反相高效液相色譜法測定利培酮片的含量

鄧軒宇

利培酮片為苯并異惡唑衍生物，是新一代的抗精神病藥。其活性成份利培酮是一種具有獨特性質的選擇性單胺能拮抗劑，它與5-羥色胺能的5-HT2受體和多巴胺的D2受體有很高的親和力。利培酮也能與α1-腎上腺素能受體結合，并且以較低的親和力與H1-組胺能受體和α2-腎上腺素受體結合。利培酮不與膽堿能受體結合。利培酮是強有力的D2拮抗劑，可以改善精神分裂癥的陽性癥狀，但它引起的運動功能抑制，以及強直性昏厥都要比經典的抗精神病藥少。對中樞系統的5-羥色胺和多巴胺拮抗作用的平衡可以減少發生錐體外系副作用的可能，并將其治療作用擴展到精神分裂癥的陰性癥狀和情感癥狀。在這篇文章中，將采用反相高效液相色譜法來測定利培酮片的含量。

1 儀器與藥物

1.1 儀器選擇 選擇惠普(HP)AgiLent1100型高效液相色譜儀(HPLC)，相應的配套設施有二級管陣列紫外檢測器(DAD)，G1311A自動調配泵，G1315B、G1313A自動進樣器，以及G1316A可調柱溫恒溫箱及AgiLent色譜化學工作站;另外還需選擇上海醫科大學儀器廠生產的旋渦混合器，瑞士的SARTORIUS電子天平，美國的MICRO12-24高速離心機以及CSF-1A超聲波發生器。

1.2 藥品和試劑 實驗藥品為西安楊森制藥有限公司制造的利培酮，含量在98%以上，以及由此公司制造的利培酮片，藥品批號為 020319494，020319492，020319493，此外，美國Dikma公司的甲醇為色譜級，水為超純水，實驗其余試劑均選擇分析純。

1.3 對照品溶液 精密稱取利培酮0.1 g，加上甲醇溶解，保證容積在100 ml左右，然后放于冰箱，4℃保存。在臨用之前記住用準備好的甲醇將利培酮稀釋成所需濃度的利培酮對照品溶液[1，2]。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 選取美國Dikma公司鉆石色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 um)，流動相為甲醇-超純水(90∶10 比率)，流速為每分鐘0.8 ml，柱溫為30℃。UV檢測波長約為280 nm，滿標吸光度值(AUFS)確定為0.01，并確定進樣量5 uL。

2.2 測定樣品的制備 首先，取利培酮片(10片左右)進行精密稱重，并加以磨研至細成粉末。然后，精密稱取片粉，片粉量要適量，大約與利培酮25 mg相當，再將粉末放置于50 ml大小的容量瓶中，在50 ml容量瓶中加入適量的甲醇，接著采用超聲震蕩大約15 min，使其快速溶解，注意將甲醇稀釋到指定刻度[1]，輕輕搖晃，使其均勻，再用事先準備好的0.45 um微孔濾膜進行過濾。最后提取濾液大約1.0 ml，將濾液放置10 ml大小的容量瓶中，加入甲醇稀釋到指定刻度，隨后取5uL進樣。

2.3 對線性關系進行考察 首先，精密吸取事先準備好的標準為0.2 mg/ml的對照品儲備液，大小分別為0.5 ml，1.0 ml，2.0 ml，3.0 ml，4.0 ml，5.0 ml，然后將六種體積的同種溶液分別放置于大小為10 ml的容量瓶中，再加入甲醇稀釋到指定刻度，輕輕搖晃使其均勻，所得濃度分別為10 ug/ml，20 ug/ml，40 ug/ml，60 ug/ml，80 ug/ml，100 ug/ml，此為對照品溶液。接著分別取此對照品溶液5 uL進樣，測出峰面積。最后將峰面積(X)與其對應的濃度(Y)進行線性回歸，我們得出回歸方程為 Y=1.08×10-1X-3.02×10-1，r=0.9996(n=6)。實驗結果顯示:利培酮濃度在10ug/ml至100 ug/ml范圍內與峰面積線性關系保持良好。在此種條件下，當信噪比(S/N)≥2時，最低檢測限為0.1 ug/ml。

2.4 加樣回收率 取出標準為30.0ug/ml的對照品溶液大約10.0 ml，將其倒入標準為50.0ug/ml的測定樣品溶液中，注意溶液量大小確定為10.0 ml，按照老方法輕輕搖晃使其均勻，各取出5份，每份溶液大小為1 ml。并取5uL進樣分析，計算出加樣回收率。結果，我們計算出平均回收率為99.5%，RSD=0.36%(n=5)。我們再按照2.2項下測定樣品的制備步驟，制備出測定樣品，并在一天之內或隔天連續測定5次，每次測定均計算出精密度。結果一天之內RSD=0.52%，隔天RSD=0.61%。

2.5 樣品凍存 選擇濃度為50 ug/ml的對照品溶液，對其每周進行測定，每周測定次數保證1次以上，連續測定6個星期，在測定的過程中考察其穩定性。實驗結果顯示RSD=0.48%，說明對照品溶液在此種條件下至少在6星期之內穩定性良好。

2.6 樣品的測定 取利培酮片30片，分3批進行實驗，每批數量均為10片，然后按照2.2項下測定樣品的制備步驟制備出所需樣品，每批樣品均測定5次以上，測定的過程中注意計算樣品的含量[3]。

3 討論

利培酮片用于治療急性和慢性精神分裂癥以及其他各種精神病性狀態的明顯的陽性癥狀(如幻覺、幻想、思維紊亂、敵視、懷疑)和明顯的陰性癥狀(如反應遲鈍、情緒淡漠及社交淡漠、少語)，也可減輕與精神分裂癥有關的情感癥狀(如:抑郁、負罪感、焦慮)。有效利用反相高效液相色譜法測定利培酮片的含量，將對利培酮片的臨床效應帶來極大的影響。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).北京:化學工業出版社，2000:1-3.

[2]付崇銘，孟鍵，劉新泳，等.培酮片的RP-HPLC測定.中國醫藥工業雜志，2000，31(7):307-308.

[3]李華芳，李鳴，林治光，等.利培酮的血藥濃度與臨床效應的關系.上海精神醫學，11(4):189-192.