四數九里香水提液對離體蟾蜍坐骨神經動作電位的影響

金 曼 肖 陽 楊劉英姿 宋 強 劉 丹 林 歡 李旭偉 胥正敏

1.川北醫學院基礎醫學院機能實驗中心，四川 南充 637000;2.川北醫學院麻醉學系，四川 南充 637000;3.川北醫學院藥學院，四川 南充 637000

四數九里香 (Murraya tetramera Huang)又稱千里香、滿山香、過山香、千只眼等，為蕓香科九里香屬植物，是一種落葉喬木，產于廣西的百色、德保和云南的硯山、富寧、文山、西疇，常見于石灰巖山頂陽光充足的地方，以根和葉入藥，性辛、苦、微寒。具有行氣止痛、活血化瘀、祛風除濕、麻醉鎮驚等功效［1］。早期曾有報道，九里香在臨床上可用于局部麻醉、抗生育作用、治療流行性乙型腦炎、破傷風、急慢性腎炎等。現代藥理學研究表明，九里香具有抗生育和終止妊娠、抗菌、抗甲狀腺腫大、降血糖、麻醉鎮靜及增強免疫功能等作用［2］。相關研究表明，九里香在醋酸致痛小鼠扭體試驗 (Nakainur的方法)及熱板試驗 (Eddy的方法)中均表現出一定的鎮痛作用，說明其具有一定的外周鎮痛及中樞鎮痛作用［3］。本研究從電生理學的角度，觀察不同濃度四數九里香溶液對離體蟾蜍坐骨神經動作電位的影響，以進一步探討九里香鎮痛作用的可能機制。

1 材料和方法

1.1 實驗試劑 任氏液 (NaC1 6.5g，KC1 0.14g，CaCl20.12g;NaHCO30.20g;NaH2PO40.01g加蒸餾水至1000 ml，所用試劑均為化學純，購自成都科龍化工試劑廠);四數九里香水提液:四數九里香購自廣西地道藥材鋪，取260g陰干四數九里香枝葉，粉碎，加任氏液梯度超聲浸泡法，過濾制成3.75L水提液，濃度為0.069g/ml原生藥濃度，取200ml用任氏液稀釋為 0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml溶液。

1.2 實驗儀器 BL－420F生物機能實驗系統 (四川成都泰盟科技有限公司);神經屏蔽盒 (四川成都泰盟科技有限公司);電子天平Model:ES6000－1(沈陽龍騰電子有限公司生產)。

1.3 實驗動物分組 中華大蟾蜍24只，雌雄兼用，體重80～100g，由川北醫學院實驗動物中心提供，隨機分為6組 (任氏液組，0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/ml四數九里香溶液組)，每組6只。

1.4 坐骨神經標本制備 將蟾蜍進行稱重，搗毀腦和脊髓，分離坐骨神經3～5cm，盡量將神經干周圍的組織剔除干凈，神經干脊柱端和足端用棉線結扎，置于任氏液中浸泡孵育10分鐘以穩定其興奮性。

1.5 動作電位引導并記錄 將孵育后的神經干慢慢沿培養皿壁取出，瀝干其水分，搭到神經屏蔽盒的電極上，測定動作電位振幅和傳導速度。再將神經干取出屏蔽盒，放入不同濃度四數九里香溶液中浸泡2分鐘，沿管壁輕輕取出，瀝干其水分并防止刮傷神經。將該神經干依照之前的位置搭在電極上，在位于刺激電極與引導電極的神經干上分別放置浸濕藥液 (0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/ml四數九里香溶液)的小棉條，用BL－420F生物機能實驗系統每隔5分鐘檢測動作電位相關值。動作電位速度測定需要測量兩個電極之間距離。單個動作電位及傳遞速度測定儀器設置值:方式，單刺激;延時，5.00ms;波寬，0.05ms;強度，1.00v;頻率，10KHz;采樣率，1.25ms/div。

1.6 數據處理 記錄各組給藥前與浸泡后坐骨神經復合動作電位的振幅與傳導速度，實驗數據用±s描述，采用配對t檢驗進行顯著性檢驗。

2 結果

2.1 四數九里香溶液對蟾蜍坐骨神經復合動作電位振幅的影響 隨著藥物作用時間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經干復合動作電位的振幅逐漸變小，具有統計學意義 (P＜0.05)。藥物濃度越大，動作電位振幅的變化越大(見表1)。

表1 四數九里香溶液對蟾蜍坐骨神經復合動作電位振幅的影響

表2 四數九里香溶液對蟾蜍坐骨神經動作電位傳導速度的影響

2.2 四數九里香溶液對蟾蜍坐骨神經動作電位傳導速度的影響 隨著藥物作用時間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經干復合動作電位的傳導速度逐漸變小，具有統計學意義 (P＜0.05)。藥物濃度越大，動作電位傳導速度的變化越大，神經傳導速度的改變與神經動作電位振幅的改變基本同步 (見表2)。

3 討論

本實驗通過離體實驗方法，觀察了四數九里香水提液對蟾蜍坐骨神經復合動作電位傳導的影響。實驗結果表明四數九里香水提液對坐骨神經動作電位的傳導具有明顯阻滯的作用，提示阻滯神經動作電位的傳導是四數九里香鎮痛的作用可能的機制之一。

有關四數九里香的化學成分，牙啟康等從四數九里香非水提物部分分離并鑒定出補骨脂素、槲皮素3－0－B－D－吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、正三十一烷、正三十四烷醇等化合物;陳家源等從四數九里香揮發油中分離出38個組分，確認了其中的37種，主要成分為薄荷酮、異薄荷酮、檸檬烯和胡椒酮等［4］。

四數九里香的鎮痛藥理機制及現代中藥藥學開發探索，可提取揮發油有待進一步研究。

［1］吳龍火、劉昭文、許瑞安．九里香葉的抗炎鎮痛作用研究［J］．湖北農業科學，2011，50(21):4436－4437．

［2］張宗禹、韋松、陳安蘭等．九里香糖蛋白成分終止孕兔妊娠及其機理［J］．中國藥科大學學報，1989，20(5):283－286．

［3］黃蓓，毛長智，庾志斌．四數九里香水提液抗炎及鎮痛作用研究［J］．中國民族民間醫藥，2011，20(14):32－33．

［4］陳家源，牙啟康，盧文杰，等．GC－MS分析四數九里香的揮發油成分［J］．華西藥學雜志，2009，24(6):671－672．