紫外分光光度法測定納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量

劉巖?張英鴿　孫嵐?姚紅娟

摘 要 目的 建立納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量的測定方法。方法 采用紫外分光光度法，起始波長：800nm，終止波長：190nm，掃描間隔：1.0nm，參比溶劑：5%葡萄糖注射液。測定卡鉑/ 5%葡萄糖溶液的紫外吸收譜，對濃度與吸光度值間的線性關(guān)系、方法的精密度、重復(fù)性以及樣品的穩(wěn)定性、回收率進行考察，對C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)中的卡鉑含量進行測定。結(jié)果 卡鉑/ 5%葡萄糖溶液在229nm處出現(xiàn)最大吸收峰；在濃度范圍0.64 ～64 ?g/mL內(nèi)，吸光度值與卡鉑濃度具有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），方法具有良好的精密度（n=6，RSD=0.13%）與重復(fù)性（n=6 RSD=1.69%），樣品性質(zhì)穩(wěn)定，在室溫避光條件下保存無顯著降解（n=5，RSD=0.63%），日內(nèi)回收率95.96%～96.93%，日間回收率95.68%～97.53%；C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)中，卡鉑的含量為50.57%。結(jié)論 該方法可用于對納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑的含量進行測定，具有良好的精密度與重復(fù)性，操作簡單，有較好的實用性。

關(guān)鍵詞 卡鉑 紫外分光光度法 納米藥物遞送系統(tǒng)

卡鉑（Carboplatin，CBP）的化學(xué)名稱為順-二氨-1，1-環(huán)丁酸烷鉑，是繼順鉑之后的第二代鉑類抗癌藥物，對肺癌、卵巢癌等多種癌癥具有良好的治療效果[1～3]，相對于順鉑具有更小的腎、胃腸毒性[4，5]。

無機納米材料C60作為抗癌藥物載體具有載藥量大、控釋性好、組織靶向性強的特點，建立C60 /卡鉑納米藥物遞送系統(tǒng)可以增強卡鉑對腫瘤組織的靶向性、提高腫瘤細(xì)胞外周與胞內(nèi)的藥物濃度，從而達到提高藥效，降低毒副作用的目的。

目前，卡鉑的檢測方法主要采用高效液相色譜[6～8]和原子吸收光譜[9，10]，這2種方法具有良好的靈敏度和較強的專屬性，但儀器價格昂貴、重現(xiàn)性欠佳。還有報道采用二階導(dǎo)數(shù)光譜法[11]、絡(luò)合分光光度法[12，13]、電感耦合等離子質(zhì)譜/發(fā)射光譜法[14]對卡鉑含量進行測定，但這些方法因樣品預(yù)處理過程復(fù)雜、樣品耗量大、檢測時間長等問題而沒有被廣泛采用。納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑含量的測定不僅要求方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬，還要考慮C60本身的吸附性可能對儀器造成的損害和背景干擾問題。紫外分光光度法具有操作簡單、迅速、經(jīng)濟的特點，準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好，吸附于比色池中的C60易于去除不會對儀器造成嚴(yán)重?fù)p害，同時C60在紫外光區(qū)內(nèi)無強吸收，不會對卡鉑的測定造成干擾。本文采用紫外分光光度計建立一種快速、準(zhǔn)確的卡鉑分析方法，以用于測定卡鉑在納米藥物遞送系統(tǒng)中的含量，為卡鉑的藥物開發(fā)打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

UNIC2800紫外可見分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司），KQ-500DE數(shù)控超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），AC-120S精密電子分析天平（德國Sartorius公司），卡鉑（北京偶合科技有限公司，純度≥98%），C60（濮陽市永新富勒烯科技有限公司，純度99.9%），5%葡萄糖注射液（石家莊四藥集團）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 檢測條件

