EB病毒抗體診斷方法研究進展

吳尚文

廣西壯族自治區防城港市中醫醫院檢驗科，廣西防城港 538021

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一種能普遍感染人類且與多種惡性腫瘤發病有密切關系的DNA病毒。由于人類容易感染EB病毒，EB病毒感染導致的相關疾病，特別是惡性腫瘤的發病越來越受到研究人員的關注。自外國醫學研究人員Old LJ等[1]報告使用免疫擴散實驗確認EB病毒和鼻咽癌的血清學有關以來，后來諸多研究均發現抗EB病毒殼抗原的免疫球蛋白對鼻咽癌診斷有特異性。近年來，隨著檢驗技術的發展和在臨床上的大量應用，國內外學者對鼻咽癌患者血清EB病毒抗體診斷方法作了大量研究。

1 血清EB病毒抗體診斷方法研究進展

1.1 EB病毒不同檢測方法

長期的臨床研究發現EB病毒感染人體后，被病毒感染的人體細胞具有EB病毒的基因組，并產生相應的各種抗原，已確定的被病毒感染細胞可合成抗原有：①核抗原（EB virus asso-ciated nuclear antigen，EBNA）； ②膜抗原（membrane antigen of Epstien-Barr virus，MA）；③早期抗原（early intracellular antigen，EA）；④衣殼抗原（EB virus cap sid antigen，VCA）；⑤淋巴細胞識別膜抗原（LYDMA）。 由于抗原產生后機體會出現相應的抗體，通過血清EB病毒抗體的檢測可為臨床診斷提供依據，目前有大量報道顯示測定單個EB病毒抗原的抗體相比聯合測定多個抗體對鼻咽癌的診斷的特異性及靈敏度偏低，不能為臨床診斷提供準確的數據，為提高檢驗的準確性，現多采用多個抗體聯合檢測及聯合分析的方法。

近年來，隨著檢驗技術的發展及對鼻咽癌認識的提高，檢測EB病毒以輔助診斷鼻咽癌的方法越來越多，如免疫熒光和免疫酶法、酶中和分析、免疫印跡、免疫斑點、酶聯免疫吸附試驗 （ELISA）和聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）等，其中建立使用的 ELISA及PCR檢測EB病毒最受重視，ELISA相比其他檢測方法在鼻咽癌檢測、篩查方面特異性和敏感度均較高，操作更加簡單、快捷，且能自動化運行、檢驗結果易判斷。因此，此方法能有效提高工作效率，又能保證檢驗數據的準確度。

1.2 EB病毒不同抗體的檢測及臨床價值

對于鼻咽癌，EB病毒不同抗體其特異性與靈敏度存在差異。賈寧人等[2]對EBV感染后產生的急性反應蛋白衣殼抗原蛋白（VCA）的血清抗體進行了檢測，觀察表明抗VCA-IgA抗體在鼻咽癌組的陽性率高達69.2%，抗鼻咽癌組VCA-IgM表現為低陽性率，僅有7.7%。陳云等[3]用ELISA法定量檢測血清標本中EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA抗體水平，研究顯示，聯合檢測EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA診斷鼻咽癌，其陽性預測值達到99%，但陰性預測值只有43%。李筱莉等[4]收集300例鼻咽癌患者血清、鼻咽良性疾病91例及可能與EB病毒感染有關的其他癌癥患者100例，用ELISA法檢測血清VCA-IgA、EA-D-IgG和EA-D-IgA 3種抗體發現，聯合檢測VCA-IgA和EA-DIgG有互補作用，二者平行聯合檢測可提高鼻咽癌血清學診斷及篩查的敏感性，序列聯合檢測可提高鼻咽癌血清學篩查的特異性。郭麗萍等[5]聯合檢測EB病毒VCA-IgA和Rta-IgG抗體用于篩查鼻咽癌高危人群，研究表明從序列測定獲得的雙項陽性血清中篩查到的鼻咽癌比率高于單項VCA-IgA陽性血清。梁惠陶等[6]采用酶聯免疫吸附法檢測健康人群EB病毒IgA抗體，檢查得出IgA抗體陽性率隨著年齡的增長而增多。

