高效液相色譜法測定復方白芷乳膏中歐前胡素和異歐前胡素含量

何榮芬

(安徽省淮北市人民醫(yī)院，安徽 淮北 235000)

復方白芷乳膏是淮北市人民醫(yī)院的自制制劑，主要成分為白芷、維生素E。白芷具有美白除斑、潤膚、控油、延緩皮膚衰老的作用。白芷維生素E乳膏經(jīng)臨床驗證，療效好、使用方便、無刺激性、無不良反應[1]。維生素E是自由基清除劑，使細胞的脂質(zhì)免受自由基氧化的損害，從而延緩衰老。筆者采用高效液相色譜法測定復方白芷乳膏中歐前胡素和異歐前胡素的含量，方法操作簡便、準確、穩(wěn)定、靈敏度高，適用于制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC色譜系統(tǒng);Empower Waters工作站;Waters 2489 UV/visible Detector檢測器;超聲波處理器(濟寧奧波超聲電氣有限公司，批號為JAC-300);Mettler AE-240電子分析天平(0．1 mg，0．01 mg)。歐前胡素對照品(批號為 110826-200511，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);異歐前胡素對照品(批號為110827-201008，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，含量以99．4%計，置五氧化二磷減壓干燥12 h以上使用);復方白芷乳膏(淮北市人民醫(yī)院制劑，批號分別為 20120928，20121025，20121030);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -水(62 ∶38);流速:1．0 mL/min;柱溫:25 ℃;進樣量:20 μL;檢測波長:254 nm[2]。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

分別精密稱取歐前胡素對照品6．37 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，異歐前胡素對照品6．73 mg(置五氧化二磷減壓干燥14 h)，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液[3]。取本品2 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇20 mL，80℃水浴中放置10 min使其完全破乳，再置超聲儀中超聲10 min，放冷至室溫，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷卻1 h，取出后迅速過濾，取續(xù)濾液放冷至室溫，用0．45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液[4]。取處方中不含白芷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:分別精密量取對照品貯備液 1．0，2．0，4．0，6．0，10．0，20．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1A)，以峰面積為縱坐標、質(zhì)量濃度為橫坐標(μg/mL)進行線性回歸分析，得回歸方程。歐前胡素 Y=78 855．639 8X＋1 167．223 7(r=0．99999)，進樣質(zhì)量濃度在 1．274 ～25．48 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關系;異歐前胡素 Y=74 122．810 8 X-5229．1326(r=0．99999)，進樣質(zhì)量濃度在 1．338 ～ 26．76 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次。結(jié)果歐前胡素峰面積為 405 800，406 400，408 900，409 600，410 900，413 800，RSD=0．72%;異歐前胡素峰面積為 394 500，395 100，395 800，398 700，399 800，401 800，RSD=0．74%。表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取樣品測定項下的同一供試品溶液(批號為20121025)在 0，2，4，6，8，10，12 h 時分別進樣測試，記錄色譜圖。結(jié)果歐前胡素峰面積的 RSD為1．76%，異歐前胡素峰面積的RSD為0．90%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復性試驗:取同一批號的樣品(批號為20121025)6份，各測定2次，照樣品測定項下方法測定，計算含量。結(jié)果歐前胡素的平均含量為標示量的0．092%，RSD為0．79%;異歐前胡素的平均含量為標示量的0．047%，RSD為1．28%。結(jié)果表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為20121025)9份，分別置10 mL容量瓶中，分成3組，每組分別精密加入 5．096 μg/mL 的對照品貯備液 2．0，2．4，3．0 mL，照供試品溶液制備方法，精密量取20 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果見表1和表2。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗結(jié)果

2．4 樣品含量測定

取本品3批，各取2份，精密稱取適量，置50 mL容量瓶中，按供試品制備方法得供試品溶液。精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1B)，用回歸方程計算含量。結(jié)果見表3和表4。

3 討論

有文獻報道[5-7]，歐前胡素和異歐前胡素的測定波長選擇300 nm和254 nm。取同一對照品溶液，分別在300 nm和254 nm波長處測定，結(jié)果在254 nm波長處測定時歐前胡素和異歐前胡素的峰面積及峰高值均大于在300 nm測定值。故選擇254 nm為測定波長。

表2 異歐前胡素加樣回收試驗結(jié)果

表3 樣品歐前胡素含量測定結(jié)果

表4 樣品異歐前胡素含量測定結(jié)果

在供試品溶液色譜圖中，歐前胡素和異歐前胡素色譜峰之間還有別的組分峰，通過調(diào)節(jié)甲醇-水的比例，可以將歐前胡素和異歐前胡素與其他相鄰的色譜峰達到完全分離。本研究中采用甲醇 -水(62∶38)為流動相，Hypersil ODS2 C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm)，得到了滿意的效果。

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