不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿溶出度的比較

陳曉蘭，石晉枝，張永萍，徐 劍，劉 毅

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

三黃片是由大黃、黃芩浸膏和鹽酸小檗堿經(jīng)加工提取制成的糖衣片或薄膜片，可清熱解毒、瀉火通便，用于三焦熱盛所致目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃、便秘，亦用于急性胃腸炎、痢疾[1]。其臨床應(yīng)用廣泛，生產(chǎn)廠家眾多，但各廠家生產(chǎn)條件和生產(chǎn)工藝的不同，臨床療效也不同。三黃片中鹽酸小檗堿是發(fā)揮抗菌消炎作用的主要成分，即三黃片中鹽酸小檗堿的含量及在體內(nèi)的釋放速度與程度都直接影響臨床療效。而在三黃片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有對(duì)鹽酸小檗堿等有效成分溶出度的控制指標(biāo)。本研究中測(cè)定了市場(chǎng)上10個(gè)廠家的三黃片中鹽酸小檗堿的溶出度[2]，計(jì)算溶出率且分別繪制累積溶出曲線，并對(duì)各溶出曲線進(jìn)行方程擬合，為三黃片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

RC－80型藥物溶出測(cè)試儀(天津天光);紫外可見分光光度計(jì)(GBC Cintra，澳大利亞照生公司);AE/240型電子天平(上海梅特儀器有限公司);科導(dǎo)SK8210HP型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);JA2030型全自動(dòng)天平(上海良平儀器表有限公司)。鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110713－200911);甲醇(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);鹽酸(重慶川東化工有限公司，批號(hào)為20101101);水為純化水。10個(gè)廠家樣品分別為:A廠家(襄樊隆中藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為100901，50片/袋);B廠家(河南圣光集團(tuán)三恩藥業(yè)有限公司，批號(hào)為11051501，規(guī)格為50片/袋);C廠家(廣西恒拓集團(tuán)仁盛制藥有限公司，批號(hào)為100902，規(guī)格為50片/袋);D廠家(河南濟(jì)源濟(jì)世藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20110917，規(guī)格為24片/盒);E廠家(亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為110507，規(guī)格為20片/盒);F廠家(廣西金頁(yè)制藥有限公司，批號(hào)為100901，規(guī)格為50片/袋);G廠家(河南創(chuàng)新藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1103211，規(guī)格為48片/袋);I廠家(陜西盤龍制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)為2011001，規(guī)格為24片/盒)。H廠家(安徽華佗國(guó)藥股份有限公司，批號(hào)為20110404，規(guī)格為24片/盒);J廠家(湖北仁悅藥業(yè)有限公司，批號(hào)為110803，規(guī)格為50片/袋)。前8種均為糖衣片，后兩種均為薄膜片。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描，選擇具有較大較穩(wěn)定吸收的波長(zhǎng)345 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品9.46 mg，加0.1 mol/L鹽酸溶液制成9.46 g/L的貯備液。再精密量取貯備液0.1 mL置10 mL容量瓶中，用 0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋并定容至 9.46 μg/mL，即得對(duì)照品溶液。取各廠家的三黃片各兩片，分別研細(xì)，倒入具塞錐形瓶中，精密加入甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液60 mL，并用溶劑潤(rùn)洗研缽，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置25 mL容量瓶中用甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液稀釋至刻度線，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，分別取鹽酸小檗堿的貯備液 0.05，0.10，0.30，0.50，0.70，0.90，1.10，1.30 mL 用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋并定容至50 mL容量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液為空白對(duì)照，在345 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。回歸方程為Y=45.367 X+0.035(R2=0.999 3)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在0.946～24.600 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果的 RSD=1.53%，表明儀器的精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批供試品，依法制備6份供試品溶液，測(cè)定吸光度。結(jié)果的 RSD=2.70%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h時(shí)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果吸光度無明顯變化，RSD=1.27%，表明鹽酸小檗堿在甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液中12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測(cè)定

按照2010版《中國(guó)藥典(一部)》，三黃片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法中供試品溶液制備方法處理供試品，在測(cè)定波長(zhǎng)345 nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算鹽酸小檗堿的含量，每個(gè)廠家平行測(cè)定2片，結(jié)果三黃片中鹽酸小檗堿平均含量分別為A廠家10.91 mg/片，B 廠家 24.70 mg/片，C 廠家 12.80 mg/片，D 廠家 15.54 mg/片，E 廠家 14.65 mg/片，F(xiàn) 廠家 12.48 mg/片，G廠家 16.30 mg/片，H 廠家 16.55 mg/片，I廠家 18.13 mg/片，J廠家 19.75 mg/片。

