sIL-2R、IL-6在重癥肌無力胸腺瘤中的表達及意義

遲海濤 金 蕊 叢 博 白 鷹

（大連大學附屬新華醫院神經內科，遼寧 大連 116021）

sIL-2R、IL-6在重癥肌無力胸腺瘤中的表達及意義

遲海濤 金 蕊 叢 博 白 鷹

（大連大學附屬新華醫院神經內科，遼寧 大連 116021）

目的 探討可溶性白細胞介素 2 受體（sIL-2R）、白細胞介素 6（IL-6）在胸腺瘤合并 MG 發病機制中的作用。方法 搜集胸腺切除手術的 27 例胸腺瘤患者的相關資料，對切除的胸腺瘤組織用免疫組化的方法，確定 SIL-2R、IL-6 在胸腺瘤組織中的表達情況。結果 SIL-2R 細胞因子、IL-6 在胸腺瘤合并 MG 的胸腺瘤組織呈高表達。結論 可溶性白細胞介素 2 受體（SIL-2R）、IL-6 在胸腺瘤合并 MG 的表達呈正相關。

重癥肌無力；可溶性白細胞介素 2 受體 (SIL-2R)；白細胞介素 6(IL-6)；胸腺瘤

重癥肌無力（Myasthenia Gravis，MG）主要是由乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AchR）介導的，針對神經肌肉接頭處突觸后膜上乙酰膽堿受體（AchR）的自身免疫性疾病[1]，它的發病因素是多方面的，如遺傳方面、自身的抵抗力及免疫力、細胞因子作用、胸腺異常等。

本實驗通過免疫組化方法對切除的胸腺瘤組織，確定sIL-2R、IL-6在胸腺瘤組織中的表達情況，探討其在胸腺瘤合并MG發病機制中的作用。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗試劑和儀器

1.1.1 實驗試劑

兔抗人sIL-2R、CD4、IL-6多克隆抗體，生物素標記的羊抗兔IgG二抗、辣根酶標記鏈霉卵白素及DAB顯色劑（美國SANTA CRUZ公司）。

1.1.2 實驗儀器

BX-50Olympus顯微鏡（日本），6382E超低溫冰箱（美國NUIAR），HH-W21Cu600電熱恒溫水溫箱（美國），LeicaTP1020組織脫水機（德國Leica）。

1.1.3 研究對象

選取27例在2003年至2007年大連醫科大學附屬第二醫院住院行胸腺切除術的胸腺瘤患者，其中男14例，年齡15～67歲，女13例，年齡25～76歲；其中9例合并MG,發病率33.33%（年齡15～65歲），其中男6例，女3例；未合并MG18例（年齡23～76歲），其中男7例，女11例。分為MG組和非MG組。MG組為胸腺瘤合并MG，非MG組為胸腺瘤不伴MG。

1.1.4 組織標本

上述27例患者手術治療切除的胸腺瘤組織蠟塊標本。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本處理及染色

免疫組化方法：操作步驟嚴格按說明書要求。將腺瘤組織蠟塊切片成4μm厚，去掉蠟封，室溫下孵育10min 3%H2O2，用高壓蒸汽法進行抗原修復，沖洗時用蒸餾水，浸泡在0.01mmol/LPBS（磷酸緩沖液）中持續5min，正常山羊血清室溫孵育一刻鐘，把血清清除，加入一抗工作液，兔抗人sIL-2R多克隆（1∶100）、IL-6抗體（1∶200），次日，用0.01mmol/L PBS沖洗三次，每次3min；滴加生物素標記的羊抗兔IgG二抗，在37℃下孵育時間為20min，沖洗液以及沖洗次數與時間同樣按上述步驟；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，孵育時間及溫度同上，同上述方法沖洗，DAB顯色劑顯色、自來水徹底沖洗、蘇木素復染、常規脫水、透明和封片。PBS代替一抗做空白對照，已知陽性標本做陽性對照。

1.2.2 陽性結果判斷

sIL-2R和IL-6陽性表達信號位于細胞的胞質內，結果的認定采用 許 良 中 等[2]的 方 法 ， 在 腫 瘤 細 胞 中 以 陽 性 細 胞 的 占 比 及 著 色 的強弱來判定。陽性細胞數最小0分，最大4分；無陽性細胞計0分；＜25 %計1分；26 %～50 %計2分；51 %～75 %計3分；＞75 %計4分。著色強度最小0分，最大3分，無著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。將兩項指標的評分相加，根據總的分數分為4級，即0～1分為陰性（-）；2～3分為弱陽性（+）；4～5分為中度陽性（ +～++ ）；6～7分為強陽性（ ++～+++ ）。