臨床還報道，采用比較新的檢驗技術如用重組的EB病毒抗原對鼻咽癌進行血清學診斷，這些重組抗原有DNA聚合酶、胸苷激酶、核苷酸還原酶及復制激活劑Zta等。實驗室采用ELISA檢測EBNA1-IgA、EBNA1-IgG和Zta-IgG進行鼻咽癌篩查的文獻報道比較多，然而，各臨床文獻報道的檢測分析結果存在一定差異。胡維維等[7]對EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgA、Zta-IgG、VCA-p18-IgA 和 VCA-p18-IgG 6種酶聯免疫吸附檢測在血清學診斷鼻咽癌中的應用，探討哪種ELISA組合更為有效，研究表明臨床血清學診斷鼻咽癌，首選Zta-IgG或EBNA1-IgA；同時檢測兩種ELISA，宜采用Zta-IgG、EBNA1-IgA或Zta-IgG、EBNA1-IgG；三種ELISA同時檢測，可以提高特異度。因此推薦Zta-IgG、EBNA1-IgA、EBNA1-IgG 或 Zta-IgG、EBNA1-IgG、Zta-IgA3項。易冰等[8]研究用ELISA法檢測血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p18-IgG、Zta-IgA 和Zta-IgG等6種抗體水平，比較不同抗體組合時中山籍貫和外省籍貫兩類人群樣本的抗EB病毒抗體譜的差別，結果顯示中山原住居民感染的EB病毒常常處于激活狀態，而外省籍貫的中山臨時市民感染的EB病毒處于潛伏期時表達的EBNA1水平更高。程偉民等[9]采用ELISA檢測血清中EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG，結果顯示 EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG的敏感度分別為85%、83%和79%；三者組合的敏感度最高，為92%；EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的特異度分別為86%、86%和80%；三者組合的特異度最高，為93%。EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的聯合應用可以評估人群患鼻咽癌的危險度。易翔等[10]用免疫印跡法檢測鼻咽癌病人血清中抗EB病毒Zta-IgG抗體，結果顯示鼻咽癌組血清Zta-IgG陽性率為91.7%，對照組中10.7%Zta-IgG陽性，兩組差異有統計學意義 （P＜0.001）。免疫印跡法檢測鼻咽癌患者血清中Zta-IgG抗體有較高的敏感性和特異性，可以作為鼻咽癌患者診斷篩選的指標。沈亞華等[11]對在中山市人民醫院進行健康體檢的12 991名成人用ELISA法同時檢測血清中的EBNA1-I-gA、EBNA1-IgG、Zta-IgG三種抗體水平，結果顯示鼻咽癌檢出率分別為76.98/100000，7.698/100000和0/10，低危人群鼻咽癌檢出率最低。

ZE-BRA蛋白是調節EBV從潛伏狀態進入復制狀態的關鍵。NPC細胞中ZE-BRA蛋白表達提示EBV處于活躍的復制狀態。鄭裕明等[12]在應用ELISA法檢測鼻咽癌新發病例、鼻咽癌治療后復診病例、EB病毒VCA/IgA抗體陽性及陰性正常人群中的ZE-BRA/IgG抗體，研究結果顯示，鼻咽癌新發病例ZE-BRA/IgG的陽性率為92.7%，顯著高于其他各組 （P＜0.001），結果提示ELISA法檢測ZEBRA/IgG診斷鼻咽癌的特異性較常規免疫酶法檢測明顯提高；同時亦發現，VCA/IgA抗體陰性人群中，有2%的個體呈現ZE-BRA/IgG抗體陽性，這是否是其體內EB病毒抗原表達形式的差異所致，值得進一步研究。有研究者還采用ELISA方法檢測早期基因BRLF1基因編碼的Rta蛋白。Chang Y等[13]用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白，發現異位的Rta蛋白能夠誘導LMP1在上皮細胞和淋巴細胞中表達。朱文良等[14]應用Rta蛋白作為抗原，用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白抗體IgG，靈敏度達82.12%，特異度為91.78%，結果表明Rta-IgG具有比較高的靈敏度和特異度，可以用于鼻咽癌的臨床檢測和篩查。蔡永林等[15]用ELISA檢測Rta/IgG、EBNA1/IgA抗體，提示EB病毒Rta/IgG抗體表達與鼻咽癌分期無關。

