咳特靈片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

馬冬云，姜文艷

（1．江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 連云港 222006； 2．江蘇省連云港市東方醫(yī)院·市涉外醫(yī)院，江蘇 連云港 222006）

咳特靈片由小葉榕干浸膏、馬來酸氯苯那敏組成，具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、消炎的功效，用于咳喘及慢性支氣管炎，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊)》。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用薄層色譜（TLC）法對小葉榕進(jìn)行鑒別，按原標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行TLC鑒別，得不到清晰一致的熒光斑點(diǎn)；用光電比色法對馬來酸氯苯那敏限量進(jìn)行檢查，操作復(fù)雜，重現(xiàn)性差。現(xiàn)擬增加高效液相色譜（HPLC）法對馬來酸氯苯那敏進(jìn)行定性鑒別，改進(jìn)小葉榕的TLC鑒別方法，并采用HPLC法對咳特靈片中馬來酸氯苯那敏進(jìn)行含量測定，以全面控制咳特靈片的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀。小葉榕對照藥材（批號為110797-200307），馬來酸氯苯那敏對照品（批號為 110854-200306）；均由中國藥品生物制品檢定所提供；咳特靈片（市售藥品）；甲醇為色譜純，水為純化水，聚酰胺薄膜（薄層層析用，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠），其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 小葉榕的TLC鑒別[1]

取樣品 10片，研細(xì)，加甲醇 30 mL，加熱回流 20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2～3，置分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。取小葉榕對照藥材20 g，加水煎煮 2次，每次 150 mL，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至約30 mL，加乙醇使含醇量約達(dá)85%，靜置，吸取上清液，置水浴上蒸干，加甲醇30 mL，按供試品溶液制備方法同法制成對照藥材溶液。模擬處方制備不含小葉榕干浸膏的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（2 ∶8 ∶0．5 ∶1）的上層溶液為展開劑，展開，展距 10 cm，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，而在相應(yīng)位置上陰性對照品溶液色譜無干擾斑點(diǎn)(見圖1)。

2．2 馬來酸氯苯那敏含量測定

2．2．1 色譜條件[2]

色譜柱：PhenomenexC18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流速：1．0 mL ／min；柱溫：30 ℃ ；流動相：0．0 5 mol／L 磷酸二氫鉀溶液（含1%三乙胺和0．005 mol／L庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié) pH至3．0）-甲醇（40∶60）為流動相，檢測波長：264nm，進(jìn)樣量：10 μL。

2．2．2 溶液制備

精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品 13．61 mg，置50 mL量瓶中，加流動相適量使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；分別精密量取 1．0，3．0，5．0，7．0，8．0，10．0 mL，分置 25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取 0．4 g（相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏1．4 mg），置25 mL量瓶中，加入流動相，超聲處理（功率 250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加流動相至刻度，搖勻，用0．45 μm的微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。模擬處方制備不含小葉榕干浸膏的陰性樣品，依法制成陰性對照品溶液。

圖1 咳特寧薄層色譜圖

2．2．3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取2．2．2項(xiàng)下3種溶液，在相同色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在該條件下，馬來酸氯苯那敏的出峰區(qū)陰性樣品無干擾峰。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取2．2．2項(xiàng)下對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀測定峰面積，以對照品質(zhì)量濃度（μg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝7．40 C＋1．72，r＝0．999 9（n ＝6）。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在10．89 ～ 108．90 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取同一對照品溶液（54．44 μg ／mL）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD＝0．63%（n＝6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液 10 μL，分別在 0，3，6，9，12，18，24 h 時進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的 RSD ＝1．1% （n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批(批號為100615）樣品6份，按2．2項(xiàng)下的方法制備并測定峰面積。結(jié)果馬來酸氯苯那敏含量為3．739 mg／g，RSD ＝1．2%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同批號樣品6份，每份0．2 g，分別置25 mL量瓶中，分為3組，每組分別加入對照品溶液1，2，3 mL（質(zhì)量濃度為 0．255 1 mg ／mL），加流動相溶液，依法操作，測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 馬來酸氯苯那敏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．3 樣品含量測定

按2．2．1項(xiàng)下條件，分別測定3批咳特靈片樣品含量，結(jié)果見表 2。

表2 樣品含量測定（n＝3）

2．4 馬來酸氯苯那敏HPLC鑒別

取 2．2．2 項(xiàng)下 3 種溶液，按 2．2．1 項(xiàng)下色譜條件，精密量取10 μL，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜主峰保留時間與對照品溶液色譜主峰保留時間一致，陰性對照品溶液色譜在相應(yīng)位置無干擾(見圖2)。

3 討論

采用文獻(xiàn)[1]報(bào)道的小葉榕TLC鑒別方法，較原標(biāo)準(zhǔn)中的TLC法色譜特征明顯，專屬性強(qiáng)，所得小葉榕的薄層色譜主斑點(diǎn)與文獻(xiàn)一致，進(jìn)一步說明了文獻(xiàn)中小葉榕TLC法的可行性。采用HPLC法對馬來酸氯苯那敏進(jìn)行定性鑒別，快速、簡便。采用HPLC法對咳特靈片中馬來酸氯苯那敏進(jìn)行含量測定，與光電比色法測定馬來酸氯苯那敏限量檢查比較，具有準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。因此，文中建立的方法可供咳特靈片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂時參考。

[1]鐘名誠，唐娟娟．咳特靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J]．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)2008，9（4）：270．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1 208．