CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀微小癌與乳頭狀增生活躍組織中的表達及意義

鄭海紅 翁壽向 羅華榮 徐鋮 甘梅富

●論 著

CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀微小癌與乳頭狀增生活躍組織中的表達及意義

鄭海紅 翁壽向 羅華榮 徐鋮 甘梅富

目的 探討CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀微小癌（PTMC）和結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中的表達及意義。方法 采用免疫組化EnVision法檢測40例PTMC及40例結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生組織中CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3的表達水平。結果 CD56在PTMC中的表達均為陰性，在結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中呈陽性表達；Galectin-3、CK19和HBME-1在PTMC中大部分呈中重度陽性表達，而在結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中呈陰性或弱陽性。結論 CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3聯合檢測對PTMC及甲狀腺乳頭狀增生活躍的診斷、鑒別診斷具有重要的實用價值。

甲狀腺 乳頭狀微小癌 乳頭狀增生 CD56 Galectin-3 CK19 HBME-1

甲狀腺乳頭狀病變是外科體檢工作的診斷難點，其主要包括乳頭狀增生活躍及乳頭狀癌。甲狀腺微小癌通常在良性甲狀腺疾病的切除標本或尸檢標本中偶然發現，是指直徑≤1cm的甲狀腺腫瘤，最常見的是乳頭狀微小癌[1]。結節性甲狀腺腫為甲狀腺最常見的增生性病變，伴乳頭狀增生活躍時很難與惡性相鑒別[2]。目前對Galectin-3、CK19、HBME-1的研究主要集中于甲狀腺乳頭狀癌，對于甲狀腺乳頭狀微小癌（PTMC）的研究相對較少，且有研究顯示Galectin-3、CK19、HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌的鑒別診斷中起重要作用，但其在結節性甲狀腺腫或其他甲狀腺乳頭狀增生疾病中仍會表達[3]，因而對一些形態學不典型的PTMC仍有必要繼續尋找一些新的標記物。本研究旨在闡明CD56、HBME-1、CK19、Galectin-3在PTMC及結節性甲狀腺腫伴甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中的表達及意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 按照病理診斷標準選取本院2008-01—2011-12因各種原因切除的甲狀腺標本80例。其中PTMC的病理標本40例；結節性甲狀腺腫伴濾泡上皮乳頭狀增生活躍40例。

1.2 方法 所有手術切除標本均經4%中性甲醛溶液固定，常規石蠟包埋。免疫組化采用EnVision法，具體操作步驟按試劑說明書進行，抗原修復采用高壓鍋高溫修復，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固，鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照。多克隆抗體Galectin-3和單克隆抗體購自丹麥基因公司。Galectin-3、CK19、HBME-1的陽性對照用診斷明確的PTMC，CD56以肺小細胞癌作為CD56陽性對照。

1.3 結果判定 CD56陽性信號為細胞膜染色伴或不伴細胞質染色；HBME-1、CK19陽性信號為細胞膜和細胞質內出現棕黃色顆粒；Galectin-3陽性信號為細胞質內出現棕黃色顆粒。染色的評分方法：按陽性細胞數所占比例并參考著色強度分為：無明顯陽性細胞為陰性（-），陽性細胞數＜25%為弱陽性（+），陽性細胞數25%～50%為中度陽性（++），陽性細胞數＞50%為強陽性（+++）。

2 結果

2.1 臨床及組織病理學特征 PTMC主要發生于中老年，女性明顯多于男性，組織學上主要呈現乳頭狀結構，細胞核呈毛玻璃狀，可見核重疊、核溝及纖維瘢痕；腫瘤間質中或乳頭軸心內可見砂礫體，間質鈣化常見于玻璃樣變性的纖維性間質或壞死組織內。結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍病例，常伴有囊性變，乳頭伸向囊腔中心，均可見纖維血管軸心，有些可見2級及以上分支，乳頭狀增生活躍時的乳頭被覆上皮形如周圍濾泡上皮，無上述PTMC細胞特征，細胞呈柱狀，細胞核圓形、卵圓形，細胞核位于乳頭基底部，保持良好極性。乳頭間質可見水腫及濾泡結構，而無上述PTMC間質特征。

