產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌的臨床感染分布及耐藥性分析

陳 麗，楊衛(wèi)萍

（江漢大學(xué) 附屬醫(yī)院檢驗科，湖北 武漢 430015）

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌的臨床感染分布及耐藥性分析

陳 麗，楊衛(wèi)萍

（江漢大學(xué) 附屬醫(yī)院檢驗科，湖北 武漢 430015）

目的：探討醫(yī)院產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌的臨床感染分布及耐藥情況，為臨床抗感染治療合理選擇抗生素、減少耐藥發(fā)生提供依據(jù)。方法：收集2010年8月-2011年12月從臨床送檢標(biāo)本中分離的大腸埃希菌264株，藥敏試驗采用K-B紙片擴散法。根據(jù)美國臨床檢驗室標(biāo)準化委員會（CLSI）推薦的紙片擴散法，嚴格按照其制定的標(biāo)準進行ESBLs確證實驗。采用WHONET 5.4軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：264株大腸埃希菌中檢出134株（50.8%）產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌，標(biāo)本分布以痰標(biāo)本最高（47.76%），而科室分布以普外科最高（12.61%）。在藥敏實驗中，產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南、美羅培南、頭孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、頭孢西丁的耐藥性較低（0%～15.5%）；環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、慶大霉素、復(fù)方新諾明，阿莫西林/克拉維酸的耐藥性較高（41.3%～82.8%）；青霉素類、頭孢菌素類及ATM耐藥性高（100%），臨床不宜選用。結(jié)論：產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌存在多重耐藥性，臨床實驗室應(yīng)加強產(chǎn)ESBLs菌株的監(jiān)測，根據(jù)臨床藥敏結(jié)果合理選用抗生素。

產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶；大腸埃希菌；耐藥性；監(jiān)測

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）主要是由質(zhì)粒介導(dǎo)的能水解含氧亞氨基的β-內(nèi)酰胺類抗生素的一類β-內(nèi)酰胺酶，并可被β-內(nèi)酰胺酶抑制劑（如克拉維酸）所抑制，主要以TEM、SHV、CT X-M型為多見［1］。其存在是導(dǎo)致細菌耐藥的重要因素。ESBLs的產(chǎn)生和播散給臨床感染的治療帶來極大挑戰(zhàn)。因此，及時、準確地監(jiān)測產(chǎn)ESBLs菌株對指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，有效控制耐藥菌的產(chǎn)生、播散及流行具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集2010年8月-2011年12月在江漢大學(xué)附屬醫(yī)院住院患者送檢的痰液、血液、尿液、膽汁、膿液和分泌物等標(biāo)本264株中分離出的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌，共134株。

1.2 菌種鑒定

采用MicroScan WalkAway96全自動細菌鑒定儀及NC-31鑒定藥敏復(fù)合板鑒定，結(jié)合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》鑒定到種。

1.3 質(zhì)控菌株

大腸埃希菌ATCC25922，非產(chǎn)ESBLs的全敏株，購自衛(wèi)生部臨床中心。

1.4 藥敏紙片和培養(yǎng)基

頭孢噻肟（CTX）、頭孢他啶（CAZ）、頭孢哌酮/舒巴坦（SCF）、氨芐西林（AMP）、阿莫西林/克拉維酸（AMC）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、阿米卡星（AK）、慶大霉素（GN）、環(huán)丙沙星（CIP）、亞胺培南（IPM）、復(fù)方新諾明（SXT）、左氧氟沙星（LEV）、頭孢吡肟（FEP）、頭孢曲松（CRO）、美羅培南（MEM）、呋喃妥因（F）、氨曲南（ATM）、頭孢他啶/克拉維酸（CD02）、頭孢噻肟/克拉維酸（CD03）藥敏紙片均購自英國Oxoid公司，M-H培養(yǎng)基購自廣州迪景微生物科技有限公司。

