睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)視神經(jīng)損傷保護(hù)的研究

楊惠婷 姚 鵬 鮑永新

睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)視神經(jīng)損傷保護(hù)的研究

楊惠婷 姚 鵬 鮑永新

目的觀察球后注射神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Ciliary neurotrophicfactor,CNTF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活的作用。方法將45只健康成年大鼠、體重200～225g、Wistar大鼠隨機(jī)分成三組，對(duì)照組、CNTF治療組、bFGF治療組每組15只，每只動(dòng)物進(jìn)行了單眼實(shí)驗(yàn)，另一只眼為正常對(duì)照組。比較各組的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果視神經(jīng)急性損傷后bFGF組和CNTF組各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)指標(biāo)比較P＞0.05；隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)，各組節(jié)細(xì)胞數(shù)均有丟失，bFGF組和CNTF組分別與生理鹽水組比較P＜0.01，兩組之間比較P＞0.05；傷后7天生理鹽水組膠質(zhì)細(xì)胞明顯增多，視神經(jīng)纖維排列紊亂，而bFGF組和CNTF組傷后28天視神經(jīng)纖維的排列略有稀疏，細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)仍保持得較完整。結(jié)論CNTF治療組與bFGF治療組均對(duì)視神經(jīng)有保護(hù)作用，二者差異無(wú)顯著性。

bFGF；CNTF；視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞；視神經(jīng)損傷；視神經(jīng)保護(hù)

目前，臨床上多采用大量皮質(zhì)類固醇激素沖擊療法、脫水療法、高壓氧療法、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)療法及視神經(jīng)管減壓術(shù)等方法對(duì)視神經(jīng)損傷進(jìn)行再生與修復(fù)。而營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)類藥物雖種類繁多，但效果并不盡如人意，因此尋找促進(jìn)視神經(jīng)損傷后的再生與修復(fù)及對(duì)受損傷視神經(jīng)有效的保護(hù)措施，是臨床研究和基礎(chǔ)研究共同關(guān)注的熱點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康成年SD（Sprague-Dawley）大鼠45只，雄性，體重200～250g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、CNTF治療組、bFGF治療組，每組15只。各組又分為7、14、21、28天四個(gè)時(shí)間段，每組15只大鼠，每只動(dòng)物進(jìn)行單眼實(shí)驗(yàn)，另一眼作為正常對(duì)照組。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組視神經(jīng)夾挫傷后，傷眼球后立即注射0.9%生理鹽水注射液0.1ml、CNTF0.1ml、bFGF 0.1ml（2000u），雙眼分別于傷后7、14、21、28天隨機(jī)處死動(dòng)物取材，每次5只。

1.3 觀察方法

1.3.1 病理學(xué)觀察0.6%戊巴比妥鈉過(guò)量給藥處死大鼠，盡量多保留球后視神經(jīng)摘除眼球。置于10%中性福爾馬林溶液固定，隔日，沿角膜緣環(huán)形剪開(kāi)，去除晶狀體，固定24h。固定后眼球的石蠟包埋，以視神經(jīng)和外直肌縫線處為標(biāo)志，于視盤邊緣向顳側(cè)切片，連續(xù)切片三張，HE染色。留取部分視神經(jīng)組織，HE染色，縱向切片。

1.3.2 RGC計(jì)數(shù)及軸突形態(tài)學(xué)觀察由視盤邊緣向顳側(cè)取材連續(xù)切片三張，長(zhǎng)寬固定HE染色，光鏡40倍下選取RGC最密集的區(qū)域行RGC計(jì)數(shù)，每片連數(shù)兩個(gè)視野；取球后視神經(jīng)3mm，HE染色，光鏡下觀察軸突形態(tài)學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)正常組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)與人視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)相似，內(nèi)界膜清楚，神經(jīng)纖維層較稀疏，水平排列，較規(guī)整；節(jié)細(xì)胞呈單層排列，胞核較大，呈圓形或橢圓形，染色較淡，排列整齊；內(nèi)網(wǎng)狀層較厚、疏松，呈較明顯的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；內(nèi)核層由3～5層細(xì)胞構(gòu)成，胞核較大，染色稍深；外網(wǎng)狀層明顯薄于內(nèi)網(wǎng)狀層；外核層較厚，由8～10層細(xì)胞組成，胞核較小，染色深，排列較緊密；外界膜邊界清楚、整齊。視神經(jīng)夾挫傷后，初期節(jié)細(xì)胞皺縮變小，對(duì)照組隨時(shí)間延長(zhǎng)，節(jié)細(xì)胞分布愈發(fā)稀疏，細(xì)胞間出現(xiàn)空泡。節(jié)細(xì)胞核亦明顯稀疏，大而染色淺的細(xì)胞核基本消失。28天時(shí)最明顯。

CNTF治療組和bFGF組在各階段內(nèi)形態(tài)學(xué)上較接近，隨治療時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞間逐漸出現(xiàn)少量空泡，細(xì)胞核緩慢丟失。

2.2 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)治療7、14、21、28天時(shí)，三個(gè)給藥組分別與正常對(duì)照組比較P＜0.01，差異有顯著性；bFGF治療組和CNTF治療組分別與對(duì)照組比較，P＜0.01，差異有顯著性；bFGF組和CNTF治療組兩組間比較P＞0.05，差異無(wú)顯著性。見(jiàn)表1。

表1 各時(shí)間點(diǎn)各組節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)

3 討論

bFGF是近年來(lái)研究中較為廣泛而又深入的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，國(guó)內(nèi)外大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)bFGF對(duì)促進(jìn)中樞神經(jīng)的再生有確切意義，并且小部分應(yīng)用于臨床，比如治療視神經(jīng)疾病。bFGF在正常中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育階段是一個(gè)重要的誘導(dǎo)劑，與其它生長(zhǎng)因子共同在神經(jīng)系統(tǒng)的塑型過(guò)程中發(fā)揮作用，國(guó)內(nèi)李景恒用其治療急性多發(fā)性視神經(jīng)炎20例療效顯著，認(rèn)為其主要作用是阻止神經(jīng)元繼發(fā)死亡和促進(jìn)神經(jīng)組織的再生[1]。并有研究顯示，在治療中發(fā)現(xiàn)治療效果除了與年齡有關(guān)外，還與病程長(zhǎng)短及視力損害程度有關(guān)[2]。本實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，傷后7天對(duì)照組的節(jié)細(xì)胞即有明顯死亡，隨時(shí)間推移每組各時(shí)間點(diǎn)節(jié)細(xì)胞數(shù)逐漸減少，但CNTF組和bFGF組之間比較差異始終無(wú)顯著性。說(shuō)明CNTF組和bFGF組在神經(jīng)損傷后軸突再生的調(diào)節(jié)中有許多獨(dú)特的功能。

[1] 李景恒.20例急性多發(fā)性神經(jīng)根炎細(xì)胞生長(zhǎng)肽療效觀察[J].臨床腦電學(xué)雜志,1997,6(4)：255.

[2] 彭化龍.細(xì)胞生長(zhǎng)肽對(duì)外傷性神經(jīng)萎縮的療效觀察[J].中國(guó)實(shí)用眼科雜志,1997,15(11)：680.

R774.6

A

1673-5846(2013)03-0263-02

牡丹醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157011