CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞在麻風病中的水平和意義①

李彩霞 徐元品 鄒子宏 周曉鴻 (云南省昆明市延安醫院皮膚科，昆明 650051)

麻風病是由麻風分枝桿菌引起，主要累及皮膚和外周神經，是導致人類畸殘的一種重要疾病。在與傳染性麻風患者同等接觸的條件下，只有極個別人發病，夫妻間的發病率也僅為3% ～5%，這是因為麻風病是一種與機體免疫力有關的疾病，大多數健康成人對麻風桿菌有著自然的免疫力。目前對麻風病的發生、發展及發生麻風反應的確切機制仍不清楚，但普遍認為與機體的免疫狀態有關，尤其是細胞免疫在麻風的發病過程中起著重要作用。CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg)是一類特定亞群的CD4+T細胞，具有免疫調節作用，能通過抑制自身免疫細胞活化而發揮抑制作用。目前，關于麻風患者外周血Treg的研究較少，為此，我們通過檢測麻風病患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+/CD4+，以探討其在麻風病發病中的作用。

1 材料與方法

1．1 實驗分組 治愈組:26例，來源于楚雄州雙柏縣麻風村，均為已治愈的麻風患者［1］。其中男18例，女8例，年齡46～82歲，平均(66．31～10．36)歲;病程 20～65年，平均(47．5±12．76)年;停藥15～54年，平均(40．12±12．06)年。

現癥組:51例，來源于昆明醫科大學第二附屬醫院皮膚科門診、云南昆明市晉寧縣皮膚病防治站、昆明市西山區疾病預防控制中心及昆明市官渡區疾病預防控制中心。其中男38例，女13例，年齡21～68歲，平均(41±12．32)歲，病程 2～20個月，平均(31±30．49)個月;治療時間:1～52個月，平均(19．56 ±10．16)個月。

ENL組:5例，來源于昆明醫科大學第二附屬醫院皮膚科門診，其中男4例，女1例，年齡26～38歲，平均33．2±5．45歲，病程1 ～6個月，平均(3±2)月;治療時間:1～6個月，平均(3±2)個月。

健康對照組:56例，為本院健康體檢人群，其中男31例，女 25例，年齡 25．12～36．25歲，平均(33．2±7．1)歲。血清學及肝腎功能檢查正常，排除感染結核、HBV、HCV、麻風、HIV、患自身免疫系統疾病及腫瘤的人群。

1．2 主要儀器和試劑 熒光素標記的抗體:PerCP標記的抗人CD4抗體、FITC標記的抗人CD25抗體、PE標記的抗人Foxp3抗體及其同型對照FITC－mouse IgG1、PE－mouse IgG1、Human Foxp3 Buffer Set以及緩沖液 Stain Buffer(FBS)，購自美國 Becton－Dickinson(B－D)公司。人淋巴細胞分離液 MD－LS－077購自天津美德太平洋科技有限公司。流式細胞儀為Beckman Coulter公司生產的Epics XL型。

1．3 方法 取一流式試管，加入 FITC anti－human CD4/PE，anti－human CD25mAb/AF647，anti－human CD127各2μl，再加100μl新鮮肝素抗凝血，混勻，避光孵育20分鐘，然后加入1 ml溶血素溶血，避光放置5分鐘，以2 ml 1×PBS洗滌2次，上流式細胞儀進行檢測。用FCSExpressV3軟件分析和檢測CD4+T淋巴細胞中CD4+CD25+Foxp3+T/CD4+的百分率。

1．4 統計學分析 數據采用SPSS19．0軟件包進行統計學分析。兩組計量資料符合正態分布及方差齊性者，采用獨立樣本t檢驗進行分析;如方差不齊，則采用t'檢驗。多組計量資料間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LDS檢驗，P＜0．05認為有統計學意義。結果以±s表示。

