頂空氣相色譜法測(cè)定馬來(lái)酸曲美布汀中溶劑殘留量

吳毅彥，王 衛(wèi)

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

馬來(lái)酸曲美布汀適用于胃腸道運(yùn)動(dòng)功能紊亂引起的食欲不振、惡心、嘔吐、噯氣、腹瀉、便秘等癥狀及腸道易激惹綜合征。馬來(lái)酸曲美布汀目前在我國(guó)共有3家企業(yè)生產(chǎn)，分別執(zhí)行3個(gè)不同標(biāo)準(zhǔn)[1-3]，而這3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)分別檢測(cè)甲苯、四氫呋喃。本試驗(yàn)將3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，遵循2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅧP殘留溶劑測(cè)定法[4]，采用頂空氣相色譜法，使用1個(gè)色譜條件將生產(chǎn)過(guò)程中引入的溶劑(乙醇、異丙醇、正己烷、四氫呋喃、甲苯)一次性檢出，并計(jì)算其含量，以保證藥品的質(zhì)量及用藥安全。本方法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

Agilent 7890氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器。乙醇、異丙醇、正己烷、四氫呋喃、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(DMF，天津市康科德科技有限公司)均為分析純。馬來(lái)酸曲美布汀原料共9批(A廠:批號(hào) 為 20090412，20110502，20110503;B 廠 :批 號(hào) 為 110480，110575，110576;C 廠:批號(hào)為 1104001，1104002，1104003)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱為AgilentDB-624毛細(xì)管柱(30m×0．32mm，1．8μm);載氣為氮?dú)?柱溫:初始溫度40℃，保持5 min，以10℃ /min速度升溫至180℃，保持5 min;進(jìn)樣口溫度200℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流比1∶5。頂空條件:平衡溫度60℃，平衡時(shí)間30 min;進(jìn)樣體積1 mL。

2．2 溶液制備

精密稱取乙醇500 mg、異丙醇500 mg、正己烷29 mg、四氫呋喃72 mg、甲苯89 mg，置10 mL容量瓶中，加二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液貯備液。精密量取上述溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密量取2．2項(xiàng)下對(duì)照溶液貯備液0．2，0．5，1．0，2．0，4．0 mL，分置 100 mL 容量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，獲得一系列溶液，精密量取5 mL置頂空瓶中依次進(jìn)樣，以各溶液質(zhì)量濃度(X，g/L)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見(jiàn)表1。

重復(fù)性試驗(yàn):取2．2項(xiàng)下對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，計(jì)算各溶劑峰面積，乙醇、異丙醇、正己烷、四氫呋喃、甲苯峰面積的 RSD分別為 1．2%，1．1%，1．6%，1．9%，1．7%，表明方法的重復(fù)性良好。

表1 殘留溶劑線性方程及相關(guān)系數(shù)

最低檢出限、定量限試驗(yàn):取2．2項(xiàng)下的對(duì)照品貯備溶液，用二甲基甲酰胺稀釋至信噪比約為3時(shí)，測(cè)定最低檢出質(zhì)量濃度乙醇為 5 μg/mL，異丙醇為 5 μg/mL，正己烷為 0．29 μg/mL，四氫呋喃為 0．72 μg/mL，甲苯為 0．89 μg/mL。

回收率試驗(yàn):精密稱定C廠批號(hào)為1104001的樣品0．5 g，置20 mL頂空瓶中，共9份。另分別精密量取2．2項(xiàng)下對(duì)照品貯備溶 0．8，0．8，0．8，1．0，1．0，1．0，1．2，1．2，1．2 mL，置 100 mL 容量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取上述溶液5 mL，置已加樣的9個(gè)頂空瓶中，搖勻，頂空進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果乙醇平均回收率為101．5%(n=9)，RSD為2．71%;異丙醇平均回收率為103．0%(n=9)，RSD為2．19%;正己烷平均回收率為 99．7%(n=9)，RSD為 3．32%;四氫呋喃平均回收率為100．9%(n=9)，RSD 為 2．91%;甲苯平均回收率為 100．9%(n=9)，RSD 為 2．36%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取2．2項(xiàng)下的對(duì)照溶液于0，24 h分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，乙醇、異丙醇、正己烷、四氫呋喃、甲苯均在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2．4 樣品含量測(cè)定

精密稱取本品0．5 g，置20 mL頂空瓶中，精密加入二甲基甲酰胺溶液5 mL，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖1。

表2 9批樣品中殘留溶劑含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

本試驗(yàn)篩選了Agilent的DB-5、DB-17和DB-624毛細(xì)管色譜柱，試驗(yàn)證明采用DB-624柱可以使5種有機(jī)溶劑達(dá)到完全分離，且靈敏度也優(yōu)于其他兩個(gè)柱子。

圖1 殘留溶劑色譜圖

本品在40℃恒溫條件下保持5 min，能夠保證沸點(diǎn)較低的乙醇、異丙醇、正己烷和四氫呋喃的分離，再以10℃ /min升至180℃，并保持5 min，以確保樣品中其他較高沸點(diǎn)的溶劑盡快檢出，采用程序升溫可以使5種溶劑在12 min內(nèi)全部出峰，縮短了分析時(shí)間，提高了分析效率。

頂空時(shí)間要確保供試品溶液的氣-液相達(dá)到平衡，可通過(guò)測(cè)定頂空時(shí)間與頂空氣體濃度-時(shí)間曲線來(lái)確定。頂空時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般為30～45 min，如果過(guò)長(zhǎng)，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量的準(zhǔn)確性降低，如果時(shí)間不夠，就不能保證氣-液兩相達(dá)到平衡。經(jīng)試驗(yàn)，頂空時(shí)間選擇30 min。

[1]WS-521(X-444)-2001，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[2]WS1-(X-469)-2003Z，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[3]YBH07532010，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[4]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄61-附錄65．