頂空毛細管氣相色譜法測定碘佛醇原料藥中的殘留溶劑

李 超，張 勉，唐 華

（重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121）

碘佛醇最早由美國萬靈科公司研制開發，現國內僅有一個生產廠家，現行質量標準為國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBH19702004[1]，USP[2]也有收載，屬非離子型 X-線造影劑。原料制備工藝中使用了甲醇和正丁醇，現行質量標準[1]中使用的氣相色譜直接進樣外標法測定甲醇和正丁醇含量，溶劑為N，N-二甲基甲酰胺。為減小毒害和對儀器的污染，提高測定準確度，更好地控制產品質量，以水為溶劑，三類溶劑正丙醇為內標，對本品的殘留溶劑進行了頂空毛細管氣相色譜測定。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N型氣相色譜儀，AgilentG1888型頂空進樣器。所用試劑均為分析純；碘佛醇原料為江蘇恒瑞醫藥股份有限公司提供的3批樣品（批號分別為635101133，635101136，635101206，純度大于 99%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ZB-Wax 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進樣口溫度：200℃；分流比：5∶1；檢測器為 FID，溫度為 250℃；柱溫采用程序升溫：50℃保持3 min，然后以35℃ ／min升至200℃，保持 2 min；載氣為氮氣；流速：2 mL／min。頂空條件：頂空瓶加熱平衡時間為30 min；加熱溫度為80℃；進樣環溫度為110℃；傳輸線溫度為120℃；進樣體積為1 mL。

2.2 溶液配制

取正丙醇適量，精密稱定，加水制成0.1 mg／mL的溶液，搖勻，即得內標溶液。分別取甲醇和正丁醇適量，精密稱定，加上述內標溶液制成含甲醇和正丁醇均為0.6 g／L的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取本品約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，加上述內標溶液5.0 mL，加蓋密封，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取對照品溶液 2.5 mL，置 20 mL頂空瓶中，加內標溶液 2.5 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進行分析，記錄色譜圖，見圖1 A。取供試品溶液，照擬訂的方法進行分析，記錄色譜圖，見圖1 B。可見，甲醇、正丙醇、正丁醇均能得到良好的分離（分離度＞1.5），說明上述色譜條件可用于測定碘佛醇原料中甲醇和正丁醇的殘留量。

圖1 氣相色譜圖

線性關系考察：精密量取對照品溶液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置 20 mL頂空瓶中，加內標溶液稀釋至 5.0 mL，加蓋密封，搖勻。照擬訂的方法進行分析，記錄色譜圖；以對照品峰面積與內標峰面積的比值為橫坐標（X），對照品溶液質量濃度與內標溶液質量濃度（以1計算）的比值為縱坐標（Y），進行線性回歸。甲醇的回歸方程為Y=377.8 X+11.813，線性范圍為122.2 ～ 366.6 μg／mL， r=0.998 3；正丁醇的回歸方程為 Y=68.962X+1.617 4，線性范圍為 128.4 ～385.2 μg／mL，r=0.999 3。結果表明，甲醇、正丁醇在相應的檢測濃度范圍內線性關系良好。

檢測限考察：將對照品溶液逐步稀釋進樣，以 S／N=3計算，測得甲醇、正丁醇的最低檢測質量濃度分別為 0.66，0.04 μg／mL。

精密度試驗：取對照品溶液 2.5 mL，共 6份，置 20 mL頂空瓶中，分別用內標溶液稀釋至5.0 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進行分析。以對照峰面積與內標峰面積的比值計算，結果甲醇、正丁醇的 RSD 分別為 1.9%，0.7% （n=6），符合要求。

回收率試驗：取甲醇0.065 1 g和正丁醇0.070 0 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。取已測定結果的樣品約0.5 g，精密稱定，共9份，置20 mL頂空瓶中，分別加入對照品貯備液 1.5，2.0，2.5 mL，各 3 份，加入內標溶液稀釋至5.0 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進行分析，按內標法計算回收率。結果見表1。

表1 甲醇和正丁醇回收率試驗結果

2.4 樣品測定

分別取3個批號的樣品，按擬訂的方法制備供試品溶液，照擬訂的方法進行分析，記錄色譜圖，以峰面積按內標法計算樣品中甲醇、正丁醇的殘留量。并與廠家提供的按原標準檢驗的測定結果比較，結果見表2。按國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBH19702004[1]的規定，甲醇、正丙醇的限度均為0.3%，結果均符合規定。

表2 樣品檢測結果與廠家標準檢測結果比較（%）

3 討論

原標準方法中采用的溶解后直接進樣測定，會對色譜柱產生較大的污染，縮短色譜柱的使用壽命。頂空進樣避免了難揮發物質的污染及不必要的干擾，并且使殘留溶劑氣化后進樣，濃度增大，靈敏度高，非常適用于揮發性殘留溶劑的分析。由于本方法使用水作溶劑，且甲醇、正丙醇、正丁醇揮發性都比較強，根據《中國藥典(二部)》[3]附錄62-63對頂空溫度和平衡時間的指導原則，選擇了頂空瓶加熱平衡時間30 min，加熱溫度80℃的條件進行，壓力適中，靈敏度亦滿足要求。

原標準方法中溶劑使用的是N，N-二甲基甲酰胺，有毒性。選擇水為溶劑，各組分包括碘佛醇均有較好的溶解性，既環保又降低了成本，操作簡便。

有機殘留溶劑在樣品中為微量存在的物質，原標準方法采用外標法，精密度和準確度都較差；本法中采用內標法定量可以減少由于儀器系統或操作過程中帶來的誤差。試驗中對多種溶劑進行篩查，正丙醇是三類溶劑，毒性小，且與溶劑水混溶，保留時間也介于甲醇和正丁醇之間，且分離度良好。因此最終選擇正丙醇為內標物質。

原標準方法中甲醇、正丁醇的限度均為0.3%，甲醇的限度與ICH中關于有機溶劑殘留量的指導原則[4]和《中國藥典》[3]附錄62-63的規定一致，正丁醇的限度比上述兩個文獻規定的0.5%限度更嚴格。測定結果均低于規定限度。

該廠家在原料生產工藝中使用了氯乙醇，原標準方法中未作控制，ICH中關于有機溶劑殘留量的指導原則[4]和《中國藥典(二部)》[3]附錄62-63也未有相應的規定。因此，參照《中國藥典(二部)》[3]1025明膠空心膠囊中氯乙醇的測定方法，采用直接進樣考察了碘佛醇中氯乙醇的殘留，結果3批樣品均未檢出氯乙醇，故未在本方法中測定氯乙醇。

[1]YBH19702004.國家食品藥品監督管理局標準（試行）[S].

[2]United States Pharmacopeial Convention.United States Pharmacopeia[S].Thirty － second Revision[M].Rockville：United States Pharmacopeia Convention，2009：2677.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[4]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求質量部分[M].北京：人民衛生出版社，2000：87.