Survivin、PCNA在子宮內膜異位癥組織中的表達及其意義

李書艷，馮衛群

（浙江省舟山市中醫骨傷聯合醫院婦科，浙江舟山 316000）

Survivin、PCNA在子宮內膜異位癥組織中的表達及其意義

李書艷，馮衛群

（浙江省舟山市中醫骨傷聯合醫院婦科，浙江舟山 316000）

目的觀察凋亡抑制蛋白（Survivin）、細胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在子宮內膜異位癥組織中的表達及其意義。方法采用免疫組織化學法檢測子宮異位癥患者43例在位內膜組織和異位內膜組織及正常健康的子宮內膜組中Survivin和PCNA的表達水平。結果Survivin、PCNA在子宮內膜異位癥患者在位子宮內膜組和異位內膜組的表達與對照組比較差異均有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01），而在位子宮內膜組和異位內膜組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。結論Survivin和PCNA在子宮內膜異位組表達明顯增高，Survivin和PCNA可能與子宮內膜異位癥的發生密切相關。

子宮內膜異位癥；凋亡抑制蛋白質類；細胞增殖核抗原

子宮內膜異位癥（endometriosis，EM）是婦科最常見的疾病之一，是指具有生長功能的子宮內膜出現在子宮體以外的部分，其主要臨床表現為疼痛、不孕和其他癥狀，在育齡婦女中的發病率為10％～15％［1］。EM雖然是良性病變，但是卻具有局部播散、遠處轉移的惡性行為，治療后易復發，甚至發生惡性變，其發病機制目前仍不明確。因此，尋找EM的病因已經成為醫學研究熱點，異位子宮內膜細胞得以在宮腔外種植并繼續存活，與其凋亡及增殖特性改變有關。為此，本研究對細胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和凋亡抑制蛋白（Survivin）在子宮內膜組織中的表達進行分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2006年1月—2011年1月在我院婦產科經過手術后病理確診為EM患者43例，年齡24～43歲，平均（33.6±3.1）歲。所有入選對象均符合下列標準。①月經規律，無內科并發癥；②術前半年未服用過激素等藥物，按r-AFS分期標

準［2］，Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ期10例，Ⅳ期9例。選取同期因子宮肌瘤行子宮切除術而子宮內膜組織正常的患者20例為對照組，年齡26～39歲，平均（31.8±2.7）歲。2組患者年齡差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 免疫組織化學染色方法：對43例EM患者異位子宮內膜組織、在位子宮內膜組織和20例對照組子宮內膜組織進行免疫組織化學檢測。Survivin和PCNA鼠單克隆抗體均購于武漢博士德生物工程有限公司，SP試劑盒、二氨基聯苯胺顯色劑均購于北京中杉金橋生物技術有限公司，嚴格按照試劑盒染色操作程序進行。石蠟切片脫蠟至水后，在30mL的3％H2O2去離子水孵育10min以消除內源性過氧化物酶活性；抗原修復后分別滴加一抗，4℃過夜，PBS沖洗3次；滴加生物素標記的二抗工作液，37℃孵育30min，PBS沖洗3次；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃孵育30min，PBS沖洗3次；DAB顯色；自來水充分沖洗，蘇木素復染，脫水透明，常規封片。用PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判斷標準：Survivin和PCNA均為粗細不一的棕黃色顆粒，由我院2名病理科醫師觀察每張切片，染色為棕黃色顆粒為陽性，隨機選擇10個高倍視野進行觀察，每個視野觀察100個細胞中的陽性細胞比例，取平均數作為結果，其中無陽性細胞為（-），陽性細胞數＜25％為（+），25％～50％為（++），＞50％為（+++）。

2 結果

2.1 Survivin在EM及正常對照組表達情況：Survivin在在位子宮內膜患者中陽性率為79.06％，在異位內膜中陽性率為90.69％，在對照組中陽性率為10.00％，在位內膜和異位內膜陽性率與對照組比較差異有統計學意義（χ2=26.59、39.12，P＜0.01），而在位子宮內膜組和異位內膜組比較差異無統計學意義（χ2=2.27，P＞0.05）。見表1。

表1 Survivin在EM及正常對照組表達情況Table 1 Survivin expression in EM and normal control groups（n）

2.2 PCNA在EM及正常對照組表達情況：PCNA在在位子宮內膜組患者中陽性率為74.42％，在異位內膜組中陽性率為88.37％，在對照組中陽性率為40.00％，在位內膜和異位內膜陽性率與對照組陽性率比較差異有統計學意義（χ2=5.69、21.10，P＜0.05，P＜0.01），而在位子宮內膜組和異位內膜組比較差異無統計學意義（χ2=2.76，P＞0.05）。見表2。

