肝硬化病人血小板膜蛋白CD62P表達及臨床意義

，，，

(臨沂市人民醫院，山東 臨沂 276003 1 消化科； 2 檢驗科)

肝硬化是一種常見的慢性肝臟疾病，早期可無癥狀，后期可出現肝功能減退、門脈高壓及多系統受累的表現，如造血系統的損害。本研究采用流式細胞術檢測肝硬化病人血小板α-顆粒膜蛋白(CD62P)的表達，探討CD62P與肝臟功能受損嚴重程度的關系，現報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象

選取我科住院肝硬化病人30例，男25例，女5例；年齡35～68歲。肝硬化診斷均符合1995年第五次全國傳染病與寄生蟲病學術會議制定的標準。按Child-Pugh分級，A級10例，B級10例，C級10例。所有病例均無心、腦、腎疾病及糖尿病史，亦無急性感染。以我院保健查體中心體檢健康者20例作為正常對照組，男10例，女10例；年齡21～50歲。所有研究對象采血前1周均未服影響凝血功能的藥物。

1.2 方法

1.2.1CD62P檢測 兩組均于清晨空腹采集外周靜脈血2 mL，經38.4 g/L枸櫞酸鈉抗凝，加入4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL，室溫固定15 min，800 r/min離心5 min，取上清液即為富含血小板血漿。取50 μL加入藻紅蛋白標記的抗CD62P單克隆抗體(CD62P PE，美國Becton-Dickinson公司產品)20 μL，混勻作為測定管；另取富含血小板血漿50 μL加入磷酸鹽緩沖液(PBS)40 μL混勻作為對照管。兩管均室溫下避光作用20 min,立即加4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL混勻；加PBS液2 mL漂洗，以2 000 r/min離心5 min后棄去上清液，重復上述步驟2次，調整血小板密度為10×109/L。用流式細胞儀(FAC-Sean型，美國Becton-Dickinson公司)檢測，獲取數據用Cell Quest Plot軟件進行分析，得出CD62P陽性血小板百分率。

2 結 果

2.1 兩組血小板表面CD62P表達比較

肝硬化組和正常對照組CD62P陽性血小板百分率分別為(12.10±7.52)%和(2.74±1.05)%，肝硬化組顯著高于正常對照組(t=6.693，P<0.01)。

2.2 不同分級肝硬化病人血小板表面CD62P表達比較

A、B、C級肝硬化病人CD62P陽性血小板百分率分別為(5.88±2.03)%、(9.20±4.06)%和(20.67±7.61)%，隨著肝硬化程度的加重，CD62P表達增高(F=28.370，P<0.01)。

3 討 論

CD62P又稱P選擇素，主要存在于靜止血小板表面α-顆粒膜上，對血小板活化具有高度敏感性和特異性，是體內血小板活化的特異性指標[1]。本研究結果表明，肝硬化病人CD62P表達明顯高于正常對照組，且與Child-Pugh分級相關，說明肝硬化病人血小板高度活化，血小板有不同程度的破壞，肝硬化程度越重，血小板破壞越多。CD62P表達增高是反映血小板活化程度及功能狀態的標志之一[2-3]。

肝硬化病人大多脾功能亢進，血小板破壞過多，單核巨噬細胞系統會代償性分泌血小板,而血小板自身有巨型和畸形的形態變化，產生大體積血小板是為適應機體凝血的需要[4]。楊愛華等[5]認為，肝硬化病人隨著肝功能的減退和Child-Pugh評分升高，血小板平均體積明顯增大。THOMPSON 等[6]認為，體積越大的血小板含致密體越多，有更高的活性。通過觀察肝硬化病人血小板CD62P表達，能全面分析血小板的活化程度以及功能狀態，有助于早期發現肝硬化造成的岀血、凝血障礙，有助于判定病情和預后，對臨床治療有重要意義。

[1] MCEVER R P, BECKSTEAD J H, MOORE K L, et al. GMP-140, a platelet alpha-granule membrane protein, is also synthesized by vascular endothelial cells and is localized in Weibel-Palade bodies[J]. J Clin Invest, 1989,84(1):92-99.

[2] 唐中,周京國,黃文方,等. 肝硬化病人血小板胞內Ca2+濃度、CD62P、CD63及血漿內CD62P的檢測[J]. 中華肝臟病雜志, 2003,11(7):412-413.

[3] 梅斌,鄭凱,陳孝平. 斷流術后門靜脈血栓形成與血小板膜蛋白CD62P的關系[J]. 華中科技大學學報, 2006,35(4):548-549.

[4] 崔春吉,董海靜,金幸,等. 肝硬化病人外周血小板的變化及其意義[J]. 臨床消化病雜志, 2005,17(1):30-31.

[5] 楊愛華,薛會光. 肝硬化病人血小板4項參數的檢測及意義[J]. 齊魯醫學雜志, 2006,21(2):122-123.

[6] THOMPSON C B, EATON K A, PRINCIOTTA S M, et al. Size dependent platelet subpopulations: relationship of platelet volume to ultrastructure, enzymatic activity, and function[J]. Br J Haematol, 1982,50(3): 509-519.