化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)免疫兒童乙型肝炎表面抗體的結(jié)果分析

黃軍林，黃夏聲，羅炬(廣西陸川縣疾病預(yù)防控制中心，廣西陸川537700)

化學(xué)發(fā)光法(CLIA法)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的，繼熒光免疫(FIA)、酶免疫(ELA)、發(fā)射免疫(RIA)測(cè)定以后的新一代標(biāo)記免疫技術(shù)，因其具有簡(jiǎn)便易行、標(biāo)記物制備非常容易、穩(wěn)定性高、標(biāo)本用量少、便于實(shí)現(xiàn)完全自動(dòng)化和不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)，特別是能在較短的時(shí)間內(nèi)得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此，受到檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者的廣泛關(guān)注。為研究CLIA法與ELISA法檢測(cè)HBsAb的效果，筆者采用兩種方法同時(shí)測(cè)定150份已接種乙型肝炎(乙肝)疫苗兒童的血清，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源:根據(jù)廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心2012年的工作要求開展全區(qū)兒童免疫規(guī)劃血清學(xué)調(diào)查，在本次調(diào)查中我縣根據(jù)全區(qū)統(tǒng)一調(diào)查方案，于2012年5月28日～2012年6月1日在本縣東、西、南、北、中五個(gè)方位隨機(jī)抽取五個(gè)行政村，每個(gè)行政村抽取6個(gè)年齡組(1歲～、2歲～、3歲～、4歲～、5歲～、6歲～組)，每個(gè)年齡組抽取5名常住兒童(當(dāng)?shù)鼐幼∪齻€(gè)月以上)。如果調(diào)查對(duì)象不足，可到鄰近的行政村里搜尋。每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共抽取30例兒童，共調(diào)查150例兒童。共抽取150例兒童的血液標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑:CLIA法使用雅培i2000化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑及質(zhì)控品均為美國雅培公司產(chǎn)品。ELISA法使用anthos2010型儀酶標(biāo)儀，由鄭州安圖生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，anthosfluido型洗板機(jī)由鄭州安圖生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，試劑由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供，按說明書使用。

1.3 結(jié)果判斷:CLIA法:HBsAb＜10 mIU/ml為陰性，HBsAb≥10 mIU/ml為陽性(B)。ELISA法:COV=陰性對(duì)照平均OD值×2.1，標(biāo)本OD值≥COV為陽性，標(biāo)本OD值＜COV為陰性。陰性對(duì)照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CLIA法和ELISA法檢測(cè)HBsAb結(jié)果:150份已接種乙肝疫苗兒童的血清中，CLIA法檢測(cè)結(jié)果陽性111份，陽性率為74.00%，陰性39份;ELISA法檢測(cè)結(jié)果陽性84份，陽性率為56.00%，陰性64份。化學(xué)發(fā)光法和ELISA法檢測(cè)HBsAb的陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.68，P=0.001，P＜0.01)。CLIA法檢測(cè)結(jié)果陽性而ELISA法檢測(cè)結(jié)果陰性的樣品有27份，CLIA法檢測(cè)結(jié)果陰性而ELISA法檢測(cè)結(jié)果陽性的樣品有2份。兩種方法同時(shí)檢測(cè)HBsAb結(jié)果見表1。

2.2 CLIA法和ELISA法的符合率:兩種方法檢測(cè)結(jié)果共同陽性有84份，共同陰性有37份。總符合率=(共同陽性+共同陰性)/總例數(shù)=(84+37)/150=80.67%。見表1。

表1 CLIA法和ELISA法檢測(cè)HBsAb結(jié)果

3 討論

CLIA 法和ELISA法同時(shí)檢測(cè)HBsAb結(jié)果顯示，兩種方法檢測(cè)結(jié)果有較高的一致性，但CLIA法檢測(cè)結(jié)果陽性率高于ELISA法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示CLIA法的敏感性高于ELISA法，與丁賢等報(bào)道CLIA法的精密度和敏感度高于ELISA法一致[1]。