2.2 免疫組化

2.2.1 CD56、CK19、HBME-1、Galectin-3在各組病例中的表達水平 見表1。

表1 CD56、HMBE-1、CK19、Galectin-3在各組病例中的表達水平（例）

2.2.2 CD56在PTMC及結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中的表達 CD56陽性定位于細胞膜，40例PTMC病例中CD56全部陰性，但其中有8例PTMC的癌巢與正常甲狀腺交界處可見散在的CD56弱陽性（圖1），乳頭狀癌中CD56失表達與腫瘤的組織學類型和大小均無關；40例結節性甲狀腺腫組織CD56全部陽性，其中25例呈弱陽性，10例呈中度陽性，5例呈強陽性（圖2），陽性率為100%；40例甲狀腺乳頭狀增生活躍組織CD56全部陽性，其中21例呈弱陽性，11例呈中度陽性，8例呈強陽性（圖3），陽性率為100%。

圖1 癌旁良性甲狀腺組織中CD56陽性（左下），而癌組織陰性（右上）（EnVision，×100）

圖3 甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中CD56陽性（EnVision，×100）

2.2.3 HBME-1在PTMC及結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中的表達 HBME-1陽性定位于細胞膜，可伴有細胞質或甲狀腺膠質的陽性著色，陽性表達主要位于細胞的腺腔面及乳頭表面，強陽性時陽性信號連接成線狀。40例PTMC中HBME-1全部陽性，弱陽性2例，呈中度陽性4例，呈強陽性34例（圖4），陽性率為100%；結節性甲狀腺腫中僅有弱陽性1例（圖5），陰性39例，陽性率2.5%；甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中呈陰性30例，弱陽性5例，中度陽性4例，強陽性1例（圖6），陽性率25%。

圖4PTMC組織中HBME-1強陽性（EnVision，×100）

圖 5 結節性甲狀腺腫組織中HBME-1陽性（EnVision，×100）

圖6 甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中HBME-1陽性（EnVision，×100）

2.2.4 CK19在PTMC及結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中的表達 CK19陽性定位于細胞膜及細胞質，40例PTMC中呈陰性1例，呈弱陽性1例，呈中度陽性3例，強陽性35例（圖7），陽性率為97.5%；在結節性甲狀腺腫呈陰性32例，弱陽性8例（圖8），陽性率為20%；甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中陰性38例，弱陽性2例（圖9），陽性率為5%。

圖7 PTMC組織中CK19強陽性（EnVision，×100）

圖8 結節性甲狀腺腫組織中CK19中度陽性（EnVision，×100）

2.2.5 Galectin-3在PTMC及結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍組織中的表達 Galectin-3陽性定位于細胞質，有時可見細胞核著色，組織細胞、淋巴細胞、纖維母細胞及炎細胞周圍新生的濾泡上皮呈明顯的陽性著色。PTMC中Galectin-3弱陽性2例，中度陽性4例，強陽性34例（圖10），陽性率100%；結節性甲狀腺腫病例全部呈陰性表達；甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中陰性32例，弱陽性4例，中度陽性2例，強陽性2例（圖11），陽性率20%。

3 討論

PTMC是乳頭狀癌的亞型，WHO分類中將其定義為直徑≤1cm的乳頭狀癌，因為體積小，在體檢時易被漏診。通常在由于其它原因切除甲狀腺標本或尸檢中偶然發現。盡管文獻報道PTMC同樣可以出現乳頭狀癌的特征，如毛玻璃狀核、核內假包涵體和核溝等，具備這些特征的典型PTMC診斷并不困難，但有一些良性病變（如結節性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤等）囊性變后形成的假乳頭或乳頭狀增生可以與PTMC中的真乳頭非常相似；同時，當PTMC癌核的特征不明顯或為特殊組織學類型（如濾泡亞型）時易診為良性。本研究聯合運用CD56、HBME-1、Galectin-3、CK19，檢測其對PTMC及甲狀腺乳頭狀增生活躍診斷的敏感性。

圖9 甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中CK19中度陽性（EnVision，×100）

圖10 PTMC組織中Galectin-3強陽性（EnVision，×100）

圖11 甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中Galectin-3中度陽性（En-Vision，×100）

PTMC多見于女性，男女發病比例各家報道不一[4]，大多在1∶3左右，有的高達1∶9，本組病例男女之比約為1∶3，與多數文獻報道相一致。好發年齡一般在40～50歲，本組平均年齡45歲。腫瘤體積一般較小，本組最小的腫瘤直徑僅0.2cm。因而在這一年齡段的女性結節性甲狀腺腫患者一定要將甲狀腺按書頁狀切開，多取材，同時在閱片時要仔細，謹防漏診。