2 EB病毒基因診斷研究進展

鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA分子水平與腫瘤的分期和臨床進展有明顯相關性，深入的研究發現鼻咽癌患者血漿存在著游離于細胞外的大量的EBV-DNA，并發現EBV-DNA隨著腫瘤消長的變化而變化，故認為血漿EBVDNA是腫瘤EB病毒裂解釋放到血漿中去。Leung SF等[16]在比較鼻咽癌患者血漿EBV-DNA和VCA-IgA檢出敏感性研究中發現，EBV-DNA檢出敏感性為95%，研究結果提示鼻咽癌患者血清EBV-DNA的敏感性和特異性均高于VCA-IgA，可用于作為診斷鼻咽癌的重要指標，與李杰[17]報道相似。張力等[18]采用熒光定量PCR的方法檢測鼻咽癌患者放射治療后血漿EB病毒（EBV）DNA水平，結果表明，在10例復發或有遠處轉移的患者中，6例患者血漿中可檢測到高水平的EBV-DNA，而在臨床緩解組的15例患者中，僅1例患者的血漿中檢測到低濃度的EBV-DNA，并且他們在隨后的隨訪中又發現，疾病復發的患者在出現明顯的臨床癥狀的6個月前就已有血漿EBVDNA水平的升高。祝曉芬等[19]應用Real-time PCR方法檢測EB病毒DNA含量，100例初治鼻咽癌患者、106例放療后及40例健康對照者，結果顯示血漿中游離EB病毒DNA在初診鼻咽癌者、放療后轉移和復發鼻咽癌者三組檢出的陽性率分別為90.7%、96.5%和100.0%，而健康者的陽性率僅為7.5%，持續臨床緩解者10%陽性；血漿EB病毒DNA定量檢測對初診鼻咽癌患者的診斷敏感性為97.0%，特異性為92.0%；另有3例持續臨床緩解而血漿EB病毒DNA水平升高的鼻咽癌患者，在隨后的6個月隨訪中，最終出現腫瘤復發或轉移，說明血漿EBV-DNA定量檢測是篩選NPC患者的敏感有效方法。Twu CW等[20]對114例鼻咽癌患者血清EBVDNA進行檢測分析，發現治療前高水平的EBV-DNA比低水平者在4年總生存率和無復發生存率上的差異明顯。廖莉婭等[21]分別采用實時熒光定量PCR法和酶聯免疫吸附法檢測34例NPC患者和30例健康體檢者的EBV-DNA和EBVCA-IgA，34例鼻咽癌患者EBV-DNA陽性率為58.82%，EBVCA-IgA陽性率為44.12%，兩者同時陽性為32.35%；30例健康體檢者EBV-DNA陽性率為10%，EBVCA-IgA陽性率為3.33%，兩者同時陽性為3.33%。結果提示患者血液白細胞EBV-DNA作為EB病毒的一種抗原物質，比EBVCA-IgA更能反映EBV在患者體內的實際情況，更適合在臨床實驗室使用。

3 總結

通過對EB病毒與鼻咽癌的相關文獻報道的復習可以看出，通過實驗室檢查血清EB病毒抗體對于鼻咽癌患者的篩選、診斷、療效判斷和復發監測均具有重要的指導意義。在鼻咽癌診斷方面，目前，實驗室檢查以聯合檢測早期抗原抗體和衣殼抗原抗體的方法應用最廣；臨床上報道的其他抗體檢測，如ZE-BRA-IgG抗體也在實驗室檢測中逐步進行研究使用。聯合各種對鼻咽癌的診斷、篩選有高敏感和高特異性的抗體指標進行輔助檢查，將為臨床診斷與治療提供科學的依據。

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