2.5 溶出度測(cè)定

溶出介質(zhì)選擇:取A廠家的三黃片3片，平行3份，分別放入水、0.1 mol/L鹽酸溶液及人工胃液(不含胃蛋白酶)等溶出介質(zhì)(經(jīng)超聲脫氣處理)中，溶出介質(zhì)體積為1 000 mL(符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計(jì)時(shí)，至規(guī)定時(shí)間(10，20，30，60，90，120 min)時(shí)取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時(shí)補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時(shí)測(cè)定吸收度。結(jié)果以0.1 mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)時(shí)，鹽酸小檗堿的累積溶出量最大。

溶出時(shí)間考察:取A廠家的三黃片1片，平行3份，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液1 000 mL(經(jīng)超聲脫氣處理，符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計(jì)時(shí)，至規(guī)定時(shí)間(10，20，30，60，90，120，180，300 min)時(shí)取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時(shí)補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時(shí)測(cè)定吸收度。結(jié)果至120 min時(shí)多個(gè)廠家三黃片中鹽酸小檗堿的累積溶出量達(dá)最大值，至180min時(shí)鹽酸小檗堿的累積溶出量減少或不再增加，故測(cè)定溶出度的取樣時(shí)間為 10，20，30，60，90，120 min。

樣品溶出度測(cè)定:取各廠家三黃片1片，平行6份，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液1 000 mL(經(jīng)超聲脫氣處理，符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計(jì)時(shí)，至規(guī)定時(shí)間(10，20，30，60，90，120 min)時(shí)取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時(shí)補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時(shí)測(cè)定吸收度。結(jié)果見圖1。

溶出方程擬合:通過數(shù)學(xué)模型對(duì)試驗(yàn)中的溶出數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，推測(cè)溶出機(jī)制。在藥物釋放研究中常用的數(shù)學(xué)模型有動(dòng)力學(xué)模型，包括零級(jí)動(dòng)力學(xué)模型、一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型、Weibull分布模型、Higuchi模型等[3－4]。結(jié)果見表 1。

3 討論

圖1 不同廠家三黃片累積溶出曲線(n=6)

表1 不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿溶出模型擬合結(jié)果

雖然各廠家執(zhí)行的同一標(biāo)準(zhǔn)，但由于生產(chǎn)條件和生產(chǎn)工藝及輔料的不同，各廠家生產(chǎn)的三黃片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定結(jié)果存在明顯的差異。多數(shù)廠家的三黃片中鹽酸小檗堿在30 min時(shí)就能溶出50%，在2 h時(shí)溶出曲線可達(dá)到平衡，僅有J廠家能達(dá)到90%以上。另外除E廠家的三黃片外，其余均符合Weibull模型分布。然而中藥成分多樣復(fù)雜，其療效受多方面因素的影響，這些建立在西藥制劑上的溶出模型對(duì)中藥制劑的適用性還有待進(jìn)一步的考察。

在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，鹽酸小檗堿的溶出度易受溫度的影響，在熱水中的溶解度較高而在冷水中的溶出度較低，在取出溶出液到測(cè)定的過程中若溫度降低，很有可能會(huì)使鹽酸小檗堿析出，溶出液中鹽酸小檗堿的濃度變小，導(dǎo)致測(cè)定時(shí)吸光度減小，試驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。所以在試驗(yàn)過程中應(yīng)保證即取即測(cè)，盡量避免對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

本試驗(yàn)對(duì)不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿的溶出度進(jìn)行了研究，分析不同廠家生產(chǎn)的三黃片的體外溶出度的差異，為三黃片的質(zhì)量控制和質(zhì)量提升奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為三黃片的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:457.

[2]龔海紅.藥物溶出度試驗(yàn)的應(yīng)用概述[J].海峽藥學(xué)，2008，20(11):123－125.

[3]黎 陽(yáng).基于擬合方法的藥物溶出度數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)處理[J].廣西民族學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，1998，4(3):46－47.

[4]蘇銀發(fā)，陳浩華，白學(xué)敏，等.Excel規(guī)劃求解法在藥物溶出模型擬合和優(yōu)選中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(6):839－841.