HBsAb是由乙肝表面抗原(HBsAg)刺激或乙肝疫苗注射后，經(jīng)過6～23周免疫產(chǎn)生。常見于乙肝疫苗注射后、乙肝病毒(HBV)既往感染者、急性乙肝恢復(fù)期。在HBsAg消失前后或其后1～2個(gè)月出現(xiàn)，可以持續(xù)4～5年。HBsAb是HBV血清標(biāo)志物中，唯一具有保護(hù)性的抗體。一般來說，注射3針乙肝疫苗后1個(gè)月，90%～95%的人可以檢測(cè)到HBsAb;第2年仍保持在這一水平;第3年降到74%左右，HBsAb含量也下降。血清中HBsAb濃度越高，保護(hù)力就越強(qiáng)。目前認(rèn)為，HB-sAb具有保護(hù)作用的最低含量是10IU/L。但多數(shù)專家建議以100IU/L作為具有保護(hù)作用的最低濃度，因?yàn)閷?duì)乙肝疫苗反應(yīng)不佳者，在此濃度以下有可能發(fā)生HBV的無癥狀感染。有研究發(fā)現(xiàn)，盡管隨著時(shí)間的推移，疫苗應(yīng)答者HBsAb濃度下降到保護(hù)水平以下(＜10 mU/ml)或消失，但由于體內(nèi)存在“回憶反應(yīng)”，再次感染HBV后，HBsAb濃度可在2周內(nèi)明顯升高，從而形成機(jī)體抵抗HBV感染的發(fā)生。目前，HBsAb的測(cè)定多數(shù)采用ELISA法，該法是將HBsAg包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HBsAg，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。但ELISA法存在精密度差、靈敏度低，只能通過顯色反應(yīng)得到陰性或陽性結(jié)果，不能定量檢測(cè)、不能及時(shí)提醒低濃度HBsAb人群再次接受疫苗免疫等缺點(diǎn)。CLIA法是一種以發(fā)光物質(zhì)代替放射性核素或酶作為標(biāo)記物直接標(biāo)記抗體或抗原的一類免疫分析法。常用的發(fā)光劑為丫啶酯類。這類標(biāo)記物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特殊基團(tuán)，在發(fā)光免疫分析過程中直接參與發(fā)光反應(yīng)。這類物質(zhì)沒有本底發(fā)光，在反應(yīng)中能用于檢測(cè)低濃度或微量濃度的樣品。干擾作用也較少且標(biāo)記和偶聯(lián)后穩(wěn)定、理化性質(zhì)和免疫特性不改變。是一類發(fā)光效率很高的發(fā)光劑。可與抗體(或抗原)結(jié)合，生成具有化學(xué)發(fā)光活性強(qiáng)，免疫反應(yīng)特異性高的標(biāo)記抗體。CLIA法采用自動(dòng)化儀器分析，其操作的智能化程度高，敏感度高、特異性強(qiáng)，精密度和準(zhǔn)確性均可高于RIA，特別是檢測(cè)靈活性高，快速簡(jiǎn)便，檢測(cè)試劑穩(wěn)定并易于進(jìn)行室內(nèi)與室間質(zhì)量控制，線性范圍寬[2]，并能做到定量檢測(cè)，為接種乙肝疫苗后的機(jī)體免疫應(yīng)答狀況的評(píng)估提供可靠的依據(jù)。可作為乙型肝炎疫苗接種后HBsAb濃度動(dòng)態(tài)觀察的量化指標(biāo)，有助于及時(shí)、準(zhǔn)確地了解乙肝疫苗免疫后的效果，能為血清低濃度HBsAb的兒童是否再進(jìn)行疫苗加強(qiáng)接種提供一個(gè)有效的判斷依據(jù)[3]。

綜上所述，ELISA法檢測(cè)程序比較簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低，容易推廣，但不能定量檢測(cè)、不能及時(shí)提醒低濃度HBsAb人群再次接受疫苗免疫等缺點(diǎn)。CLIA法采用自動(dòng)化儀器分析，設(shè)備、試劑比較昂貴，目前在基層還不能廣泛使用，但其操作智能化程度高、線性范圍寬、敏感度高、特異性強(qiáng)、快速。因此，CLIA法是一種具有廣闊發(fā)展前景的非放射標(biāo)記的定量測(cè)定技術(shù)。

[1] 丁賢，劉樹業(yè)，周淑芬，等.兩種方法檢測(cè)血清HBsAg和抗－HBs的比較[J].肝臟，2011，16(4):324.

[2] 王小明，劉平.乙型肝炎病毒表面抗體化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)方法的建立[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(6):597.

[3] 鮑俊杰，楊紅玲，郭彩嬌，等.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)廣州地區(qū)兒童HBsAb結(jié)果分析[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2009，19(1):44.