HPLC法測定金振口服液中大黃素和大黃酚含量

曹云飛?吳小峰　蔡芳?殷黎霞

摘 要 目的 高效液相色譜法測定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量。方法 色譜柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1mL/min；紫外檢測波長：254nm[2]；柱溫：30℃；進樣量：1 0μL。結果 本法可用來測定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量。分別在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范圍內成線性關系，平均回收率分別為98.81%和98.24%。結論 該方法簡便，準確，可作為金振口服液質量控制的方法。

關鍵詞 金振口服液 液相色譜法 大黃素 大黃酚

金振口服液主要由羚羊角、平貝母、大黃、黃芩等組方而成，具有清熱解毒，祛痰止咳。主要用于小兒痰熱蘊肺所致的發熱、咳嗽、咳吐黃痰、咳吐不爽、舌質紅、苔黃膩；小兒急性支氣管炎等癥狀，臨床應用較為廣泛。《國家藥典》2010年版一部[1]中通過控制黃芩中黃芩苷的含量以控制金振口服液的質量。由于本品中大黃含量較多，而大黃中主要含有大黃素、大黃酚、大黃酸等成分，大黃素別名朱砂蓮甲素，化學名為1，3，8-三羥基-6-甲基蒽醌，分子式為C15H10O5，來源于蓼科植物虎杖的干燥根莖和根，具有抗菌、止咳、抗腫瘤、降血壓等作用；大黃酚又名大黃根酸，化學名為1，8-二羥基-3-甲基蒽醌，分子式為C15H10O4，有明顯的止咳作用。測定金振口服液中大黃素、大黃酚的含量有助于判斷藥用效力。本文參照文獻[2，3]本文采用HPLC法同時對金振口服液中大黃素和大黃酚的含量進行測定，該法簡便，穩定性和重現性好。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀、工作站（美國安杰侖公司）。

1.2 試劑

大黃素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110756-200110）；大黃酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110796-200615）；甲醇（國藥集團色譜純）；其余試劑為國藥集團分析純；金振口服液（江蘇康緣藥業股份有限公司，批號120401，120901，121201）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）[4]；流動相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1.0ml/min；紫外檢測波長：254nm[5]；柱溫：30℃；進樣量：1 0μL；在此條件下大黃素峰的理論塔板數為7502，大黃酚峰的理論塔板數為8020；大黃素與大黃酚峰的分離度為6.23。

2.2 標準曲線的制備

分別精密稱取大黃素和大黃酚對照品適量，加無水乙醇—醋酸乙酯（2：1）適應溶解并定量稀釋成含大黃素95.0μg /mL和大黃酚210.8μg /mL的貯備液。分別精密量取大黃素貯備液5mL，大黃酚貯備液6mL，用無水乙醇—醋酸乙酯（2：1）定量稀釋至50mL，制成對照品的在上述色譜條件下進樣分析，測定峰面積值（A），并以A對進樣濃度（C）進行回歸，繪制標準曲線。大黃素線性關系見表1，大黃酚線性關系見表2，色譜圖見圖1。

2.3 供試品溶液的制備

取本品2 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷[6，7]，再稱重量，用甲醇補減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液15mL，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇—鹽酸（10：1）溶液15mL，置水浴中加熱水解1h，立即冷卻，用氯仿強力振搖提取4次，每次15mL，合并氯仿液，在水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇—醋酸乙酯（2：1）溶解，移至20mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得。

2.4 穩定性試驗

取對照品溶液（含大黃素9.50μg /mL和大黃酚25.30μg /mL），分別于0，4，8，12h在上述色譜條件下測定，峰面積基本不變。其中，大黃素的RSD為0.33%，大黃酚的RSD為0.35%。

2.5 精密度實驗

取對照品溶液（含大黃素9.50μg /mL和大黃酚25.30μg /mL），在上述色譜條件下連續測定5次，大黃素RSD為0.1%，大黃酚的RSD為0.1%。

2.6 重復性試驗

按照擬訂的含量測定方法，取同批號樣品5份，分別制備樣品供試液，在上述色譜條件下測定5次，大黃素的RSD為0.7%，大黃酚的RSD為1.1 %。

2.7 回收率試驗

取6份已知含量的樣品，分別加入大黃素和大黃酚對照品貯備液1ml，按2.3中所述方法操作，在上述色譜條件下測定，結果見表3，表4。

2.8 空白試驗

按處方比例稱取除了大黃以外的其它幾味藥[8]，按制備工藝制成供試液，照樣品測定法測定，在主成分出峰處無干擾，結果見圖2。

2.9 樣品測定

對同一廠家不同批號樣品的含量測定結果見表5，色譜圖見圖3。

3 結論與討論

采用高效液相色譜法測定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量，在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范圍內成線性關系，平均回收率分別為98.81%和98.24%。該方法簡便，準確，可作為金振口服液質量控制的方法。

在制備供試品溶液時，參考《中國藥典》2010年版一部中大黃的藥材處理方法。筆者還曾分別采用超聲30min，處理樣品，結果所測含量與本實驗結果相比，含量較低。

通常大黃蒽醌類的檢測波長為254 nm，選用該波長測定，其它組分及輔料無干擾。

實驗過程中曾嘗試乙腈-甲醇- 0.1%磷酸（44：46：33） [9] ，乙腈-水-冰醋酸（60：40：1） ，甲醇-0.2%磷酸（80：20）為流動相，經比較得知選用甲醇-0.1%磷酸（85：15），比例最佳，峰形及柱效較好。

參考文獻

[1] 中華人民共和國藥典一部[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010.22-23.

[2] 陳敬然，謝飛，尹曉飛，等.高效液相色譜法測定牛黃解毒滴丸中大黃素和大黃酚含量[J].醫藥導報，2011，04（1）：2-3.

[3] 竇金鳳.HPLC法同時測定女金膠囊中黃芩苷和丹皮酚的含量[J].中國藥師，2012，03（5）：40-42.

[4] 竇金鳳，曹云飛.HPLC法測定腎衰寧膠囊中大黃素和大黃酚的含量[J].黑龍江中醫藥，2007，10（10）：52-54.

[5] 倪曉霓，楊燕飛.HPLC測定牛黃解毒片中大黃素和大黃酚的含量[J].中成藥，2005，05：（25）：35-37.

[6] 倪曉霓，楊燕飛.反相高效液相色譜法測定感特靈膠囊中黃芩苷的含量[J].江蘇大學學報（醫學版），2004，08（30）：30-32.

[7] 楊水清，張尚斌，洪志勇.HPLC法測定保肝寧顆粒中大黃素的含量[J].中國中醫藥科技，2007，03（20）：23-24.

[8] 譚朝陽，尤昭玲. HPLC法測定化癥回生口服液中大黃素和大黃酚的含量[J].湖南中醫藥導報，2004，6（52）：92-93.

[9] 原永芳，劉愛波，金山叢，等.新脂康口服液中大黃素和大黃酚的HPLC法定量分析[J].中國藥師，2004，12（12）：940-942.