全自動生化分析儀測定血清低密度脂蛋白膽固醇分析性能評價

馮 倩，鄧德耀，周林華，陳 弟，李增安，支國華，薛云松 (云南省第二人民醫院檢驗科，云南 昆明 650021)

血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)檢測作為反映缺血性心血管病發病危險的指標已在臨床被廣泛應用，《中國成人血脂異常防治指南》明確規定不同危險因素存在情況下LDL－C的控制目標。目前，檢測LDL－C的參考方法是超速離心法，直接測定方法即均相測定法因其具有簡便、快速、易于自動化，所以作為常規方法在臨床廣泛應用，但有關的性能評價報道較少。為了深入了解在全自動生化分析儀上檢測LDLC的性能，筆者參考美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)的相關文件、國內一些定量檢測性能評價的報道以及試劑廠家的標準，在全自動生化分析儀上對試劑進行了性能評價。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器:日立7600全自動生化分析儀。

1.1.2 試劑:①日本積水醫療株式會社LDL－C檢測試劑(批號:807RLI);②配套校準品(批號:823RJI);③Bio－Rad質控血清水平2(批號46452)和水平3(批號46453);④干擾材料(日本Sysmex公司)，包括游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物。

1.1.3 標本:所有受檢者均隔夜空腹8 h以上抽血，3 500 r/min離心5 min，取血清檢測，或留取血清標本置于－20℃待檢。

1.2 方法

1.2.1 精密度(precision)驗證:用兩個水平的質控品和患者新鮮混合血清按標本檢驗程序進行測定，在批內重復測定20次，以及每份樣本每天測定1次，連續測定20天。分別計算批內及天間均值標準差(SD)和變異系數(CV)。并判斷是否小于廠家規定的性能標準。

1.2.2 正確度(accuracy)驗證:依據參考文獻［1］，結合筆者科室的實際情況，選擇衛生部臨床檢驗中心2012年5月發放的5個批號的質控品進行檢測，每個質控品測定LDL－C 2次，計算檢測均值與靶值的相對偏倚(%)，偏差小于衛生部臨檢中心組織的室間質評的允許偏倚，則正確度驗證成功。

1.2.3 分析干擾實驗:采用Sysmex干擾檢查試劑盒。空白液與新鮮混合血清按1:9比例制備各自干擾物的空白對照A液。將結合膽紅素、血紅蛋白、游離膽紅素和乳糜物用蒸餾水溶解，按1:9的比例分別加入相同的新鮮混合血清，制成不同的干擾物B液，制成后結合膽紅素B液濃度為20 mg/dl，血紅

蛋白B液500 mg/dl，游離膽紅素B液21 mg/dl，乳糜物B液3000 FTU。將A液與B液按照10∶0(空白管)，8∶2(1號管)，6∶4(2號管)，4∶6(3號管)，2∶8(4號管)，0∶10(5號管)比例混合，制備成空白管及含不同干擾物濃度的1－5號管。對每一份樣品進行2次LDL－C濃度測定，結果取平均值。計算影響度(F)=(含干擾物質標本檢測值一無干擾物質標本(空白)檢測值)/無干擾物質標本檢測值×100%［2］。F絕對值＞10%認為該濃度干擾物質對LDL－C檢測有影響。

1.2.4 分析測量范圍(analyticaimeasurement range，AMR)驗證:按參考文獻［3－5］，使用廠家提供的高值質控品(其值大于廠家給定的分析測量范圍上限)，用生理鹽水稀釋。稀釋液(L)與高值樣本(H)按照10L、9L+1H、8 L+2 H、7L+3 H、6L +4 H、5L+5 H、4 L十6 H、3 L+7H、2 L+8 H、1L+9 H、10H的關系配制，形成系列濃度樣品。每個濃度重復測定2次，以平均值為實測值，按照公式預期濃度=(CL×VL+CH×VH)/ (VL+VH)計算預期值。將實測值與預期值作比較，確定LDL－C的分析測量范圍。檢測低限(LLD)的確定:LLD為樣品單次檢測，可以達到的非空白檢測響應量對應的分析物的量。按99.7%的可信限，生理鹽水在批內重復測定10次空白樣品±3s所對應的LDL－C的量即為LLD。

1.2.5 生物參考區間(biological reference interval)的驗證:參考CLSIC28－A2文件［6］，選取健康體檢者20例，年齡20～56歲，平均36歲。男女各一半。按照標準操作程序進行檢測，對結果進行統計并與設定的參考區間進行比較，若20份標本的檢測結果均在設定的參考區間內或不超過2份標本超出，則驗證通過。否則，進行參考區間確立實驗。