1.2.3 統計學分析

用SPSS13.0軟件包來處理實驗數據，Fisher比較組間確切概率。

2 結 果

2.1 sIL-2R的表達

sIL-2R陽性反應為棕黃色顆粒狀染色，在胸腺瘤中的具體表達見表1。

2.2 IL-6的表達

IL-6陽性反應呈棕黃色顆粒或團塊狀染色，在胸腺瘤中的具體表達見表2。

3 討 論

胸腺瘤大多伴有數量不等的反應性不成熟的T淋巴細胞，T細胞受體（TCR）在其成熟的過程中基因重新排列，以至于激活了自身的免疫反應。胸腺瘤合并MG患者其增生的胸腺髓質內表達豐富的AchR與表達主要組織相容性復合體（MHC）Ⅱ類分子的并指狀細胞密切接觸，說明MG與胸腺免疫異常有關。

表1 sIL-2R在胸腺瘤中的表達

表2 IL-6在胸腺瘤中的表達

sIL-2R是體內免疫系統激活的標志之一，是由IL-2Rα鏈解產生可溶性糖基化蛋白，可直接體現出重癥肌無力患者有關淋巴細胞的增殖和激活情況[3]。朱元貴等人發現[4]，重癥肌無力患者血清sIL-2R均高出正常水平，尤其是伴有胸腺瘤的重癥肌無力患者，增高更加明顯，且MG其血清sIL-2R水平增高與其病情呈線性關系，但從未報到過有關sIL-2R在胸腺瘤組織中的表達。

IL-6是由諸多細胞產生，包括活化的單核、T淋巴、內皮細胞及B淋巴細胞等，IL-6的表達是由體內多種淋巴和非淋巴細胞完成的。B淋巴細胞后期的活化主要由IL-6誘導，從而合成大量的分泌型免疫球蛋白。同時，IL-6對T細胞的活化、增殖和分裂也具誘導作用。在重癥肌無力時，IL-6有利于對B淋巴細胞的促進分化及增殖作用，從而產生抗體，上調了對細胞的免疫。MG患者較健康對照組抗原特異性外周血單個核細胞IL-6水平增高[5]。本實驗對MG組胸腺瘤組織中IL-6的表達做了檢測，結果顯示MG組明顯高于非MG組（P＜0.05），說明IL-6可能參與胸腺瘤MG的發病機制。

總之，本研究結果顯示，在伴發MG的胸腺瘤組織中，sIL-2R和IL-6均高表達，極有可能是高水平sIL-2R的作用機制對T細胞增殖起了引導作用，產生大量IL-6，從而激發活化后期B淋巴細胞合成大量分泌型免疫球蛋白，增加了IgG，IgA，IgM的分泌，導致大量的AChR破壞，引起突觸后膜傳遞障礙形成重癥肌無力。提示sIL-2R、IL-6在胸腺瘤伴發MG的發病過程中起重要的作用。對初步評價胸腺瘤伴發重癥肌無力患者體內免疫狀況并判斷其預后具有重要的指導意義。

[1]Link H,Xiao BG.Rat models as tool to develop new immunotherapies [J].Immunol Rev,2001,184:117-128.

[2]許良中,楊文濤.免疫組織化學反應結果的判定標準[J].中國癌癥雜志,1996,6(4): 229-231.

[3]Rubin LA,Kurman CC.Soluble interleukin-2 receptors are released from actired human lymphoid cells [J].Immunol,1985,135(5): 3172-3177.

[4]朱元貴,彭旭.重癥肌無力患者的血清SIL-2R的研究[J].中國神經免疫學和神經病學雜志,1998,5(2):100.

[5]張栩,孫兆林.重癥肌無力患者外周血單個核細胞水平的測定[J].青島大學醫學院學報,2003,39(4):38.

The Roles of sIL-2R, IL-6 in Pathogenesis of Thymoma with Myasthenia Gravis

CHI Hai-tao, JIN Rui, CONG Bo, BAI Ying
(Department of Neurology, Xinhua Hospital Affiliated to Dalian University, Dalian 116021, China)

ObjectiveTo explore the roles of sIL-2R, IL-6 in the pathogenesis of thymona with myasthenia gravis.MethodA analysis of 27 cases of thymona for whom thymectomy were performed was made. The immunohistochemical staining with sIL-2R, IL-6 was performed on the parrafined sections of the 27 thymona specimen.ResultsIn the 27 thymectomy patients, sIL-2R.ConclusionsIL-2R, IL-6 are important in pathogenesis for thymoma with MG and may also initiate the MG's autoimmune reactions.

Myasthenia gravis(MG); sIL-2R; IL-6; Thymoma

R746.1

：B

：1671-8194（2013）07-0039-02