蒙古族人群原發性高血壓與AngII受體1基因多態性相關性研究

張迎軍 武慧強 劉曉宇

1.內蒙古醫學院附屬醫院，內蒙古呼和浩特 010010；2.內蒙古中醫醫院，內蒙古呼和浩特 010010

原發性高血壓是一種與多基因遺傳以及環境相關的疾病，其相關基因具有種族及地區性差異。人類血管緊張素Ⅱ受體1(AT1R)基因定位于3q21-q25染色體上，長1 kb，含1個外顯子，不含內含子。研究表明，AT1R基因A1166C點突變與人類原發性高血壓（EH）相關[1]。蒙古族是內蒙地區的主體民族，也是在內蒙開展高血壓病因學研究的代表性人群。2002年6月—2011年6月，該研究以蒙古族原發性高血壓患者作為研究對象，旨在探討AT1R基因多態與高血壓之間的關系，以期明確二者的相關關系，為高血壓防治開辟新思路。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該醫院心內科門診及體檢中心收治或體檢的蒙古族原發性高血壓患者及健康查體者為研究對象，入選病例間均無血緣關系，且三代內無與非蒙古族通婚史，均簽署知情同意書。原發性高血壓組(EH組)納入標準：按照2010年《中國高血壓防治指南》[2]診斷標準，收縮壓≥140 mmHg和／或舒張壓≥90 mmHg，同時排除繼發性高血壓、肝腎疾病、過量飲酒史。對照組（C組）納入標準：收縮壓<140 mmHg，舒張壓<90 mmHg，同時排除肝腎疾病、過量飲酒史。EH組共納入病例200例，其中男77例，女123例，年齡30～65歲，平均為54.6歲；C組共納入232例，其中男99例，女133例，年齡33～67歲，平均為53.2歲。兩組在性別構成比、年齡等因素差異無統計學意義（P>0.05）。而EH組血壓、甘油三酯、總膽固醇等指標均值分別為165.8/97.1 mmHg、2.2 nmol/L、4.8 nmol/L,均顯著高于 C組 (118.6/76.6 mmHg、1.5 nmol/L、3.9 nmol/L)（P<0.05）。

1.2 臨床指標測定及標本采集

用標準方法進行血壓測量；基礎血壓采用水銀柱袖帶血壓計測量，患者坐位，測量其右上臂血壓值，每隔5 min測1次，共測3次，取平均值。晨起空腹自肘前靜脈抽取靜脈血15 mL，一部分經離心分離出血漿和血細胞，存放-70℃冰箱，用于分子生物學檢測；一部分應用血液生化分析儀測定血液生化指標。

1.3 AT1R基因多態性檢測

基因多態性檢測應用多聚酶鏈反應（PCR）、瓊脂糖電泳等方法完成。酚一氯仿法進行DNA抽提，用primier5軟件設計包含AT1R多態位點的引物，所用引物為5’-GCT TTG TCT TGT TGC AAA AGG-3’和 5’-CCC ACT CAA ACC TTT CAA-3’，多聚酶鏈式反應(PCR)總體積 20 μL：其中 10Xbuffer 2 μL，2.5 mmol／L dNTP 1.6 μL，上下游引物(10μmol/l)各 0.4 μL，DNA 模板 1 μL，rTaq(5 U/μL)0.1 μL，ddH2O 14.5 μL；反應參數為 94 ℃預變性 3 min進入循環，94℃變性 30 s，50℃退火30 s，72℃延伸 30 s，共循環40次，最后72℃終末延伸10 min。酶切體系10 μL包括PCR產物 5 μL，AluI內切酶(10U／μL)0.5 μL，10×bufer 1.5 μL，ddH2O 3 μL，37℃水浴過夜；擴增產物經含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠電泳分型。

1.4 統計方法

采用SPSS13.0軟件對數據進行統計學處理，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，用t檢驗進行組間比較；定性資料組間比較采用χ2檢驗；組間遺傳平衡比較采用Hardy-Weinberg檢驗。

2 結果

2.1 遺傳平衡檢驗

AT1R基因A1166C位點的多態性表現為AA、AC和CC 3種基因型。EH組和C組蒙古族人群中AT1R多態頻率符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，等位基因的頻率分布趨勢基本相同，表明人群基因遺傳來自同一孟德爾群體，具有較好人群代表性，見表1。

表1 AT1R等位基因分布[n（%）]

2.2 AT1R基因型分布

EH組AT1R基因AA、AC、CC基因型分布頻率分布分別為71.5%、25.0%和3.5%，而在C組AA、AC、CC基因型分布頻率分布分別為 78.9%、14.7%和 6.4%，差異有統計學意義(P<0.05)，EH組和C組AT1R基因基因型分布比例不同，見表2。

表2 AT1R多態基因型分布[n（%）]

3 討論

原發性高血壓是多基因遺傳病，其發生是環境因素和遺傳因素共同作用的結果，流行病學調查表明，遺傳因素在高血壓發生發展中的作用較環境因素更為重要。EH的候選基因涉及RAS、交感神經一腎上腺系統、水鹽代謝、內皮細胞功能等至少150余種。雖然目前關于EH候選基因的研究有很大的進展，但研究結果不一致[2-7]。因此應充分考慮環境、年齡、性別、種族、疾病等因素的影響，才能找到高血壓的易感基因，闡明原發性高血壓的基因機制。腎素-血管緊張素系統(Renin Angiotensin System，RAS)與高血壓病相關的多種病理生理現象有密切聯系，血管緊張素II（AngII）在其中發揮極其重要作用，而AT1R參與調控和介導了AngII的主要心血管效應。研究也表明，AT1R基因的AC+CC基因型與EH有關[2-3]。

該研究所調查的蒙古族人群居住較集中，與外界通婚少，基本上以牧區為主，從地理位置及血緣上是相對封閉的人群，遺傳背景和生活方式較為一致，EH組與C組可比性較好，影響統計結果的混雜因素較少，是研究遺傳相關疾病的理想人群。該研究也表明，AT1R基因的各個等位基因頻率在正常血壓組和原發性高血壓人群中分布無明顯差異，而AC+CC型在原發性高血壓組的比例顯著高于正常對照人群，差異有統計學意義。提示，在蒙古族人群中，AT1R基因A1166C基因多態性可能與原發性高壓發病有關。

該研究與既往研究[8]存在一定差異，這可能與樣本來源、樣本量大小等多種因素有關。不同不同種族、人群的遺傳背景及環境因素差異較大。另外，由于條件所限，該研究樣本量較小，實驗結果的證明力相對較弱。

綜上，AT1R基因A1166C基因多態性位點可能是蒙古族人發生原發性高血壓病的危險因素，但由于原發性高血壓是一種與多基因遺傳相關的復雜疾病，AT1R基因A1166C作為一個單基因位點在蒙古族人原發性高血壓病發生發展中的作用還有待探討。

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