1.5 方法

1.5.1 ESBLs檢測的篩選和確證試驗 按照CLSI［2］2007年版標(biāo)準：當(dāng)頭孢他啶的抑菌環(huán)直徑≤22 mm，氨曲南的抑菌環(huán)直徑≤27 mm，頭孢噻肟的抑菌環(huán)直徑≤27 mm，頭孢曲松的抑菌環(huán)直徑≤25 mm時，提示可能產(chǎn)生ESBLs；做雙紙片擴散法進行確證實驗，將頭孢他啶30 μg、頭孢他啶/克拉維酸 30/10 μg和頭孢噻肟 30 μg、頭孢噻肟/克拉維酸30/10 μg貼于涂抹好菌液M-H平板上，孵育16～18 h，分別測定抑菌環(huán)直徑，兩個藥物中有任何一個，在加克拉維酸后，抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)相比，增大值≥5 mm時，判定為產(chǎn)ESBLs。

1.5.2 藥敏試驗 采用K-B法，結(jié)果的判定依照CLSI2007版提供的抗微生物藥物敏感性試驗標(biāo)準執(zhí)行。

1.5.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用WHONET 5.4軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)ESBLs的檢出率

264株大腸埃希菌中檢出134株產(chǎn)ESBLs菌，檢出率為50.8%。

2.2 標(biāo)本分布

134株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中，標(biāo)本分布以痰標(biāo)本最高，占47.76%，詳見表1。

表1 134株產(chǎn)ESBLs菌在各種標(biāo)本中的分布及構(gòu)成比

2.3 科室分布

134株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中，科室分布以普外科最高，占24.63%，詳見表2。

表2 134株產(chǎn)ESBLs菌在各科室的分布及構(gòu)成比

2.4 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的耐藥性分析

134株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對抗生素藥敏結(jié)果顯示：產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南、美羅培南、頭孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、頭孢西丁的耐藥性較低（0%～15.5%）；環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、慶大霉素、復(fù)方新諾明，阿莫西林/克拉維酸的耐藥性較高（41.3%～82.8%）；青霉素類、1～3代頭孢菌素類及單環(huán)內(nèi)酰胺類如ATM耐藥性高（100%），具體結(jié)果見表3。

表3 產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對18種抗生素的耐藥率

3 討論

大腸埃希菌是醫(yī)院感染的重要致病菌之一。近年來由此菌引起的各種感染率呈上升趨勢，且此菌對多種抗生素耐藥。進入20世紀80年代后，隨著第三代頭孢菌素的應(yīng)用，誘發(fā)細菌耐藥株的不斷增加，尤其是多重耐藥性的出現(xiàn)，常導(dǎo)致臨床抗生素治療的失敗和病程遷延。因此，研究產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥分布，可以為臨床合理用藥、減少耐藥發(fā)生提供依據(jù)。

通過對本院134株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌調(diào)查顯示，產(chǎn)ESBLs菌的檢出率為50.8%，低于張淑青等［3］的報道（67.3%），但高于杜迎雪等［4］的報道（38.6%）。這種耐藥性的差異可能與檢測方法、地域、抗菌藥物用量有關(guān)。

從表1結(jié)果可見，產(chǎn)ESBLs菌來源于痰液有64株（47.76%），其次為尿液36株（26.87%），膿及分泌物15株（11.19%）等，表明產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌主要引起呼吸道、泌尿道、手術(shù)切口等部位感染，因此臨床醫(yī)務(wù)人員應(yīng)密切注意上述感染部位，早期發(fā)現(xiàn)，合理治療。從表2結(jié)果可見，產(chǎn)ESBLs菌株以普外科、干部科、泌尿外科、呼吸內(nèi)科、ICU為高感染科室，可能是由于外科患者手術(shù)等各種開放性操作多，廣譜抗生素的使用有關(guān)；內(nèi)科患者住院時間長基礎(chǔ)疾病多等有關(guān)；ICU患者存在嚴重的的基礎(chǔ)疾病、粒細胞減少或者褥瘡，患者長期暴露于不同抗生素下，大量應(yīng)用免疫抑制劑、化療藥物和腎上腺皮質(zhì)激素治療使機體免疫力下降等有關(guān)。

