逍遙丸含藥血清依賴雌激素受體促進鼠成骨細胞增殖

【摘 要】目的：采用中藥血清藥理學的方法，觀察逍遙丸含藥血清（XCS）對成骨細胞增殖影響及其是否與雌激素受體相關。方法：常規方法制備XCS和妊馬雌酮含藥血清（CE）凍存備用，體外培養UMR-106細胞，將細胞分為空白組、空白血清組、CE組、XCS不同濃度組，MTT法檢測細胞增殖率，同時觀察雌激素受體拮抗劑與細胞共孵育后細胞增殖的變化。結果：與空白血清組相比， XCS四個濃度對UMR-106細胞的增殖有明顯促進作用（p<0.05）；但在ICI 182780干預下對細胞增殖率則無明顯影響。結論：XCS對 UMR-106 細胞的增殖有明顯促進作用，此作用依賴雌激素受體才能發揮。

【關鍵詞】逍遙丸含藥血清；UMR-106細胞；細胞增殖

1 材料

1.1 藥物

逍遙丸，批號：20031263，湖南九芝堂股份有限公司生產；妊馬雌酮（CE），惠氏制藥有限公司，批號：J20050119，用蒸餾水配制成濃度28.13μg？mL-1的藥液備用；雌激素受體拮抗劑（ICI182780），上海前塵生物科技有限公司，用DMSO配成50mmol？L-1儲存。

1.2 動物

12月齡衰老雌性Wistar大鼠，體重240±10g。實驗動物由北京維通利華實驗動物技術有限公司，清潔級，合格證號SCXK（京）2012-0001。

1.3 儀器和試劑

VictorTMX3酶標儀，美國PekinElmer；Vert.A1倒置顯微鏡，德國ZeISS；RPMI1640培養基、新生牛血清（DMEM）、雙抗、二甲基四氮唑藍（MTT）、均購自南京建成生物技術有限公司。

2 方法

2.1 XCS的制備

將Wistar大鼠30只，體重240±10g。妊馬雌酮675μg？kg-1？d-1，逍遙丸2.7g？kg-1？d-1，給藥體積為2 mL/100g，按大鼠體重灌胃相應濃度的藥液，每日1次，連續3周。第22日給藥后1小時，麻醉后，腹主動脈取血，離心取血清，滅菌后，至-80℃冰箱保存。

2.2 UMR-106細胞培養與分組

UMR-106細胞常規培養，以2.5×103個每孔密度培養48小時。分別加入各濃度含藥血清的1640培養液100μL、10%CE、大鼠空白血清或相應體積的培養液，每組均設6個復孔，溫育48小時（另設相同組別的細胞與 ICI 182780 1μm？L-1共孵育）。

采用MTT法于酶標儀490nm 波長處測定各孔的吸光度值，結果用A490表示，計算細胞增殖率。

2.3 數據處理

本實驗采用完全隨機設計，結果表示為（ ±S），應用SPSS 10.0統計軟件進行。多組間比較用單因素方差分析方法，t檢驗以“P<0.05”表示有顯著差異。

3 結果

MTT法檢測結果，當細胞培養48小時，XCS（20%、10%、5%）和妊馬雌酮含藥血清均明顯提高UMR-106細胞的增殖率（P<0.05）（如表1）。細胞在與ICI 182780共孵育48h后，與空白組相比較，增殖率未發生明顯變化（P>0.05）；與ICI182780未干預相比，細胞增殖率有顯著差異（P<0.01）。4 討論

現代藥理研究表明逍遙丸有類雌激素樣作用，通過體外實驗研究觀察成骨細胞發生相關轉錄水平基因和表達蛋白的指標評價發現雌激素促進成骨細胞生成，同時也有體內實驗證明雌激素促進成骨細胞的發生、分化、增殖和功能。成骨細胞是骨形成的主要功能單位，刺激成骨細胞增殖并促進其分化成熟是防治骨質疏松癥的主要方法。本實驗在細胞水平上研究了XCS對成骨細胞增殖作用部分指標的影響，初步表明XCS具有一定的促進成骨細胞增殖作用，并提示其可能具有雌激素受體依賴性。但本實驗僅為細胞水平的活性初步考察，其他尚需進一步深入研究。

參考文獻

[1]張寧，李會娟，祁永華等.基于中藥血清藥物化學方法的逍遙散治療黃褐斑的藥效物質基礎研究[J].世界科學技術，中醫藥現代化，2010，12（4）：643.

作者簡介

雷霞（1982-），女，講師，從事藥物作用機理研究。

劉海洋，男，主要從事中藥復方藥效物質基礎研究。