藏藥前列寧膠囊中總黃酮成分提取工藝研究

馬宏偉 李懷平

山東阿如拉藥物研究開發有限公司，山東 濟南 250101

前列寧膠囊為金訶藏藥股份有限公司獨家產品，由菥蓂子、葡桃、大托葉云實、豆蔻等13味藥材組成。主要功能清熱解毒，化瘀通淋，用于熱毒瘀阻所引起的尿頻、尿急、尿痛屬中醫淋證者［1］，療效顯著。但前列寧膠囊現有工藝為全藥粉入藥，患者服藥量大，為此，對前列寧膠囊進行了提取工藝研究。本文采用正交試驗法，以總黃酮含量為評價指標，考察了前列寧膠囊的乙醇提取工藝［2］，為產品的工藝優化奠定了基礎。

1 儀器與試藥

前列寧處方藥材均由金訶藏藥股份有限公司提供，經青海省藏醫院尼瑪鑒定，均為正品;蘆丁對照品 (中國藥品生物制品鑒定所，100080－200707，供UV法測定，含量為92．5%);UV－2450型紫外可見分光光度計 (SHIMADZU);RE－52型旋轉蒸發儀 (上海亞榮生化儀器廠);KQ5200B型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 前列寧膠囊醇提液中總黃酮的含量測定［3］

2.1.1 測定波長的選擇 精密量取對照品溶液1ml，置25ml量瓶中，加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置5分鐘，加10%硝酸鉛溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，采用相應的試劑為空白，采用島津UV－2450型紫外可見分光光度計在200～700nm范圍內掃描，結果顯示在500nm有最大吸收。

2.1.2 標準曲線的建立 精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置5分鐘，加10%硝酸鉛溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應的試劑為空白，照紫外－可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，結果見表1。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=0.0104X+0.0002，r=0.9998，線性范圍為 7.50656～37.53280μg/mL，標準曲線見圖1。

表1 總黃酮標準曲線測定結果

2.1.3 樣品溶液的測定 精密量取供試品溶液3ml，置25ml量瓶中，自“各加水至6.0ml……”起，按2.1.1方法依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量 (μg)，計算，即得。

2.2 正交試驗 影響乙醇提取的影響因素有提取時間、提取次數、加液量、乙醇濃度，對這4個因素各選三個水平，進行正交試驗，以提取液中的總黃酮量為考察指標，正交試驗設計及結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 正交試驗設計及結果

由正交試驗結果和方差分析結果可知，以總黃酮的量為考察指標，提取次數有顯著性影響，各影響因素的主次順序為B＞A＞C＞D，最佳提取工藝為A1B3C2D3。但總黃酮的量提取2次時為提取3次的93.68%;加液為8倍量時為加液10倍量時的96.51%。綜合各種因素考慮，優選提取工藝為A1B2C2D2，即加50%乙醇提取2次，每次加液8倍量，提取2小時。

表3 總黃酮測定方差分析表

3 討論

3.1 本試驗僅對前列寧膠囊處方中的醇溶性有效成分進行了初步考察，因各種藥材沒有明確的有效成分做考察指標，故選擇總黃酮作為提取工藝的考察指標。

3.2 乙醇濃度對提取效率有所影響，當乙醇濃度較低時，會有較多的水溶性雜質提出，過高時，不僅影響提取效果，而且還存在大生產時的安全隱患，濃度為50%的乙醇提取比較合適。

本試驗優選的提取工藝穩定、可行，適合工業化生產。

［1］國家食品藥品監督管理局．國家藥品標準頒布件．批件號:(2011)國藥標字ZD－0153號．

［2］趙英日，王淑美，崔紅花，等．盤龍參中總黃酮提取工藝研究［J］．中國民族民間醫藥，2011，(14):46－48．

［3］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版 (一部)［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:333．