大黃不同炮制品中游離蒽醌的含量測定

摘要：目的：通過HPLC法比較大黃不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量。方法：采用Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為甲醇-水（70：30，磷酸調至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min；檢測波長：437nm。結果：大黃酸線性范圍為0.0132～0.132mg，r=0.9991，大黃素線性范圍為0.0066～0.132mg，r=0.9999。結論：大黃的不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量不同，以生大黃中大黃素、大黃酸的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

關鍵詞：大黃酸 大黃素 HPLC 生大黃 熟大黃 酒大黃大黃炭

大黃為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（Rheum tenguticum Maxim. ex Balf.）或藥用大黃（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根莖。2005版藥典一部規定大黃飲片為大黃除去雜質，洗凈，潤透，切厚片或塊，晾干；酒大黃為取凈大黃塊，加酒拌勻，悶透，至鍋內，用文火炒至規定的程度時，取出，放涼。照酒炙法炒干；熟大黃為取凈大黃塊，照酒燉法或蒸至內外均呈黑色，加酒拌勻，加入液體輔料拌勻，置適宜的容器內，加熱蒸透或至規定的程度時，取出，干燥；大黃炭為取凈大黃塊，照炒炭法炒至表面焦黑色、內部焦褐色。酒大黃善清上焦血分熱毒。用于目赤咽腫，齒齦腫痛。熟大黃瀉下力緩，瀉火解毒。用于火毒瘡瘍。大黃炭涼血化瘀止血。用于血熱有瘀出血癥。大黃中其主要活性成分為大黃蒽醌衍生物如大黃素、大黃酸、大黃酚等。本文考察了大黃不同炮制品中大黃酸、大黃素的含量，經測定在不同炮制品中大黃酸、大黃素在生大黃中的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

實驗部分

1 儀器與材料

島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10A紫外分析儀，CTO-10AS柱溫箱，DGU-12A脫氣機。KQ-25DE型數控超聲波清洗器。大黃酸標準品（中國藥品生物制品有限公司生產，批號為0757-200005），大黃素標準品（中國藥品生物制品有限公司生產，批號為110756-200110），生大黃[3]（天津中藥飲片廠生產，批號0509020），熟大黃（天津中藥飲片廠生產，批號0509016），酒大黃（天津中藥飲片廠生產，批號0508026），大黃炭（天津中藥飲片廠生產，批號0506023）。甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為甲醇-水（70：30，磷酸調至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min；檢測波長：437nm。進樣量為20μl。

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 制備大黃酸對照品溶液：稱取大黃酸對照品6.6mg，然后使用甲醇定容至50ml容量瓶中，就得到了大黃酸對照品儲備液體。

2.2.2 制備大黃素對照品溶液：和上面的方法一樣，也同樣可以制得大黃酸對照品儲備液體。

2.3 供試品溶液的制備

取生大黃、熟大黃、大黃炭、酒大黃藥材各20g，粉碎，過24目篩。精確稱取藥品粉末生大黃5.0056g、熟大黃5.0053g、大黃炭5.0049g、酒大黃5.0030g，分別置于4個50ml容量瓶中，加入40ml氯仿，于38℃超聲[1]提取30min，

靜置24h過濾，揮干氯仿，加適量甲醇轉溶于50ml容量瓶中。用移液管從50ml溶液中取1ml轉移至10ml容量瓶中定容，備用。

2.4 線性關系考察

2.4.1 大黃酸線性關系考察

精密吸取0.5ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml和10ml大黃酸對照品溶液，并加甲醇定容于10ml量瓶中，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值對進樣量進行線性回歸，得回歸方程Y= 673755.99X-33059.11，r=0.9991，表明大黃酸在0.0132～0.132mg范圍內呈現良好的線性關系。

2.4.2 大黃素線性關系考察

精密吸取0.5ml、1ml、2ml、4ml、6ml、8ml和10ml大黃素對照品溶液，并加甲醇定容于10ml量瓶中，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值對進樣量進行線性回歸，得回歸方程Y=249099.313X-15345426.367，r=0.9999，

表明大黃素在0.0066～0.132mg范圍內呈現良好的線性關系。

2.5 供試品含量測定

2.5.1 大黃酸的含量測定

取各個供試品按“2.3”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表1。

2.5.2 大黃素的含量測定

取各個供試品按“2.3”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件下測定，結果見表2。

3 結論

從測定結果可知以Shim-pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為甲醇-水（70：30，磷酸調至pH值=3）；柱溫：24℃；流速：1.0ml/min為實驗條件可使不同炮制品中大黃酸、大黃素達到基線分離。從色譜分析圖上可見，相同色譜條件下，大黃酸與大黃素成分所得樣品峰與各標準品峰對照，峰形一致，tR相同，因此認為A、B 分別為大黃酸、大黃素單體成分見圖1。可以認為HPLC法用于不同炮制品中大黃酸、大黃素含量的測定是一種簡便、有效的方法，同時HPLC法測定含量可為大黃的炮制方法提供科學依據。通過測定可知大黃酸、大黃素在生大黃中的含量最多，大黃炭中大黃素的含量最少，酒大黃中大黃酸的含量最少。

4 討論

目前大黃的炮制方法很多，各種方法對大黃中蒽醌類成分的含量都有不同的影響。本實驗研究的目的是要提取大黃的不同炮制品中大黃酸、大黃素成分，并對其含量進行測定，以便考察不同的炮制方法對大黃酸、大黃素含量的影響。根據游離蒽醌的溶解性，實驗過程中，以氯仿為溶劑，采用超聲提取大黃酸、大黃素等蒽醌成分，以甲醇：水（70：30）加磷酸調PH=3為流動相，蒽醌類單體成分能達到基線分離，保留時間適宜。本研究還證明，pH值萃取法[2]分離度不好，對于性質相似、酸性強弱差別不大的大黃酸、大黃素等蒽醌單體成分分離存在局限性。因此以甲醇：水（70：30）為流動相，進行分離、純化，游離蒽醌成分可得到較好的分離。

參考文獻：

[1]鄭志華.HPLC法測定大黃提取物中5種蒽醌的含量，廣東藥學院學報，2004.12；第20卷，第16期：594～595頁.Zheng Z H Determination of five anthraquinone in Dahuang contacts by HPLC method[J].J Guangdong Coll Med，2004，12（20），16，p594

-595.

[2]肖艷，杜智敏.大黃中有效成分提取分離條件的優化，中國臨床藥理學與治療學2003.Feb；98～100.Xiao Y，Du Z M，Optimize of Effects Component Distill and Separate Condition in Dahuang[M].China Clin Pharmacol and Therap 2003.Feb；98-

100.

[3]國家藥典委員會編.中華人民共和國的藥典.2005版第一部，北京：化工出版社，2005（1）.Nation Pharmacopoeia Committee [R].

Ch.P，2005（1），Beijing，Chemistry and Industry Press.