Pax9在非小細胞肺癌患者血清中的表達及臨床意義

莫曉能 龔蕊

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，非小細胞肺癌是肺癌中最常見的類型，其發病率和死亡率逐年上升。因肺癌起病隱匿，早期可無任何癥狀，多數患者首次確診時已為晚期，失去了手術治療機會，預后較差，因此尋找一種靈敏、特異且操作簡便的檢測方法對肺癌的診斷及預后具有重要意義。Pax基因是一類在進化上高度保守的基因家族，廣泛存在于從果蠅到人類的脊椎動物和無脊椎動物中，其編碼的蛋白是一組重要的轉錄因子，它們調節很多基因的轉錄表達，從而進一步影響細胞的生長、分化、浸潤等生物學行為。Pax9是Pax基因家族的一員，研究表明，Pax9在人類涎腺腫瘤、口腔黏膜鱗狀細胞癌等多種腫瘤組織中表達增強［1，2］。且已有研究顯示Pax9對肺的發育具有潛在的功能，若運用RNA干擾技術降低PAX9的shRNA水平，會降低肺癌細胞株的致癌性［3］。本研究通過檢測NSCLC患者血清中Pax9的濃度，初步探討Pax9基因在肺癌發生、發展及診斷、預后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 35例NSCLC患者血清標本取自2009年1月至2010年12月在我院就診并確診為NSCLC的患者，其中男19例，女16例，年齡46～78歲，平均(66.7±9.5)歲。按2009年WHO肺癌組織學分類標準和IASLC的TNM臨床分期，鱗癌21例，腺癌14例，Ⅰ期7例、Ⅱ期 12例、Ⅲ期10例，IV期6例。42例肺良性病變患者血清標本取自我院2012年1月至2012年9月的住院患者，其中男25例，女17例，年齡42～85歲，平均(73.1±11.1)歲。30例健康者為健康體檢人員，男19例，女11例，年齡38～55歲，平均(46.7±6.1)歲。

1.2 臨床資料 所有NSCLC患者均有完整的臨床資料和隨訪資料。末次隨訪至2012年5月。總生存時間為1個月至41個月(從確診時間開始到死亡時間或末次隨訪時間)，中位生存時間為26個月。

1.3 標本收集 所有患者及健康者均抽取空腹5 ml靜脈血置于肝素抗凝管，室溫靜置半小時后1000 rpm離心5 min，立即分裝上清液，置于-20℃ 冰箱內保存。

1.4 方法與試劑 血清中Pax9蛋白含量的測定采用酶聯免疫吸附(ELISA)法，人Pax9 ELISA試劑盒購自上海藍基生物科技有限公司，檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5 統計學方法 所測數據采用SPSS 13.0統計軟件包進行統計學分析。定量資料以均數±標準差()表示，兩組定量資料組間比較采用t檢驗。采用Kaplan-Meier和log-rank檢驗進行生存分析。采用Cox比例風險模型進行預后的多因素回歸分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清中Pax9表達水平的比較 NSCLC患者血清Pax9的濃度顯著高于肺良性病變患者和健康者(P＜0.05)(見表1)。

表1 各組血清Pax9表達水平的比較(，例)

表1 各組血清Pax9表達水平的比較(，例)

注:▲NSCLC組與肺良性病變組比較;▲▲NSCLC組與健康組比較

組別 例數 血清Pax9(ng/ml) P值NSCLC組35 144.6±87.4肺良性病變組 42 94.8±44.4 0.004▲健康組 30 103.3±58.3 0.032▲▲

2.2 NSCLC患者血清Pax9的表達水平與患者臨床病理特征之間的關系 結果顯示，NSCLC患者血清Pax9的表達水平與患者性別、年齡、吸煙史及淋巴轉移等臨床病理特征無相關性(P＞0.05)，與腫瘤病理分型、TNM分期顯著相關(P＜0.05)。腺癌患者血清中Pax9的濃度高于鱗癌患者。血清中Pax9的濃度隨TNM分期而升高，Ⅲ-Ⅳ 期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期。(見表2)。