2 結果

2.1 麻風治愈組和現癥組的Treg比正常對照組高，并且治愈組的Treg又高于現癥組，而ENL組的Treg則低于正常對照組，見表1。

2.2 在現病癥病人中，少菌型及多菌型麻風患者的Treg均高于正常對照組，并且少菌型患者的Treg高于多菌型患者(P＜0．05)，見表2。

表1 Treg在各組人群的百分比Tab．1 The proportion of Treg among each group

表2 現癥麻風患者中少菌型(PB)及多菌型患者(MB)Treg的百分比Tab．2 The proportion of Treg among MB and PB leprosy

3 討論

目前普遍認同麻風病是一種與機體免疫功能有關的傳染病，其很多損害并不是由麻風桿菌直接引起，而是由于該菌所誘發的宿主免疫應答所致。自1995 年 Sakaguchi［1］首次報道 CD4+CD25+調節性 T細胞(T regulatory cells，Treg)以來，該群細胞受到了廣泛的關注。Treg是體內存在的一群具有免疫調節作用的T細胞亞群，具有免疫無反應性和免疫抑制性兩大特征，在維持免疫系統穩態及免疫耐受方面起著重要作用。Foxp3即叉頭狀/翅膀狀螺旋轉錄因子，是Treg細胞特異性的分子標記，主要作用是抑制轉錄，決定了Treg細胞的免疫抑制功能。其基因突變可引起類似于系統性自身免疫病的IPEX綜合征(X染色體性聯綜合癥)，表現為全面的免疫功能失調［2］。關于Treg的作用機制尚存爭議，目前認為主要有以下幾種:細胞接觸依賴、分泌IL－10、IL－2、TGF－β等抑制性細胞因子，表達特異性轉錄因子等［3－9］。

本實驗中，麻風治愈組和現癥組的Treg均比正常對照組高，并且治愈組的Treg又高于現癥組，而ENL組的Treg則低于正常對照組。機體在麻風桿菌的刺激下發生免疫應答，促進了Treg不同程度的分化與增殖，產生了較多的Treg，尤其對于現癥少菌型和已治愈的麻風患者而言，Treg的數量增加更為明顯，這與Attia［10］報道的結果相一致。一方面，增多的Treg通過抑制T細胞的活化、增殖及抑制其效應功能，使機體避免過強的免疫應答對自身組織的損傷，對免疫功能起著一定的保護作用。另一方面，Treg對機體的免疫功能起著抑制作用，這將削弱機體的免疫功能，使機體罹患麻風病的可能性增加。

對于已經治愈的麻風患者來說，雖然臨床癥狀完全消失，連續細菌檢查為陰性，但Treg仍保持在較高水平，抑制了機體的免疫反應，使治愈患者對麻風桿菌仍然存在著易感性，這可能是導致麻風病復發的原因之一，鄭碧忠［11］的研究也證實了這一點。

在麻風病漫長的病程中，由于機體免疫狀態的改變而突然發生病情活躍或加劇的現象，稱為麻風反應。結果表明，發生Ⅱ型麻風反應的患者(ENL組)，其Treg明顯低于正常對照組。這可能是由于麻風患者機體的免疫力及微環境在不斷地發生變化，某些因素使Treg的數量急劇減少，導致機體的免疫狀態突然發生改變，從而引發了麻風反應。

總之，在以細胞免疫為主的麻風免疫過程中，Treg不僅能抑制自身免疫性疾病的發生發展，而且還參與誘導免疫耐受及免疫調節，決定了免疫反應的走向是激活免疫還是誘導耐受，對維持麻風患者機體內環境的自穩狀態起著重要作用。隨著對Treg細胞研究的不斷深入，用Treg細胞為靶點的新型免疫調控治療策略已成為研究的熱點［12－18］。檢測Treg的數量是否有助于麻風病的早期診斷?對麻風患者Treg細胞數量與功能進行調整是否有助于麻風病的治療?增強麻風易感人群T細胞的功能是否有助于預防麻風菌感染或防止麻風病復發?Treg是否通過某種信號途徑來調節麻風病的慢性過程?對于這些問題還有待于進一步深入研究。

1 Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M et al．Immunologic self－tolerancemaintained by activated T cells expressing IL－2 receptorα－chains(CD25)．Breakdown of a single mechanism of self－tolerance causes various autoimmune diseases ［J］． Immunol，1995;155(3):1151－1164．

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