對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法驗證

黃 逍 周煥凈

廣西古方藥業有限責任公司，廣西 南寧 530221

對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法驗證

黃 逍 周煥凈

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對乙酰按基酚栓；微生物；檢測

1 對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法標準起草說明

對乙酰氨基酚栓具有解熱鎮痛的功效，適用于普通感冒或流行性感冒引起的發熱，也用于緩解輕至中度疼痛如頭痛、關節痛、偏頭痛、牙痛、肌肉痛、神經痛、痛經的治療。主要成分為對乙酰氨基酚，輔料為混合脂肪酸甘油酯。根據其用藥途徑和處方，應進行細菌數、霉菌和酵母菌數的測定、和大腸埃希菌的檢查。

經實驗研究，最終確定采用常規法進行細菌數、霉菌和酵母菌數的測定檢查。經對所確定的方法進行驗證，符合2010年版《中國藥典》二部附錄XIXN微生物限度檢查法的有關規定，方法可行。

2 對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法標準正文

微生物限度：照微生物限度檢查法（《中國藥典》2010年版二部附錄XIXN）。

取樣品10g，加含適量聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液稀釋至100ml，制備成溶解均勻的1∶10的供試液。

細菌數：取本品1∶10的供試液1ml注皿，平行制備2個平皿，置30～35℃，培養72小時，計數。

霉菌和酵母菌數：取1∶10的供試液1m l注皿，平行制備2個平皿，置23～28℃，培養120小時，計數。細菌數每1g不得過100個，霉菌和酵母菌數每1g不得過10個。

3 對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法驗證的實驗研究

3.1 驗證依據 按《中國藥典》2010年版二部附錄XIXN微生物限度檢查法規定進行方法驗證。

3.1.1 實驗儀器、試藥

3.1.1.1 樣品 對乙酰氨基酚栓 批號：20120101、 20120102、20120103

3.1.1.2 培養基及稀釋劑 營養瓊脂培養基，玫瑰紅鈉瓊脂培養基，營養肉湯培養基，膽鹽乳糖培養基（BL），改良馬丁培養基，改良馬丁瓊脂培養基，pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，0.9%無菌氯化鈉溶液、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基、曙紅亞甲藍瓊脂。

3.1.1.3 儀器 天平，培養箱，冰箱，高壓滅菌鍋等。

3.1.2 細菌、霉菌及酵母菌試驗方法的建立及驗證

3.1.2.1 菌液制備 取經30～35℃培養18～24小時的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1ml含菌落數為50～100cfu／ml的菌懸液，備用；取經23～28℃培養24～48小時的白色念珠菌液體培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1m l含菌落數為50～100cfu／ml的菌懸液，備用；取經25℃培養的1周的黑曲霉斜面培養物，加5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸取菌液用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1ml含菌落數為50～100cfu／ml的菌懸液，備用。

3.1.2.2 供試液制備 取樣品10g，加含適量聚山梨酯80的PH7.0無菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液稀釋至100m l，制備成溶解均勻的1∶10的供試液。

常規法：取1∶10的供試液1 ml和50～100cfu菌液，分別注入平皿中，立即傾注15～20 m l瓊脂培養基，待凝固后，置規定溫度，細菌培養72小時，霉菌和酵母菌培養120小時，計數，測定回收率。

試驗選用大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉進行預試驗，結果見表1。

表1 常規法預試驗結果

結果，回收率均超過70%，表明野菊花栓無抑菌作用，采用常規法進行細菌數、霉菌和酵母菌數的計數可行。用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液作為稀釋劑對照組回收率均超過70%，表明稀釋劑無抑菌作用。

3.1.2.3 細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證 取3個批號對乙酰氨基酚栓樣品，按常規法進行加菌回收率試驗，結果見表2。

表2 三批對乙酰氨基酚栓回收率試驗結果

三個批號樣品的回收率試驗結果表明，對乙酰氨基酚栓采用常規法進行細菌、霉菌和酵母菌微生物限度檢驗，五種規定試驗菌的回收率均超過70%；符合《中國藥典》2010年版二部的規定，方法可行。

確定對乙酰氨基酚栓細菌、霉菌和酵母菌計數方法為常規法。

4 對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查方法

根據上述試驗研究結果，擬建立對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查方法如下：

取樣品10g，加含適量聚山梨酯80的PH7.0無菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液稀釋至100m l，制備成溶解均勻的1∶10的供試液。

細菌數：取本品1∶10的供試液1ml注皿，平行制備2個平皿，置30～35℃，培養72小時，計數。

霉菌和酵母菌數：取1∶10的供試液1m l注皿，平行制備2個平皿，置23～28℃，培養72小時，計數。

細菌數每1g不得過1000個，霉菌和酵母菌數每1g不得過100個，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g不得檢出。

5 三批對乙酰氨基酚栓的微生物限度檢查

按上述所建立的對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查法，對三批樣品進行檢驗，結果見表3。

表3 三批對乙酰氨基酚栓微生物限度檢查結果

三個批號樣品的微生物限度檢查結果表明，對乙酰氨基酚栓采用常規法進行細菌、霉菌和酵母菌微生物限度檢驗，符合《中國藥典》2010年版一部的規定，方法可行。

確定對乙酰氨基酚栓細菌、霉菌和酵母菌計數方法為常規法。

［1］微生物限度檢查法.中國藥典（2010年版二部附錄XIXN）. 2010：215.

［2］微生物限度檢查法［M］.藥品微生物檢驗手冊.科學出版社，2001：40.

［3］現代醫藥工業微生物實驗室質量管理與驗證技術［M］.中國協和醫科大學出版社，2004.

R944.2＋3

A

1007－8517（2013）02－0123－02

2012.12.02）