表2 Pax9的表達與肺癌臨床病理特征之間的關系

2.3 Pax9表達與NSCLC患者預后的關系 根據NSCLC患者血清中Pax9的濃度平均值144.6 ng/ml將35例NSCLC患者分為低表達組(＜144.6 ng/ml)和高表達組(≥144.6 ng/ml)。Kaplan-Meier分析結果顯示:高表達組的中位生存時間為23.0個月，明顯低于低表達組的中位生存時間29.0個月，差異有統計學意義(P=0.014)(見圖1)。

圖1 非小細胞肺癌不同Pax9表達水平的生存分析

采用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，引入模型的因素有性別、年齡、吸煙史、腫瘤病理分型、TNM分期、淋巴轉移和Pax9表達等，結果顯示:腫瘤TMN分期、淋巴轉移和Pax9表達對NSCLC患者預后具有統計學意義(P＜0.05)(見表3)。

表3 多因素分析臨床病理因素對總生存時間的影響

3 討論

Pax9是Pax基因家族的一員，其編碼的蛋白由兩部分組成，一部分為成對結構域(Paired domain，PD)，由配對盒編碼，含128個氨基酸，由兩個獨立的子域構成:氨基末端PAI域和梭基末端RED域，PAI可直接與DNA結合，在進化過程中保持高度保守，RED則間接參與DNA的連接，在種屬間有較大差異;另一部分為八肽域(Octapeptide，OP)［4，5］。Pax9 基因編碼的轉錄因子在胚胎發育中的作用已十分明確，它在顱面和肢體發育中起重要作用，還與牙齒的發生、分化密切相關［6］，目前已知幾種Pax9基因的突變導致一些牙齒發育相關的畸形，如Pax9的基因的錯義突變83 g→C，使得Pax9成對結構域N末端pro替代了arg，導致了包括少牙畸形在內的牙齒發育畸形［7］。研究顯示，Pax9在人類多種腫瘤組織中表達異常，如Pax9與食管鱗癌的發生、發展及惡性程度相關，與子宮內膜樣腺癌的組織學分級、臨床分期、浸潤程度相關［8，9］。Lee J C等研究表明Pax9一方面能夠上調BCL-2表達使caspase-3失活，從而抑制凋亡發生，另一方面可以降低bax蛋白表達，促使凋亡相關蛋白(PARP)下調導致caspase-3失活，抑制凋亡發生［10］。Pax9導致腫瘤發生的機制尚未完全清楚，還有待于進一步研究。

本研究檢測了35例NSCLC患者、42例肺良性病變患者及30例健康對照者血清中Pax9的濃度，結果顯示，NSCLC患者血清Pax9的表達水平明顯高于肺良性病變患者及健康者，差異有統計學意義(P＜0.05)，表明Pax9在肺癌發生發展中起一定作用，檢測其血清含量有助于NSCLC的診斷。同時，本研究還對NSCLC患者血清中Pax9的表達水平與其臨床病理特征的關系進行了分析，結果表明，NSCLC患者血清Pax9的表達水平與患者性別、年齡、吸煙史及淋巴轉移等臨床病理特征無相關性(P＞0.05)，與腫瘤病理分型、TNM分期顯著相關(P＜0.05)。采用Kaplan-Meier法進行生存分析，結果顯示，高表達患者生存時間明顯低于低表達患者(P＜0.05)。同時COX回歸分析顯示，腫瘤TMN分期、淋巴轉移和Pax9表達對患者預后具有明顯意義，Pax9在血清中的高表達有可能提示肺癌患者預后不良。但Pax9在血清中的高表達影響因素較多，Pax9的表達與肺癌的關系有待于在以后的研究中進一步證實。

［1］苗雷英，李祥偉，劉超，等.涎腺腫瘤中Pax9基因的表達及其意義.口腔醫學研究，2006(1).

［2］吳健.口腔黏膜鱗狀細胞癌Pax9基因的表達及意義.吉林大學，2005.

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［6］趙計林，陳揚熙，鮑朗，等.中國先天性缺失牙患者PAX9基因的新突變.中華口腔醫學雜志，2005(4):266-269.

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［9］徐傲，陳柯，郭真理，等.子宮內膜樣腺癌中TBX2、PAX9的表達及其相關性.臨床與實驗病理學雜志，2012(2).

［10］Lee J C，Sharma M，Lee Y H，et al.Pax9 mediated cell survival in oral squamous carcinoma cell enhanced by c-myb.Cell Biochem Funct，2008，26(8):892-899.