柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株的致病性研究

李蔥曉 宋宏曉 王天奇等

摘要：利用人工感染試驗，研究柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株的致病性。結果表明，隨著感染劑量的提高，其死亡率上升，平均增重下降、平均病變記分提高，半數致死量（LD50）為3.248 7×104 個/只。為洛陽地區防控其柔嫩艾美耳球蟲所病提供了依據。

關鍵詞：雞；柔嫩艾美耳球蟲；致病性

中圖分類號：S852.723 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）09-0011-02

雞球蟲病是由艾美耳屬球蟲中的一種或幾種寄生于雞腸道黏膜上皮引起的一種寄生性原蟲病， 以腸道損傷、下痢或血便為特點。它可以引起雞只死亡、發育停滯、產蛋減少、飼料報酬降低等，給養雞業造成嚴重的經濟損失。據統計， 球蟲病每年給全世界養雞業造成80 億美元的經濟損失。世界公認的雞艾美耳屬球蟲有7種，即柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球蟲（E.maxima）、堆形艾美耳球蟲（E.acervulina）、毒害艾美耳球蟲（E.necatrix）、布氏艾美耳球蟲（E.brunetti）、和緩艾美耳球蟲E.mitis、早熟艾美耳球蟲（E.praecox），其中柔嫩艾美球蟲分布廣泛、致病性最強，國內已有31個省（市、自治區）報道有其分布[1]。研究結果表明，不同地區之間的分離株的致病性、耐藥性及免疫原性存在一定的差異[2]。為進一步做好洛陽地區雞球蟲病的防控工作，本試驗研究了柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株的致病性。

1 材料與方法

1.1 球蟲卵囊

柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊由河南科技大學動物科技學院寄生蟲課程組提供。該蟲株是用單卵囊分離技術分離于洛陽地區自然發病雞 ，臨用前在小公雞體內復壯，采用反復水洗沉淀法分離，之后接種于25 g/L的重鉻酸鉀溶液中，孢子化后4保存。使用前離心除去重鉻酸鉀，將卵囊懸浮于生理鹽水中，并計數。

1.2 試驗用雞

試驗用雞為海蘭褐雛雞，公母各半，由洛陽市現代化種雞場提供，出殼后在嚴格消毒的鐵絲籠內飼養，所用器皿經煮沸消毒，飼喂不含任何抗球蟲藥物的全價飼料，自由采食，飲用涼開水，12日齡時用于致病性試驗。試驗前連續兩天檢查糞便無球蟲感染。

1.3 人工感染

將試驗用雞逐只稱重，根據生物統計分析結果，剔除體重差異顯著的個體，逐只帶上腳號，隨機分為7組，每組 15 只，使每組雞的總體重大致相等。第Ⅰ至第Ⅵ組為感染組，分別以 2.5×103 、5.0×103 、1.0×104、2.0×104 、4.0×104 、8.0×104 個/只劑量，用長頸吸管經口插入嗉囊接種感染柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株孢子化卵囊，第Ⅶ組為不感染對照組。

1.4 致病性觀察及評價

接種后每日觀測雞的精神狀態、飲食欲，記錄最早血便時間、血便堆數及死亡數。感染后 8 d時，將雞稱重、剖殺，取出盲腸進行病變記分，并以組為單位將盲腸內容物勻漿，用 McMasters 法測定每克盲腸內容物的卵囊數（OPG）[2]。盲腸病變記分參照 Johnson和Reid標準[3]，以病變最為嚴重的一側盲腸作為評價對象，采用 5 級評分制評分。未見病變為 0 分；腸壁僅有少量散在出血點，壁不增厚，內容物正常為 1 分；盲腸內容物混有少量血液，腸壁稍增厚，內容物正常，記 2 分；盲腸內有多量血液或有盲腸芯（血凝塊或灰白色干酪樣的香蕉型塊狀物），盲腸壁肥厚明顯，腸腔內糞便含量少，記 3 分；因充滿大量血液或腸芯而盲腸腫大，腸芯中含糞渣或不含，記為 4 分，死亡雞也記 4分。最后以平均增重 、相對增重率、死亡率、平均病變記分、組內盲腸內容物中卵囊數量（OPG）作為評價指標，進行比較和評價，并用寇氏法計算卵囊感染的半數致死量[4]。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀

感染初期，試驗雞精神、飲食欲無明顯的異常。感染 72 h 后，6 個感染組雞均表現為飲食欲減少，羽毛逆立，糞便變稀。感染后 80 h ～96 h 出現便血，血便多見于感染后 5～7 d，其中第 6 天血便最為嚴重。感染雞逐漸表現精神萎靡，食欲不振或廢絕，渴欲增加，不愛運動， 嚴重者出現麻痹、痙攣并出現死亡。感染后第 5～7 d均有死亡，但主要集中于感染后第 6 天。第 7 天血便減少，第 8 天末血便停止。不感染對照組試驗雞在整個試驗期間未見異常。不同劑量感染雞的便血及死亡情況見表 1。

2.2 不同感染劑量的致病性

隨著感染的劑量的增大，最便血時間有變短的趨勢，臨床癥狀表現更為嚴重（表1）。平均增重隨感染劑量的增加而減少，第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組差異不明顯（P>0.05），但與其他組均有極顯著的差異（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ組沒有死亡，其他感染組死亡率有極顯著差異（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ組病變記分差異不顯著，二者均與其他感染組有極顯著差異（P<0.01）。不同感染劑量下OPG也有上升趨勢（表2）。分離株對試驗雞的半數致死量（LD50）為3.248 7×104 個/只，其 95% 置信限為2.35 2 8×104 ～ 4.485 3×104個/只。

3 小結與討論

柔嫩艾美耳球蟲是危害養雞業最為重要的寄生蟲之一，寄生于盲腸導致明顯的血便，并起雞群大批死亡。隨著感染劑量的增加，感染雞的平均增重顯著減少，死亡率明顯增加，盲腸的平均病變記分也顯著提高，這與黃妮等[1]的研究結果一致。本試驗觀察了不同感染劑量下的最早便血時間，發現隨感染劑量的增加，最早便血時間有變短趨勢，這可能與盲腸黏膜上皮細胞所產生的裂殖體數量有關。感染劑量較大，可使有限的盲腸黏膜上皮細胞一次產生數量較多的裂殖體，從而造成較早出現血便。感染劑量較小，盲腸黏膜上皮細胞一次產生的裂殖體數量尚不能致其大面的損傷，待損傷面積增大時，方可出現出血，故而血便出現較晚。因為球蟲引起的腸道黏膜出血與裂殖體產生和釋放有關[2]，但感染劑量增加不可能導致裂殖體產生時間的提前。球蟲引起黏膜出血性病變的量效關系還要進一步研究。

球蟲的致病性與多種因素有關[2]，其中，分離株的毒力和感染劑量是最為重要的因素。本試驗發現在感染劑量為 2.5×103 個/只和5×103 個/只時，仔雞沒有死亡，而在 1×104 個/只以上時，隨感染劑量增加死亡率提高，這與王仲兵[5]等的研究結果一致，所不同的是洛陽分離株的半數致死量（LD50）為3.248 7×104 個/只，明顯低于王仲兵等[5]報道的 7.52×104 個/只，說明柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株毒力高于山西太谷分離株。本試驗結果為洛陽地區預防控制柔嫩艾美耳球所起的雞球蟲病提供基本依據。

參考文獻：

[1] 黃 妮，賈燕青，梁武龍，等.雞柔嫩艾美耳球蟲YL株多次傳代后的致病性研究[J] .動物醫學進展，2011，32（9）：27-29.

[2] 索 勛，李國清.雞球蟲病學[M] .北京：中國農業大學出版社，1998.149-174.

[3] JOHNSON J， REIDW M. Anticoccidial drugs： Lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens[J]. Exp Parasitol，1970， 28（1）： 30-36.

[4] 周永欣，章宗涉.水生生物毒性試驗方法[M] .北京：農業出版社，1989.114-122.

[5] 王仲兵，古少鵬.柔嫩艾美耳球蟲的分離鑒定與致病性測定[J].中國動物檢疫，2010，27（9）：36-37.