滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定

陳美安姜建萍甄漢深馬文芳，張 翰

1.成都中醫藥大學，四川 成都 611137；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定

陳美安1姜建萍2甄漢深2馬文芳1，2張 翰2

1.成都中醫藥大學，四川 成都 611137；2.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

目的：建立滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定方法，為其質量控制標準提供依據。方法：采用紫外－可見分光光度法，以蘆丁為對照品，5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液為顯色系統，測定滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量，測定波長為510nm。結果：蘆丁在0.0108～0.0645mg/ml范圍內呈良好的線性關系，其回歸方程為：A＝12.363C＋0.0055（r＝0.9996）；平均加樣回收率為99.17%（RSD為0.66%）。結論：該方法快速簡便、結果準確，可作為滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮含量測定的有效方法。

滇桂艾納香；乙酸乙酯提取物；總黃酮；紫外－可見分光光度法

滇桂艾納香（Blumeariparia（Bl.）DC.），屬于菊科艾納香屬植物，為廣西民間常用壯藥，具有活血、止血、利水作用，用于經期提前、產后血崩、產后浮腫、不孕癥等［1］。目前，有文獻報道［2］在滇桂艾納香的預試驗研究中發現其可能含有黃酮類或其苷類物質。在其化學成分研究中，已分離得到芹菜素、小麥黃素、木犀草素、山奈酚、鼠李檸檬素等多種黃酮類化合物［3－5］。黃酮類化合物是一類存在于多種植物中的多酚類化合物，具有多種潛在的藥理活性。已有文獻報道了［6］不同產地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定，但對其乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定未見文獻報道，故本文采用紫外－可見分光光度法對滇桂艾納香乙酸乙酯提取物進行總黃酮含量測定，為其質量控制提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 Agilent 8453紫外－可見分光光度儀（美國安捷倫公司）；METTLER－AE100電子分析天平（瑞士METTLER公司）；蘆丁對照品（中國藥品生物檢定所，供含量測定用）；水為蒸餾水，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、甲醇、乙醇等試劑均為分析純。

1.2 藥材 滇桂艾納香藥材，分別采自廣西百色地區那坡縣、德保縣、凌云縣及龍州縣，經廣西中醫藥大學藥用植物教研室劉壽養副教授鑒定為菊科艾納香屬植物滇桂艾納香（Blumeariparia（Bl.）DC.）的干燥全草。

表1 不同產地滇桂艾納香藥材

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備 取滇桂艾納香干燥藥材粗粉適量，加10倍量70%乙醇滲漉提取，減壓濃縮得到乙醇濃縮液。再依次用石油醚（60～90℃）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，減壓濃縮得到各部位提取物。取乙酸乙酯提取物約2.0mg，精密稱定，用70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉移至25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 對照品溶液制備 稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對照品約26mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加70%乙醇約20ml超聲溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。2.3 黃酮的定性檢識 取同一批滇桂艾納香乙酸乙酯提取物3份，適量，加甲醇稀釋溶解，分別進行鹽酸－鎂粉反應、三氯化鋁－乙醇反應、氨熏試驗。結果表明滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中含有黃酮類化合物。

2.4 檢測波長的選擇 精密吸取蘆丁對照品溶液和供試品溶液，各2m l，分別用5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液顯色系統顯色后，以相應的試劑作空白，在400～800nm波長范圍內測定吸光度，尋求最大吸收波長。結果表明顯色后的對照品溶液和供試品溶液均在510nm處有最大吸收，故選擇測定吸收波長為510nm。

2.5 標準曲線的繪制 精密吸取蘆丁對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分別置于25ml容量瓶中，加水至10ml，加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻，放置5min，加10%硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置5min，加4%氫氧化鈉溶液10.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以相應的試劑作空白，在510nm波長處測定吸收值。以對照品溶液濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程：A＝12.363C＋0.0055，r＝0.9996。結果表明蘆丁在0.0108～0.0645mg/ml范圍內呈良好的線性關系。標準曲線見圖1。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液2.0m l，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后，連續測定6次，計算RSD值為0.11%（n＝6），結果表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液，各2.0m l，分別按2.5標準曲線操作項下依法顯色后，按0，20，40，80，120，160，200，240min測定吸收值，其測定值基本穩定，RSD值分別為0.61%和0.10%（n＝6），結果表明對照品溶液和供試品溶液在240min內穩定。

2.8 重復性試驗 取同一批樣品約2.0mg，6份，精密稱定，加入適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉移至25m l容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，含量平均值為58.61%，RSD值為0.15%（n＝6），結果表明重現性良好。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品約1.0mg，6份，精密稱定，分別加入一定量的蘆丁對照品溶液，用適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉移至25m l容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，測定平均回收率為99.17%，RSD值為0.66%（n＝6），結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果

2.10 樣品中總黃酮的含量測定 分別取四批滇桂艾納香乙酸乙酯提取物約2.0mg，精密稱定，加入適量70%乙醇超聲溶解，放冷，定量轉移至25ml容量瓶中，按2.5標準曲線操作項下依法顯色后測定吸收值，計算含量。結果見表3。

表3 樣品中總黃酮含量測定結果

3 討論

3.1 本文建立滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量測定研究，方法簡便、快速、準確，適合作為滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮含量測定的方法，為控制其質量提供科學數據。

3.2 本實驗參照紫外－可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA）［7］，以蘆丁為對照品，采用統一顯色方法，即5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液，使蘆丁的鄰二酚羥基官能團顯色，使其在510nm有明顯的吸收，且供試品溶液顯色后的最大吸收波長也為510nm。同時考察了5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液顯色系統的加入量，結果發現5%亞硝酸鈉溶液－10%硝酸－4%氫氧化鈉溶液的加入量分別為1.0m l、1.0m l、10.0m l時，供試品中的總黃酮含量最高。

3.3 在選擇樣品溶劑時，考察了30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇作為溶劑，結果表明用70%乙醇作為樣品的溶劑，測得總黃酮含量最高。

3.4 從不同產地樣品的總黃酮含量測定中可看出，其含量有一定的差別，其中廣西百色市龍州縣的含量最高，而廣西百色市凌云縣的含量最低。

［1］廣西壯族自治區衛生廳.廣西中藥材標準（第2冊）［S］.1996：274－278.

［2］姜建萍，陳晨，劉喜華等.滇桂艾納香化學成分預試研究［J］.廣西中醫學院學報，2009，12（13）：46－48.

［3］鄭丹，張曉琦，王英，等.滇桂艾納香地上部分的化學成分［J］.中國天然藥物，2007，5（6）：421－424.

［4］曹家慶，黨權，付紅偉，等.滇桂艾納香化學成分的分離與鑒定［J］.沈陽藥科大學學報，2007，24（10）：615－617.

［5］曹家慶，孫淑偉，陳歡，等.滇桂艾納香黃酮類化學成分的研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（7）：782－784.

［6］姜建萍，杜秀，丘琴，等.不同產地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定［J］.廣西中醫學院學報，2009，12（4）：44－46.

［7］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2010版（一部）［S］.北京：化學工業出版社，2010：附錄30.

R284.1

A

1007－8517（2013）07－0015－02

2013.02.23）

廣西自然科學基金項目（2010GXNSFA013195）。

陳美安（1984－），女，廣西玉林人，博士研究生，研究方向：中藥藥效物質基礎與質量標準化研究。

姜建萍（1965－），女，江蘇溧陽人，教授，博士，研究方向：中藥、民族藥質量與成分分析研究。