］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版二部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄X IX D.

［34］王 弘，郭代紅，郭紹來.制劑體內(nèi)相關(guān)性研究進展［J］.中國新藥雜志，2006，15(12):957.

［35］蔣學華，賈運濤，袁 媛，等.關(guān)于緩釋、控釋制劑體內(nèi)相關(guān)性試驗的討論［J］.中國醫(yī)藥導刊，2003，5(2):151.

［36］陳麗華，徐德生，馮 怡.中藥口服緩控釋制劑體內(nèi)外相關(guān)性研究進展［J］.中國中藥雜志，2008，33(3):333-338.

［37］楊明世，崔福德，王 亮，等.尼群地平緩釋微球的制備及其體內(nèi)外相關(guān)性的研究［J］.沈陽藥科大學學報，2003，20(2):79-82.

［38］李鳳前，陸 彬，陳文彬.肺靶向漢防己甲素緩釋微囊釋藥性能的體內(nèi)外相關(guān)性［J］.中國藥學雜志，2003，20(2):79-82.

［39］王 津，李柱來，陳莉敏.布洛芬緩釋微球的釋放性能及體內(nèi)外相關(guān)性研究［J］.中國藥業(yè)，2008，17(1):6-9.

［40］岳 鵬.卷積法在體內(nèi)外相關(guān)性研究中的應用［J］.藥學學報，2009，44(1):19-24.

［41］梅康康，胡容峰，馬鳳余，等.非諾貝特緩釋微球片體內(nèi)外相關(guān)性評價［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28(12):975-978.

［42］朱海燕.尼群地平原位凝膠及可生物降解微球的研究［D］.沈陽:沈陽藥科大學，2005.

［43］鄭梁元.控釋制劑中體內(nèi)外相關(guān)性研究的兩種方法［J］.中國藥科大學學報，1994，25(4):214-217.

［44］Chu D F，F(xiàn)u X Q，Liu W H，et al.Pharmacokinetics and in vitro and in vivo correlation of huperzine A loaded poly(lacticco-glycolic acid)microspheres in dogs［J］.Int J Pharm，2006，325(1-2):116-123.

［45］李 靜.注射用載雌二醇mPEG-PLA緩釋微球的制備及體內(nèi)外釋放研究［D］.濟南:山東大學，2012.