CD56是一種神經黏附分子，可影響腫瘤的遷移。國外Demellawy等[5]對72例甲狀腺乳頭狀癌進行CD56染色，結果提示CD56在所有病例中均呈陰性表達，而在良性甲狀腺上皮則呈持續性陽性表達。國內有文獻報道，其中有一項研究顯示在10例PTMC中2例CD56呈陽性表達，另一項研究對73例PTMC進行CD56染色，結果提示CD56在所有病例中均呈陰性表達[3]。本研究提示100%的PTMC CD56呈陰性表達。我們研究結果不僅證實了Demellawy等的研究結果，也表明CD56在PTMC診斷中可能具有一定價值。同時我們的研究結果發現有8例標本其陽性部位均位于腫瘤組織與周圍正常甲狀腺組織的交界處，這與Demellawy等的研究相似。我們推測，可能是癌組織侵及周圍被包裹的正常甲狀腺組織的表達，而不是真正的乳頭狀癌組織的表達。

HBME-1是目前臨床上應用的間皮瘤相關抗體，可與存在于間皮瘤細胞微絨毛表面的抗原起反應[6]。這種抗體在大多數上皮型間皮瘤中呈強陽性細胞膜表達，為新近應用于甲狀腺病理診斷中的抗體。Prasad等[7]的研究結果發現HBME-1在惡性甲狀腺腫瘤中的表達為72%，良性病變為6%。本研究顯示PTMC HBME-1的陽性率為100%，且主要為中、重度著色，結節性甲狀腺腫的陽性率為2.5%，且主要為輕度著色，甲狀腺乳頭狀增生組織陽性率為25%。證實了HBME-1可以區分癌性乳頭和乳頭狀增生，可作為PTMC診斷的依據。

CK19是一種低分子量的角蛋白，存在于正常上皮和一些上皮來源的腫瘤中。Laco等[8]研究提示22例PTMC中有13例CK19陽性，陽性率為59%。我們的研究結果提示40例甲狀腺乳頭狀微小癌均陽性，其中38例呈中至重度陽性著色；在結節性甲狀腺腫中盡管40例標本中有8例CK19呈陽性著色，但其表達水平多數為輕度陽性；在甲狀腺乳頭狀增生活躍組織中40例標本中有2例CK19呈陽性著色，但其表達水平為輕度陽性。因此，在應用CK19輔助診斷PTMC只有彌漫強陽性才有意義，且需結合其他標記物診斷。

Galectin-3是一種β-半乳糖苷結合凝集素，在調節細胞生長、黏附、凋亡和惡變等過程中發揮重要作用，在PTMC的診斷中越來越受到重視。本研究結果顯示Galectin-3在PTMC中表達陽性率100%，顯著高于甲狀腺乳頭狀增生（20%）及結節性甲狀腺腫（0%），支持Galectin-3在甲狀腺乳頭狀病變的鑒別診斷中具有良好的應用價值。另外，對于甲狀腺病變中乳頭狀增生活躍的意義目前尚不明了，Coli等[9]認為良性乳頭狀增生中Galectin-3的表達提示該病變具有向甲狀腺乳頭狀癌轉化的趨勢，因病例較少，還需我們進一步隨訪研究。

綜上所述，某些PTMC極易誤診為惡性的結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍。單憑形態學，其診斷有一定困難，出現乳頭不一定意味著乳頭狀癌，對乳頭狀結構須嚴格評估其細胞學特征及免疫組化表達特點[10]，上述4種抗體的單一染色陽性或陰性對診斷意義不大，聯合4種抗體染色對PTMC及結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生活躍的診斷及鑒別診斷具有重要的提示意義。

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Expression of CD56，HBME-1，CK19 and Galectin-3 in thyroid papillary microcarcinomas and papillary hyperplasia

Thyroid Papillary microcarcinomas Papillary hyperplasia CD56 Galectin-3 CK19 HBME-1

2012-04-05）

（本文編輯：楊麗）

317000 臺州恩澤醫療中心（集團）臺州醫院病理科

甘梅富，E-mail:ganmf@sohu.com

【 Abstract】Objective To investigate the expression and significance of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 in thyroid papillary microcarcinomas and thyroid papillary hyperplasia．Methods The expression of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 was examined by immunohistochemical EnVision method in tissue specimens of 40 patients with thyroid papillary microcarcinomas and 40 patients with nodular goiter combined with thyroid papillary hyperplasia．Results The moderate to strong staining for HBME-1,CK19,Galectin-3 was observed in most papillary microcarcinomas,but negative to mild in nodular goiter and papillary hyperplasia．CD56 was negatively stained in papillary microcarcinomas,while it was positive in nodular goiter and papillary hyperplasia．Conclusion The combined detection of CD56,HBME-1,CK19 and Galectin-3 can be used for differential diagnosis between thyroid papillary microcarcinomas and papillary hyperplasia．