非小細(xì)胞肺癌患者胸腔積液中VEGF聯(lián)合CYFRA21-1、CEA檢測(cè)的臨床意義

朱穎 文昱婷 楊旸 楊健 張秀偉

近年來(lái)，肺癌的發(fā)病率居高不下，惡性胸腔積液主要是由腫瘤侵犯胸膜所致，故及時(shí)診斷并治療十分重要，然而對(duì)于臨床醫(yī)師來(lái)說，惡性胸腔積液的診斷仍是棘手的難題。早期診斷與肺癌的治療及預(yù)后關(guān)系密切，且不同的病理類型對(duì)治療的反應(yīng)各不相同。尋找胸腔積液中高敏感性、高準(zhǔn)確性的標(biāo)志物來(lái)早期診斷良惡性胸水仍然是臨床研究的熱點(diǎn)。本研究聯(lián)合檢測(cè)胸水中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、細(xì)胞角蛋白片段21-1(CYFRA21-1)和癌胚抗原(CEA)水平，初步探討其在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)早期診斷中的臨床價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 一般資料 選取2011年1月至2012年6月在我院確診惡性胸腔積液48例，其中男32例，女16例，年齡51～89歲，平均(68.1±3.5)歲，均經(jīng)胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)、纖維支氣管鏡病理活檢或經(jīng)皮肺穿刺細(xì)胞學(xué)等方法得到病理學(xué)證實(shí)。組織學(xué)分型:腺癌41例，鱗癌7例。均為初診患者。所有病例排除其他癌癥，采取標(biāo)本之前未行抗癌治療。

1.2 試劑和儀器 VEGF試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL公司;CYFRA21-1試劑盒購(gòu)自芬蘭Wallac AB公司;CEA試劑盒為瑞典IDL Biotech AB公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀為美國(guó)Biotek synergy2多功能酶標(biāo)儀。

1.3 方法 常規(guī)無(wú)菌條件下穿刺抽取NSCLC患者胸水，留取樣本10 ml，1500 r/min離心10 min，分離上清液，置于－40℃冰箱保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定胸水中 VEGF、CYFRA21-1、CEA水平，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS 16.0，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 48例NSCLC患者中，胸水中VEGF、CYFRA21-1和CEA水平檢測(cè)陽(yáng)性率分別為52.1%(25/48)、31.3%(15/48)和66.7%(32/48)。

2.2 聯(lián)合檢測(cè)胸水VEGF、CYFRA21-1和CEA陽(yáng)性表達(dá)情況與NSCLC患者臨床病理關(guān)系 48例NSCLC患者胸水中，VEGF單陽(yáng)性表達(dá)在不同年齡、性別和細(xì)胞分化程度的患者中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是與腫瘤臨床分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。VEGF+CYFRA21-1或VEGF+CEA聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率則與腫瘤細(xì)胞分化程度、臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面均有顯著相關(guān)性(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 VEGF、CYFRA21-1和CEA聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率比較(n，%)

3 討論

惡性胸腔積液是由惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移或原發(fā)于胸膜的惡性腫瘤所致，是NSCLC常見的并發(fā)癥之一。胸水細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)其診斷特異性較高，但敏感性低，陽(yáng)性率在30%左右［1］，胸膜活檢存在創(chuàng)傷性，具有較大的盲目性，陽(yáng)性率一般為40% ～75%［2］，而胸腔鏡檢查創(chuàng)傷大，且對(duì)胸腔積液的早期診斷價(jià)值還有待商榷，均不能滿足臨床的需要［3-4］。惡性胸腔積液的產(chǎn)生，通常意味著疾病的嚴(yán)重性和患者較短的生存期，因此，盡早明確診斷可為治療贏得時(shí)間。CEA是常用的腫瘤標(biāo)記物，在臨床廣泛應(yīng)用，但也存在敏感性較低的缺點(diǎn)，研究和尋找有關(guān)惡性胸腔積液診斷新的手段和方法已成為當(dāng)前腫瘤臨床和基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)。