起始波長：800nm，終止波長：190nm，掃描間隔：1.0nm，參比溶劑：5%葡萄糖注射液。圖1為卡鉑在5%葡萄糖溶液中的紫外吸收光譜，最大吸收峰位置為229nm。

2.2 線性關(guān)系考察

精確稱取卡鉑樣品2.8mg，用25mL 5%葡萄糖注射液定溶，超聲10min使卡鉑充分溶解，得到濃度為112?g/mL樣品，作為母液備用。配制濃度為64?g/mL、32?g/mL、25.6?g/mL、19.2?g/mL、12.8?g/mL、6.4?g/mL、3.2?g/mL、1.6?g/mL、0.64?g/mL的待測樣品，分別取上述樣品3mL于比色池中，在229nm處測定吸光度值，每個樣品平行測定3次。以樣品濃度（C， ?g/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度值（A）為縱坐標(biāo)，做線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.0105C+0.0082（R2=0.9984），結(jié)果表明在0.64～64 ?g/mL范圍內(nèi)，卡鉑濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2.3精密度測定

精確稱取1.2mg卡鉑，用30mL 5%葡萄糖注射液溶解，配制濃度為40?g/mL的待測樣品，在229nm處連續(xù)平行測定6次，記錄吸光度值。結(jié)果：6次測定的吸光度值RSD=0.13%，表明方法精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性測定

取2.3中所配濃度為40?g/mL的溶液，室溫條件下避光保存，每天測定一次，連續(xù)測定5天。5天檢測結(jié)果的RSD=0.63%，說明在卡鉑在5%葡萄糖溶液中室溫條件下避光保存較為穩(wěn)定，未出現(xiàn)顯著降解。

2.5 重復(fù)性測定

重新稱取6份質(zhì)量為1.2mg的卡鉑樣品，如2.3所述方法配制濃度為40?g/mL的待測樣，測定6份樣品的吸光度值，分析批內(nèi)變異情況。結(jié)果RSD=1.69%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.6 回收率測定

精確稱取卡鉑2.0mg，按高、中、低水平配成濃度為80?g/mL、40?g/mL、20?g/mL的待測樣品，每日測定3次，連續(xù)檢測3天，根據(jù)吸光度值和2.2項所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計算回收率，見表1。實驗結(jié)果表明，卡鉑的日內(nèi)回收率為95.96%～96.93%，日間回收率為95.68%～97.53%，說明回收率良好。

2.7 載藥量測定

精確稱取C60 10.0mg、卡鉑24mg于錐形瓶中，加入5%葡萄糖注射液20mL，避光攪拌24h，以16000r/min離心8min，收集上清液并稀釋10倍，在229nm處測定吸光度值，按照公式：

（m游離藥量 =C×稀釋倍數(shù)×稀釋體積，C為測定吸光度值代入2.2項標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算結(jié)果）。實驗結(jié)果（見表2）。

3 討論

以C60為藥物載體對化療藥物卡鉑進行吸附，可以實現(xiàn)提高藥效、降低毒副作用的目的。因C60經(jīng)長時間攪拌將有少量形成穩(wěn)定存在于水中的納米晶顆粒[15]，所以在收集到的游離藥液中存在C60，如果按照中國藥典中所采用的高效液相色譜法[16]對C60/卡鉑藥物遞送系統(tǒng)中的卡鉑含量進行測定，則可能遇到2點問題：（1）測定樣品中存在的C60在色譜中高保留，造成色譜柱污染；（2）譜峰不佳。而其它檢測方法如電感耦合等離子質(zhì)譜/發(fā)射光譜法、絡(luò)合分光度法則需要對樣品進行預(yù)處理，既增加了操作的復(fù)雜性又不利于回收樣品，還可能因預(yù)處理不當(dāng)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用紫外分光光度法對納米藥物遞送系統(tǒng)中卡鉑的含量進行測定，可以實現(xiàn)方便、快速、準(zhǔn)確的定量，同時避免C60的干擾，操作簡單，是一種良好的分析方法。

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