1.3 統計學處理:應用SPSS11.5統計軟件進行數據分析。分析測量范圍的驗證中截距a與0的比較用t檢驗。

2 結果

2.1 精密度驗證結果:批內CV均＜5%，天間CV均小于10%，達到廠家性能標準，見表1。

表1 日立7600全自動生化分析儀測定LDL－C的批內、天間不精密度結果

2.2 正確度驗證結果:相對偏倚均＜30%，小于衛生部臨檢中心規定的室間質評允許偏倚，見表2。

2.3 分析干擾實驗結果:不同濃度游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物對LDL－C檢測的干擾(F)的絕對值都＜10%，見表3。

表2 日立7600全自動生化分析儀測定LDL－C的偏倚結果

表3 不同濃度干擾物質對LDL－C檢測的干擾(F)

2.4 分析測量范圍驗證結果:以實測值為Y軸、預期值為X軸，將結果點在X－Y坐標圖上，計算回歸方程y=bx+a。得到回歸方程y=0.982x－0.05，r=0.999，相關系數r≥0.975，b在0.97～1.03范圍內，a與0無統計學差異(P＞0.05)，可判斷AMR在實驗已涉及濃度。生理鹽水在批內重復測定10次，結果均為0，本檢測系統的LLD是0 mmol/L。結合LLD，本方法的AMR為0～14.38 mmol/L。

2.5 生物參考區間驗證結果:20份表面健康人血清LDL－C檢測結果濃度在0.21～2.36 mmol/L范圍，均在設定的參考區間＜3.63 mmol/L范圍之內。

3 討論

LDL－C檢測的參考方法是超速離心法，需要特殊的儀器，操作時間長，臨床很難開展，應用Friedewald公式計算LDL－C的方法，常受TC、TG和HDL－C變異的影響［7］，所以臨床LDL－C檢測的常規方法為均相測定法。本檢測系統試劑的檢測原理是均相測定－表面活性劑清除法，試劑1中的表面活性劑1能改變LDL以外的脂蛋白(HDL、CM和VLDL等)結構并解離，所釋放出來的微粒化膽固醇分子與膽固醇酶試劑反應，產生的H2O2在缺乏偶聯劑時被消耗而不顯色，此時LDL顆粒仍是完整的。加試劑2它可使LDL顆粒解離釋放膽固醇，參與Trinder反應而顯色，因其他脂蛋白的膽固醇分子已除去，色澤深淺與LDL－C量呈比例。臨床實驗室的管理部門和相關機構要求實驗室要選擇適當的方法對檢測系統的分析性能進行評價，證實其能夠達到所要求的性能標準，才可將分析系統用于常規工作。本文對日立7600全自動生化分析儀測定LDL－C的主要分析性能進行評價，包括不精密度、不準確度、分析測量范圍、分析干擾試驗、生物參考區間來了解該系統的性能。

一個檢測系統最基本的性能指標是精密度，在本檢測系統，兩個質控品及患者混合血清的批內、天間變異都小于廠家聲明的CV值。正確度的驗證，有關文件建議可以通過與參考方法比對或檢測定值參考物(包括由參考方法或決定性方法定值的樣本，從能力比對試驗獲得的參考物，廠家提供的正確度參考物或質控物，室間質量評價樣本、由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質)來驗證［8］。本實驗使用衛生部臨檢中心發放的5個不同批號的質控品進行正確度驗證，結果均小于衛生部臨檢中心規定的室間質評允許偏倚。不同濃度的游離膽紅素、結合膽紅素、血紅蛋白和乳糜物對檢測結果的影響度均＜10%，可認為這些濃度的干擾物質不影響LDL－C的檢測。本檢測系統分析測量范圍為0～14.38 mmol/L，略寬于廠商給出的線性范圍(0.04～11.64 mmol/L)。20份健康人血清濃度均在設定的參考區間＞3.63 mmol/L范圍內，可以認為現用參考區間適用于本實驗室。

總之，本文參考試劑廠家、CLSI文件以及國內關于定量檢測分析系統性能評價的相關報道，評價了循環酶法在全自動生化分析儀上檢測LDL－C的性能，基本與廠家申明的性能一致，該檢測系統能夠用于臨床，使用中要注意內源性干擾對檢測結果的影響。

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［2］ 孫 虹，牛 華，趙崇吉，等.膽紅素、血紅蛋白和乳糜微粒對生化檢測結果的干擾評價［J］.國際檢驗醫學雜志，2011，32(21):2509.

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［4］ 馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎第二版［M］.上海科學文獻技術出版社，2008:111－138.

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［6］ CLSIC28－A2.how to define and determine reference intervals in the clinical laboratory，2000:1－31.

［7］ 鄢盛愷.高、低密度脂蛋白膽固醇的勻相測定法及技術要求［J］.2004年全國血脂分析及其臨床應用學術研討會暨第七屆全國脂蛋白學術會議論文匯編2004－08－18T12，銀川.

［8］ 畢 波，呂 元.定量檢測方法學性能驗證的系統設計［J］.中華檢驗醫學雜志，2007，30(2):143.