134株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對18種抗生素的藥敏結(jié)果顯示：產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南、美羅培南的敏感率為100%，因此，治療產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌引起的感染首選碳青酶烯類藥物，但隨著碳青酶烯類藥物應(yīng)用增多，已經(jīng)有耐亞胺培南和美羅培南的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌［5］。對哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢西丁、頭孢哌酮/舒巴坦，呋喃妥英的耐藥性較低，也作為臨床常規(guī)選擇用藥。對其他抗生素耐藥率均較高（≥41.3%），這表明產(chǎn)ESBLs菌不僅對第三代頭孢菌素類呈現(xiàn)耐藥，而且對氨基糖甙類、氟喹諾酮類和磺胺類等藥物也有多重耐藥現(xiàn)象，這是可能因為該類菌株同時攜帶了多種藥物的耐藥基因［6］。

臨床上廣譜頭孢菌素類，尤其是第三代頭孢菌素的廣泛使用和濫用，是導(dǎo)致產(chǎn)ESBLs菌株增多的主要原因。ESBLs的出現(xiàn)給臨床抗感染治療帶來眾多問題，如病人住院時間延長、治療經(jīng)費增高、治療藥物可選擇范圍變窄、預(yù)后差、病死率上升和院內(nèi)感染幾率升高等。因此，臨床實驗室應(yīng)重視對產(chǎn)ESBLs細菌的檢測與監(jiān)測，防止并控制由其引起的醫(yī)院感染。

［1］ 張永標(biāo)，張扣興，唐英春，等.產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶和ESBLs細菌的耐藥性及β-內(nèi)酰胺酶基因型研究［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2004，24（7）：577-582.

［2］ Clinical and laboratory standards institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；sev?enteenth informational supplement［S］.CLSI，2007，M100-S17.

［3］ 張淑青，王賀水，李宏芬，等.大腸埃希菌感染的臨床分布及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（15）：3385-3386.

［4］ 杜迎雪，于魁忠，郭曉紅，等.臨床產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的分布特征及耐藥性監(jiān)測［J］.中國民康醫(yī)學(xué)，2007，19（5）：336，351，386.

［5］ 任志強，劉麗君，郭民，等.產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯和大腸埃希茵耐藥性分析［J］.中南藥學(xué)，2008（5）：630-632.

［6］ Weisser J，Wiedemann B.Inhibition of R-plasmid trans?fer in Escherichia coli by 4-quinolones［J］.Antimicro?bial Agents and Chemotherapy，1987，31（4）：531-534.

Distribution of Extended-spectrum-β-lactamases-producing Escherichia coli and its Antibiotic Resistance Analysis

CHEN Li，YANG Wei-ping
（Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital，Jianghan University，Wuhan 430015，Hubei，China）

Objective：To explore the distribution and antibiotic resistance of extended-spec?trum-β-lactamases（ESBLs）-producing Escherichia coli in the hospital，so as to provide reference for reasonable utilization of antibiotic and reducing of drug resistance.Methods：From Aug，2010 to Dec，2011，264 E.colis were isolated from clinical specimens，the antibiotic susceptibility was test?ed by K-B method.According to CLSI standard，ESBLs was confirmed，statistical analysis was tak?en with WHONET 5.4 software.Results：Among 264 E.coli isolates，134（50.8%）were ESBLs-pro?ducing strains.The sputum was the highest sources of specimens（47.76%），the department of gen?eral surgery was the highest section-office of distribution（12.61%）.The resistance rates for ES?BLs-producing E.coli to imipenem，meropenem，piperacillin/tazobactam，cefoperazone/sulbactam，amikacin，cefoxitin and nitrofurantoin were lower and between 0%to 15.5%；The resistance rates to ciprofloxacin，levofloxacin，gentamicin，compound sulfamethoxazole and amoxicillin/clavulanate were higher and between 41.3%to 82.8%；The resistance rates to penicillins，cephalosporins and aztreonams were highest and reached 100%，so they are not suitable for clinic.Conclusion：ES?BLs-producing E.coli has multidrug-resistant，so it is necessary to strengthen the surveillance in clinical laboratory，to use antibiotics according to antibiotic susceptibility test.

extended-spectrum-β-lactamases-producing；Escherichia coli；drug resis?tance；surveillance

R446.5；R197.323.4

：A

：1673-0143（2013）06-0076-03

（責(zé)任編輯：范建鳳）

2013－04－18

陳 麗（1980—），女，醫(yī)師，碩士，研究方向：微生物檢驗臨床。