磷酸川芎嗪氣霧劑急性毒性及局部刺激性試驗研究

楊 征 ，陳 雅 ，徐 果 ，胡金婷

(1.中國人民解放軍第三軍醫大學野戰外科研究所大坪醫院藥劑科，重慶 400042; 2.安徽省蚌埠醫學院08級藥學系，安徽 蚌埠 233030)

川芎嗪是川芎的有效成分四甲基吡嗪，有較強的擴張微血管、改善微循環、降低血黏度、改善血液流變學、降低毛細血管通透性、調節血小板功能和抗凝等作用，因此具有廣泛、潛在的臨床用途[1]。根據上述作用，大坪醫院將2，3，5，6－四甲基吡嗪磷酸鹽－水合物(磷酸川芎嗪)制成氣霧劑，通過氧氣混合吸入的方式而起到擴張鼻黏膜血管的作用，以應用于臨床。為確保用藥安全，現將其急性毒性及局部刺激性的實驗研究報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑、儀器與動物

磷酸川芎嗪氣霧劑(大坪醫院制劑室制備，批號為111205B)。BP110型電子天平(德國Sartorius);BX151型雙目顯微鏡(日本OLYMPS)。SD 大鼠，清潔級，雌雄各半，體重(200±15)g，動物合格證號為SCXK－(軍)2007－004，由第三軍醫大學野戰外科研究所大坪醫院動物中心提供。

1.2 方法

急性毒性試驗[2－3]:SD大鼠10只，雌雄各半，體重(200±15)g，禁食12 h，以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑5 mL/kg(相當于原藥25 mg/mL，相當于成人日劑量的250倍)，滴入大鼠雙側鼻腔及灌胃;觀察1周大鼠毒性反應和死亡情況，未能測出1%磷酸川芎嗪氣霧劑滴鼻腔及灌胃無死亡情況。因此，將此給藥劑量定為一次1 mL每只的最大耐受量試驗(MTD)。隨機分成空白組、對照組和給藥組，每組10只。禁食12 h后，給藥組以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑1 mL滴入大鼠雙側鼻腔及灌胃;對照組同法給予相同體積0.9%氯化鈉注射液;空白組不作任何處理。給藥飼養7 d后，詳細觀察給藥后動物的外觀、行為活動、精神狀態、大小便色澤、呼吸狀況，鼻、眼、口腔有無異常分泌物，體重變化、中毒反應的起始時間、嚴重程度等。

局部刺激性試驗[4]:SD大鼠30只，雌雄各半，體重(200±15)g，隨機分成空白組、對照組和給藥組，每組10只。給藥組以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑1 mL滴入大鼠雙側鼻腔;對照組同法給予相同體積0.9%氯化鈉注射液;空白組不作任何處理。連續給藥7 d，末次給藥后24 h，分別處死給藥組、對照組、空白組大鼠5只;其余各組大鼠分別觀察至停藥48 h后各組處死3只大鼠;停藥72 h后各組處死2只大鼠，即時觀察各項指標與解剖后的呼吸道局部黏膜的變化情況。

1.3 觀察指標

一般情況觀察，觀察大鼠給藥后恢復期間的呼吸頻率、體表顏色改變以及是否出現哮喘、咳嗽、嘔吐、窒息;解剖給藥后鼻黏膜的變化情況，并按“局部黏膜刺激反應分級標準”[5]以計分方式表示，包括紅斑、水腫、充血程度及范圍等。解剖顯微鏡檢查，取大鼠鼻腔及氣管切片，置40倍顯微鏡觀察變化。

2 結果

2.1 急性毒性試驗

空白組、對照組、給藥組給藥后12 min內先后進食正常。連續給藥7 d內各組大鼠外觀、行為活動、精神狀態、大小便色澤、呼吸狀況均顯正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物;各組均無死亡，無中毒反應。各組大鼠體重變化經 t檢驗無顯著性差異(P＞0.05)，結果見表1。

2.2 局部刺激性試驗

一般情況觀察:連續7 d鼻腔給藥及給藥恢復期間，各組大鼠呼吸頻率、體表顏色改變均未見異常，未見出現哮喘、咳嗽、嘔吐、窒息反應。給藥組在給藥后3 min內會出現輕微搔動鼻子的

表1 急性毒性試驗中各組大鼠體重的變化情況(n=10)

行為，3 min后停止搔動。鼻腔未見異常分泌物，各組大鼠無1例死亡;給藥期間各組大鼠鼻腔黏膜未見紅斑、水腫、糜爛、潰瘍等癥狀;喉、氣管等呼吸道黏膜組織形態、色澤均無異常，未見充血、紅腫。

解剖顯微鏡檢查:在顯微鏡下，3組大鼠鼻黏膜與氣管黏膜對比無顯著差異。見圖1與圖2。

3 討論

本試驗中，磷酸川芎嗪氣霧劑為一日給藥最大耐受量，相當于臨床成人用藥量的250倍，在短期內未見毒性反應及死亡情況，表明急性毒性較小，安全可靠。為保證磷酸川芎嗪氣霧劑的含量不降低，其pH應控制在2.5～3.5，酸性對鼻腔有一定刺激。為保證制劑使用安全，對該制劑進行急性毒性及局部刺激性試驗。在局部刺激性試驗中，給藥組有輕微的搔動鼻子的行為，根據其磷酸川芎嗪氣霧劑的理化性質，初步分析是由于pH顯酸性對鼻腔有一定的輕微刺激導致大鼠的抵抗性反應。經過觀察，短時間內其行為停止。解剖顯微鏡檢查觀察到，給藥組的鼻腔黏膜與氣管黏膜的毛細血管較清晰，試驗證明磷酸川芎嗪氣霧劑對血管有擴張作用。本試驗結果表明，磷酸川芎嗪氣霧劑作為擴張鼻黏膜血管用于臨床無明顯毒性及刺激性，可供臨床使用。

圖1 鼻腔黏膜解剖顯微圖

圖2 氣管黏膜解剖顯微圖

[1]項薔薇，羅運春，朱妍艷，等.川芎嗪在哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑中的作用及其機制[J].臨床兒科雜志，2011，8(29):773－776.

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[3]湯 杰，方建國，施春陽，等.魚腥草鼻用噴霧劑急性毒性、局部刺激性及過敏性的實驗研究[J].中南藥學，2006，4(6):403－406.

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[5]王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開發技術與方法[M].上海:上海科學技術出版社，2001:815.