表2 PCNA在EM及正常對照組表達情況Table 2 PCNA expression in EM and normal control groups（n）

3 討論

EM發病機制至今仍不明確，其中經血逆流學說是比較公認的機制，認為脫落的子宮內膜組織通過輸卵管逆流入腹腔而種植于腹膜表面，幾乎所有的婦女都存在經血逆流現象，但最終發生EM的卻是少數。有研究［3］認為這可能是增殖活躍、凋亡減弱的子宮內膜脫落后，隨經血逆流至其他部位后能繼續生長，引起EM。推測增值活躍和凋亡減弱是發生EM的關鍵因素。

Survivin是最近研究發現的抗凋亡因子，也是目前為止發現的作用最強的凋亡抑制因子，其具有抑制細胞凋亡及參與血管形成等功能，并且其只多表達在未成熟的組織及癌組織中［3-4］。PCNA是一種相對分子質量為36的酸性核內蛋白質，由261個氨基酸組成，參與DNA多聚酶的活性作用，與細胞的增長關系密切，近年來PCNA廣泛應用于惡性腫瘤及一些增生性疾病的研究中［5-6］。本研究中在位子宮內膜和異位內膜Survivin和PCNA陽性率與對照

組比較差異均有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01），而在位子宮內膜組和異位內膜組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。說明在增殖增強和凋亡減弱的雙重作用下，月經期脫落的內膜中存在繼續生長的內膜細胞，而這些能繼續生長的細胞隨著經血逆流至腹腔后繼續生長，從而發生了EM。在這一過程中Survivin保護了內膜細胞不會凋亡，而PCNA保持了內膜細胞的增殖能力。

綜上所述，筆者認為PCNA和Survivin過度表達在EM發病中發揮了重要的作用，但是對于PCNA和Survivin在子宮內膜中過度表達是導致EM發病的原因，還是在EM的發病中與其他因素共同發揮作用，有待進一步研究。

［1］ ABBASS，IHLE P，K?STER I，et al.Prevalence and incidence of diagnosed endometriosis and risk of endometriosis in patients withendometriosis-related symptoms：findings from a statutory health insurance-based cohort in Germany［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2012，160（1）：79-83.

［2］ RAMOS IM，PODGAEC S，ABR?O MS，et al.Evaluation of CA-125 and soluble CD-23 in patients with pelvic endometriosis：a case-control study［J］.Rev Assoc Med Bras，2012，58（1）：26-32.

［3］ JIN Y，SHAO CK，TANG LY，et al.Protein expression and significance of survivin and NF-κB in hepatocellular carcinoma［J］.Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2011，91（36）：2542-2545.

［4］ BIAN K，FAN J，ZHANG X，et al.MicroRNA-203 leads to G1 phase cell cycle arrest in laryngeal carcinoma cells by directly targeting surviving［J］.FEBS Lett，2012，586（6）：804-809.

［5］ DEMIRALAY E，ALTACA G，DEMIRHAN B.Morphological evaluation of parathyroid adenomas and immunohistochemical analysis of PCNA and Ki-67 proliferation markers［J］.Turk Patoloji Derg，2011，27（3）：215-220.

［6］ SALEHINEJAD J，ZARE-MAHMOODABADI R，SAGHAFI S，et al.Immunohistochemical detection of p53 and PCNA in ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor［J］.JOral Sci，2011，53（2）：213-217.

（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF SURVIVIN AND PCNA IN ENDOM ETRIOSIS

LIShuyan，FENGWeiqun
（Department of Gynaecology，Orthopedics＆Traumatology of Chinese Medicine Hospital of Zhoushan City，Zhejiang Province，Zhoushan 316000，China）

Objective To observe the expression and significance of Survivin and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）in endometriosis.M ethods Immunohistochemical method was used to examine the expression of Survivin and PCNA in endometrium and ectopic endometrial tissues of43 cases of uterine endometriosis patients and normal endometrium of 20 cases of healthy people.Results Survivin and PCNA expression in eutopic endometrium and ectopic endometrium group were significantly different（P＜0.05，P＜0.01）from those of control group，while there was no significant difference between eutopic endometrium and ectopic endometrium group（P＞0.05）.Conclusion Survivin and PCNA expression in endometriosiswas significantly higher，whichmaybe associated with the occurrence of endometriosis.

endometriosis；inhibitor of apoptosis proteins；proliferating cell nuclear antigen

R711.71

A

1007-3205（2013）01-0018-03

2012-02-08；

2012-04-07

李書艷（1977-），女，浙江舟山人，浙江省舟山市中醫骨傷聯合醫院主治醫師，醫學碩士，從事婦產科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.01.007