高效液相色譜-質譜聯用法檢查止喘靈膠囊中非法添加的醋酸潑尼松和茶堿

王 戈，趙培敬

（河南省南陽市食品藥品檢驗所，河南 南陽 473061）

中成藥制劑具有療效確切、毒副反應小的優點，適用于一些 慢性疾病的治療。目前市場上一些不法商家利用患者對傳統中醫藥的信任，以及急于獲得療效的心理，在部分產品中非法添加了醋酸潑尼松、茶堿等激素類成分，此類成分有抗炎、抗過敏等作用，見效快，但不宜長時間使用，以免對人體造成危害。止喘靈膠囊，標識稱系全部采用中藥材加工而成，主要適用于咳嗽、哮喘、急慢性支氣管炎、肺氣腫、肺心病等癥。由于此類藥物成分比較復雜，尚未有有效方法檢測非法添加的激素類成分。在此建立的高效液相色譜-質譜聯用法，可快速、準確地對此類藥物中非法添加的醋酸潑尼松、茶堿作出判斷，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200-6310型液相色譜質譜聯用儀，配有Agilent 1200型液相單元（在線脫氣機、四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器）、電噴霧離子化源（ESI）。醋酸潑尼松對照品（批號為100012-200105）、茶堿對照品（批號為 100121-199903）由中國藥品生物制品檢定所提供；止喘靈膠囊（抽驗樣品）；乙腈（色譜純，天津市彪仕奇科技發展有限公司）；冰醋酸（分析純，天津化學試劑有限公司）；乙酸銨（分析純，天津市化學試劑三廠）；水為純化水。

2 方法與結果

2．1色譜條件

色譜柱：Shimadzu shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動相：0．02 mol／L 乙酸銨 -0．1% 冰醋酸水溶液 ∶乙腈（71∶29）；流速：1．0 mL ／min；檢測波長分段設置：0 ～9 min 為 240nm；9～15 min為 271 nm；柱溫：35℃；進樣量：10 μL。

2．2 質譜條件

電噴霧離子源（ESI），霧化氣壓力：50 psi，干燥氣溫度：380℃，流速：9．5 mL ／min，掃描范圍：100 ～500 m ／z，毛細管電壓：3 500 V。檢測方式：0～9 min正模式一級、二級同時掃描；9～15 min負模式一級、二級同時掃描。

2．3 溶液配制

精密稱取醋酸潑尼松與茶堿對照品各5 mg，分別置50 mL容量瓶中，加流動相適量，使溶解并稀釋至刻度，作為儲備液；精密量取上述2種貯備液各5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品10粒，取出內容物，精密稱定，混合均勻后稱取相當于1粒的質量，置50 mL容量瓶中，加流動相適量，超聲處理15 min，放冷，加流動相至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2．4 檢測結果

按上述條件進樣后，高效液相色譜（HPLC）紫外圖譜在保留時間7．08 min和10．49 min處出現色譜峰，見圖1 A，兩個峰的塔板數及分離度均符合《中國藥典》[1]要求；醋酸潑尼松一級、二級質譜見圖2 A、圖2 B，茶堿的一級、二級質譜見圖2 C、圖2 D。在相同的色譜及質譜條件下對供試品溶液進行分析，所得的HPLC紫外圖譜見圖 1 B，峰1的質譜圖見圖 2 E、圖2 F，峰2的質譜圖見圖2 G、圖2 H。供試品 HPLC圖譜在與醋酸潑尼松、茶堿對照品保留時間處有色譜峰，經過與對照品溶液的質譜圖相比較，供試品溶液中峰1的一級、二級質譜與醋酸潑尼松對照品溶液一級、二級質譜圖相吻合，峰2的一級、二級質譜與茶堿對照品溶液一級、二級質譜圖相吻合。由此可以確定，供試品溶液中添加了醋酸潑尼松、茶堿成分。

3 討論

圖2 質譜圖

對照品溶液為醋酸潑尼松和茶堿的混合溶液，由于是液相質譜聯用，故可根據離子質量數很容易辨別出醋酸潑尼松和茶堿。

在試驗中，質譜的掃描采用正負模式交替掃描，經比較，醋酸潑尼松在正模式、茶堿在負模式下檢測靈敏度高，二級質譜響應好，故最終選定文中的檢測條件[2-4]。

中成藥制劑中通常都含有多種組分，采用紫外檢測法或熒光檢測法對樣品提取液進行檢測時，由于選擇性不強，在干擾組分多的情況下，目標組分不易分離。采用LC-MS／MS技術，將高效液相色譜的高分離能力與質譜分析的高選擇性相結合，對純中藥制劑中非法添加的化學成分進行多級質譜分析，增強了檢測結果的可信度。該法靈敏度高、選擇性強，可為打擊中成藥的非法添加提供有力依據。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：化學工業出版社，2005：60．

[2]劉 斐，陳長青，鄭 靜．LC-MS／MS方法鑒定中藥制劑中摻入的7種西藥成分 [J]．藥物分析雜志，2009，29（8）：1 378-1 381．

[3]胡 青，崔益冷．液質聯用法測定解熱鎮痛類中藥及保健品中非法摻加化學藥品的研究[J]．中成藥，2009，31(10)：1 547-1 550．

[4]向智敏，張 驪．HPLC和LC-MS／MS鑒定鎖陽固精丸中非法添加的西地那非衍生物[J]．中國現代應用藥學，2010(2)：167-171．