腫瘤血管新生是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，血管通透性的增加是胸腔積液形成的主要機(jī)制之一，VEGF是腫瘤組織中促進(jìn)血管病理性形成的介導(dǎo)物，具有強(qiáng)大的促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、增殖，誘導(dǎo)新生血管形成，并可促進(jìn)微血管通透性增強(qiáng)，與腫瘤細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)及浸潤(rùn)密切相關(guān)，其水平越高，提示腫瘤越趨于惡性［5］。現(xiàn)已經(jīng)證實(shí)，在肺癌等多種腫瘤組織中有VEGF及其受體的表達(dá)，瘤體組織VEGF表達(dá)水平與其微血管密度及惡性程度成正相關(guān)，并明顯高于非腫瘤組織。VEGF與肺癌的血管形成、癌細(xì)胞增殖、病變侵襲程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系密切［6］。對(duì)多種腫瘤的研究已表明，有VEGF mRNA高表達(dá)的病人5年存活率低，認(rèn)為與多種組織類型的腫瘤細(xì)胞分泌VEGF，通過旁分泌生長(zhǎng)刺激來(lái)引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及血管形成，使得腫瘤進(jìn)展有關(guān)［7］。

細(xì)胞角蛋白(CKs)是分布于上皮細(xì)胞的中間纖維，其表達(dá)方式反映了上皮細(xì)胞分化的不同途徑，主要應(yīng)用于胃腸道、乳腺、前列腺及肺的惡性腫瘤。近年來(lái)，CKs作為檢測(cè)循環(huán)癌細(xì)胞的指標(biāo)，越來(lái)越得到人們的重視。CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的片段，為細(xì)胞骨架標(biāo)記物，當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生溶解或壞死時(shí)，將細(xì)胞角蛋白釋放入體中，其濃度及敏感性隨病情進(jìn)展而升高。在NSCLC患者中，各種類型的肺癌CYFRA21-1均可升高，尤其是鱗癌升高更顯著［8-9］。

本文研究結(jié)果顯示，NSCLC患者胸水中VEGF、CYFRA21-1和CEA的陽(yáng)性檢出率分別為52.1%、31.3% 和 66.7% ，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道接近［6，8］。

相關(guān)研究表明，在肺癌組織中 VEGF和 CYFRA21-1均高表達(dá)，與肺癌臨床分期有關(guān)，可作為預(yù)測(cè)肺癌預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。在胸腔積液中，VEGF與CYFRA21-1表達(dá)也相應(yīng)增高，但兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC惡性胸腔積液的臨床研究較少。本研究通過VEGF聯(lián)合CYFRA21-1、CEA檢測(cè)在NSCLC患者胸水中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性表達(dá)率在NSCLC患者的不同細(xì)胞分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，為臨床尋找新的快速、有效的診斷指標(biāo)，為提高NSCLC惡性胸腔積液的早期診斷和病情判斷提供了參考，同時(shí)進(jìn)一步證明了這些指標(biāo)單一和聯(lián)合應(yīng)用時(shí)與NSCLC臨床分期及預(yù)后的相關(guān)性。

［1］Woenckhaus M，Grepmeier U，Werner B，et al.Microastillite analysis of pleural supernatants could increase sensitivity of pleural fluid cytology［J］.Mol Diagn，2005，7(4):517-524.

［2］陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)［M］.7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:110-116.

［3］Blanc FX，Atassi K，Bignon J，et al.Diagnostic value of medicai thoracoscopy in pleural disease:a 6-year retrospective study［J］.Chest，2002，121(5):1677-1683.

［4］Brims FJ，Arif M，Chauhan AJ，et al.Outcomes and complications following medical thoracoscopy［J］.Clin Respir J，2012，6(3):144-149.

［5］Yano S，Herbst RS，Shinohara H，et al.Treatment for malignant pleural effusion of human lung adenocarcinoma by inhibition of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinas phosphorylation［J］.Clin Cancer Res，2000，6(3):957-965.

［6］Shimanuki Y，Takahashi K，Cui R，et al.Role of serum vascular endothelial growth factor in the prediction of angiogenesis and prognosis for non-small cell lung cancer［J］.Lung，2005，183(1):29-42.

［7］Zhan P，Wang J，Lv XJ，et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in patients with lung cancer:a systematic review with meta-analysis［J］.J Thorac Oncol，2009，4(9):1094-1103.

［8］Molina R，Auge JM，Bosch X，et al.Usefulness of serum turmor markers，including progastrin-releasing peptide，in patients with lung cancer:correlation with histology［J］.Tumor Biol，2009，30(3):12l-129.

［9］Gu P，Huang G，Chen Y，et al.Diagnostic utility of pleural fluid carcinoembryonic antigen and CYFRA 21-1 in patients with pleural effusion:a systematic review and meta-analysis［J］.Clin Lab Anal，2007，21(6):398-405.