一例仔豬水腫病的實驗室診斷

亢文華，訾占超，汪葆玥，馬英

（中國動物疫病預防控制中心，北京朝陽 100125）

（一）發病情況 河北省某豬場飼養母豬150頭，2013年4月初，斷奶仔豬陸續出現急性死亡，多在斷奶后40～60日齡發病，發病率為10%，病死率達到90%以上。

（二）臨床癥狀 主要癥狀有精神沉郁，食欲下降，口流白沫，輕度腹瀉，后期便秘，體溫無明顯變化。發病仔豬均有神經癥狀，表現肌肉震顫，不時抽搐，四肢泳動，共濟失調，盲目前進或做轉圈運動。面部、眼瞼及頸部有水腫，死前后軀麻痹。結膜高度充血，90%的仔豬在表現癥狀后不久死亡，病程為半天至1 d。剖檢3頭病死豬可見眼瞼及結膜水腫，頜下淋巴結與腸系膜淋巴結高度水腫。胃大彎高度水腫，胃壁腫脹，賁門部、胃底部黏膜明顯腫脹，呈半透明狀，在黏膜下層和肌層之間聚積膠凍樣黃色液體。小腸黏膜彌漫性出血，腸腔內充滿茶色帶氣泡的液體。心包積液，腎腫大，腎盂水腫、充血。無菌條件下采集典型發病仔豬的肝臟進行細菌分離培養及實驗室鑒定，現將結果報告如下。

（三）實驗室檢查

1.實驗室鏡檢。無菌取肝、脾、腸系膜淋巴結觸片，均見有革蘭氏陰性、兩端鈍圓、分散或成對排列的短小桿菌。

2.細菌培養。無菌取瀕死豬的肝臟接種于普通肉湯試管、普通瓊脂平板培養基中，37℃培養24 h，普通肉湯均勻渾濁，試管底部出現黏膩的沉淀，輕搖后呈辮狀升起。普通瓊脂平板生成圓形、表面光滑濕潤、邊緣整齊、灰白色半透明的中等大小的菌落。分別挑取肉湯培養物和單菌落做涂片，革蘭氏染色鏡檢，均可見到大量革蘭氏陰性小桿菌。將鏡檢過的單個菌落分別接種到麥康凱和鮮血瓊脂平皿培養基上分別出現粉紅色菌落和β溶血。

3.生化試驗。該菌株能發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、山梨糖、甘露醇、木糖、纖維二糖產酸產氣，不發酵蕈糖，靛基質試驗陽性，M-R陽性、V-P陰性，不能利用檸檬酸鹽，不產生硫化氫，接觸酶試驗陽性。

4.藥敏試驗。藥敏試驗高度敏感的藥物：頭孢噻肟、頭孢氨芐。耐藥的藥物：阿莫西林、阿米卡星、環丙沙星、諾氟沙星、左氧氟沙星、氨芐西林、多西環素、新霉素、卡那霉素、羧芐青霉素。

5.致病性試驗。將純化后的細菌接種于普通肉湯，37℃培養24 h，腹腔注射小白鼠4只，每只0.2 ml；對照組2只小白鼠腹腔注射滅菌普通肉湯0.2 ml/只。接種后12 h，試驗組小白鼠有呆滯、呼吸困難、尾部發紺、活動減少、被毛側立、采食減少等癥狀，而對照組小白鼠表現正常。24 h 后，試驗組小白鼠先有2只死亡，余下2只在36 h內均死亡，而對照組小白鼠生長狀況良好。剖檢病死小白鼠，見其肝臟、肺臟腫大，腹腔積液。取其肝臟涂片鏡檢，可見形態典型的革蘭氏陰性、兩端鈍圓、分散或成對排列的短小桿菌。再進一步將該病料進行病原菌的分離培養、生化試驗，其結果同上述分離菌的結果一樣。說明此次分離所得菌具有致病性。

6.PCR。根據GenBank中發表的stx2e基因序列在分析比較的基礎上根據保守區域設計一對引物用于PCR對產志賀毒素大腸桿菌的鑒定。

采用常規PCR反應系統，擴增出與預期相同的620 bp片段，表明該分離株為產志賀毒素的大腸桿菌（圖 1）。

(四)防治

1.加強飼養管理，搞好環境衛生。加強消毒,用0.5%百毒殺和0.2%過氧乙酸上下午交替噴霧消毒。

2.由于仔豬出現水腫病時，大部分已吸收了內毒素，所以用抗生素治療收效甚微?；钾i出現水腫和神經癥狀時，用5%的葡萄糖水250～500 ml、安鈉咖0.5～2 g、20%甘露醇50 ～100 ml，混合后靜脈注射，1 次/d，連續注射3 d，以緩解腦部水腫和顱內壓升高。

圖1 PCR鑒定結果

3.減少或消除應激因素，改善斷奶仔豬的飼養管理。一是斷奶前的仔豬要提早補料，訓練采食，少喂多餐，飼料喂量逐漸增加。斷奶后不宜突然更換飼料，要限制高蛋白、高碳水化合物飼料的喂量，增加日糧中纖維素的含量；二是在氣候多變的春秋季節，要保持豬舍內的溫度恒定，尤其要注意寒流、暴風雨的侵襲，做到防寒保暖；三是斷奶后每天口服 MgSO4，同時在飼料或飲水中加入敏感的抗菌藥，可大大減少水腫病的發生。

采取以上綜合措施后，該病得到了有效控制。半月后回訪時，該豬場再未發現仔豬水腫病臨床病例。

（五）討論

1.本病的診斷需要與偽狂犬病、腦膜腦炎型鏈球菌病等疾病相區別。豬偽狂犬病臨診表現因日齡不同而有很大差異，初生仔豬即可發病，表現與水腫病相似的神經癥狀，但體溫升高41℃～41.5℃，20日齡以上到斷奶前后的仔豬癥狀輕微，表現體溫41℃以上，呼吸短促，食欲減退或廢絕，耳尖發紫，發病率、死亡率都低于15日齡以內豬。腦膜腦炎型鏈球菌病在出現神經癥狀的同時，個別豬會出現多發型關節炎、關節腫大。

2.產志賀毒素大腸桿菌的毒力因子主要有2種，即菌毛和毒素。致仔豬水腫病產志賀毒素大腸桿菌的菌毛主要是黏附性菌毛（F18），但也有大腸桿菌K88以及沒有菌毛的菌株，而引起血管變性從而出現水腫的毒素卻只有致水腫病2型類志賀毒素（Stx2e）一種；因此，菌毛的有無及其類型不能作為鑒定產志賀毒素大腸桿菌的指標，而必須依賴于Stx2e的檢測。傳統鑒定Stx2e方法是用細胞毒性試驗及免疫學試驗，但其鑒定程序相對繁瑣，且難以與志賀樣毒素1型（Stx1）、志賀樣毒素2型（Stx2）區分；因此，本試驗采用鑒定產Stx2e型產志賀毒素大腸桿菌的PCR方法該方法具有特異和快速特點，能夠很好地檢測出仔豬水腫病。

（略）