藤黃中藤黃總酸提取工藝研究

王園園，汪盈盈，汪電雷

（1.亳州職業技術學院藥學院，安徽亳州236800；2.安徽中醫藥大學藥學院，安徽合肥230031）

藤黃中藤黃總酸提取工藝研究

王園園1，2，汪盈盈1，汪電雷2

（1.亳州職業技術學院藥學院，安徽亳州236800；2.安徽中醫藥大學藥學院，安徽合肥230031）

目的：優選中藥藤黃中藤黃總酸的提取工藝.方法：采用正交試驗法，以藤黃酸含量和浸膏得率為評價指標，對乙醇濃度、溶劑量、提取時間及提取次數4種因素進行了研究.結果：優選的提取工藝為：90%乙醇，5倍量，提取3次，每次1小時.結論：正交試驗優選的藤黃中藤黃總酸提取工藝簡便、穩定、可行.

藤黃；藤黃總酸；提取工藝；正交試驗

藤黃Resina Garciniae系藤黃科（Guttiferae）植物藤黃樹Garcinia hanburyi Hook.f.的干燥樹脂[1]，藤黃性寒，有毒，味酸、辛、澀，有破血散結、解毒、止血、殺蟲之功效，自古以來就用來治療瘰疬、癰疸、癤腫等頑疾[2].藤黃總酸是從藤黃中提取的活性成分，主要由藤黃酸、新藤黃酸、異藤黃酸等組成的混合物.研究發現藤黃總酸對人肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌等有抑制作用，對腫瘤轉移有良好抑制作用等.本文采用正交試驗法，以藤黃酸含量和浸膏得率為評價指標[3]，確定藤黃總酸最佳提取工藝.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

沃特世e2695高效液相色譜儀，Empower色譜工作站，R-205旋轉蒸發器，DZF-200型真空干燥箱，Sartorious電子天平，超聲波清洗器.

1.2 試藥

藤黃酸對照品安徽中醫學院自制（含量=99%）

藤黃藥材購于安徽亳州中藥材交易市場，經安徽中醫藥大學中藥教研室王德群教授鑒定為藤黃科植物藤黃(Garcinia Hanburryi)的干燥樹脂.

2 方法與結果

2.1 正交試驗

取中藥藤黃10g，精密稱定.選取乙醇濃度（%）、乙醇用量（倍）、提取時間(h)、提取次數(次)4個因素，每個因素3個水平，按照正交L9(34)正交試驗表進行試驗，以期得到這些因素對藤黃酸提取率影響的變化趨勢和主次順序.因素水平安排表見表1.

表1 提取因素水平表

2.2 干浸膏得率測定[4]

分別將正交試驗各組提取液加入到干燥至恒重的圓底燒瓶中，在旋轉蒸發儀中濃縮至濃稠，60℃真空干燥箱干燥40min，移至干燥器中冷卻30min，稱重，計算浸膏得率.結果見表2.

2.3 含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取藤黃酸對照品10.57mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋定容，制成含量為1.057mg/ml的藤黃酸對照品溶液備用.

2.3.2 供試品溶液的制備[5-6]

精密稱取藤黃提取物0.1g，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋定容.精密吸取1ml以甲醇定容于100mL容量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾，續濾液作為樣品溶液備用.

2.3.3 色譜條件及專屬性考察

沃特世e2695高效液相色譜儀；Empower色譜工作站；色譜柱：大連依利特ODS C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（98:2）；流速：1.0ml/min；柱溫25℃，檢測波長360nm；進樣量：10μl.在該色譜條件下藤黃酸和峰2分離度為1.67，與峰4分離度為1.77，能較好的分離，理論塔板不低于5000.見Fig.1.

圖1-A 藤黃酸對照品HPLC圖

圖1-B 藤黃提取物樣品HPLC圖

2.3.4 線性關系考察

精密量取1ml對照品溶液以甲醇定容于100ml容量瓶中，分別精密吸取2μl、4μl、10μl、15μl、20μl、25μl進樣，測定峰面積.以對照品進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程為：得回歸方程Y=1280242.10x -6940.85（r=0.9999），表明線性關系良好.

2.3.5 精密度試驗

精密吸取藤黃酸濃度為10.57μg/ml對照品溶液10μl，重復進樣6次，測定藤黃酸峰面積，RSD為0.3%，說明本試驗進樣精密度良好.

2.3.6 重復性試驗

取同一批次藤黃提取物樣品，按供試品溶液制備方法處理樣品6份，按上述色譜條件操作，進樣10μl，測定藤黃酸峰面積，RSD為0.6%，表明該法的重復性好.

2.3.7 穩定性試驗

室溫條件下，精密吸取已知濃度（10.80μg/ml）的藤黃提取物樣品溶液10μl，于0、2、4、8、10、12h進樣測定，結果藤黃酸峰面積的RSD為1.4%表明供試品溶液在12h內穩定.

2.3.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知藤黃酸含量的藤黃提取物樣品6份，分別加入濃度為1.057mg/ml的藤黃酸對照品0.5ml，按制備供試品溶液，分別進樣10μl測定峰面積，計算回收率.回收率為98.76%，RSD=1.69試驗結果表明該試驗的回收率好.

2.3.9 供試品含量測定

將藤黃提取物按2.3.2供試品溶液制備方法制備樣品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入高效液相色譜儀，測定藤黃酸含量.結果見表2.

表2 正交試驗結果表

表3 方差分析表

由方差分析結果可知：中藥藤黃采用乙醇超聲提取，提取次數、料液比和乙醇濃度有顯著影響；提取時間無顯著影響.影響順序為提取次數＞料液比＞乙醇濃度＞提取時間.C的影響最小且無顯著性，為節省時間，提高提取效率，宜選擇C1.綜合考慮確定最佳提取工藝為A2B3C1D3，即以5倍90%乙醇超聲提取3次，每次1小時.

2.4 提取工藝驗證

為進一步考察上述優選工藝穩定性，對其進行驗證.稱取藤黃粗粉10g，3份，按優選工藝條件，即以5倍90%乙醇超聲提取3次，每次1小時.藥材提取物同上述處理方法和檢測方法，計算干浸膏收率和藤黃酸含量.試驗結果見表4.

表4 驗證試驗結果

3 討論

中藥化學成分非常復雜，對其中的所有成分都進行檢測控制是不可能也不必要的.中藥提取效果直接關系到產品的質量和療效，所以選擇評價指標在研究工作中就顯得尤為重要，選擇能夠反映該中藥主要藥效的有效成分作為指標對其進行控制，查閱文獻，藤黃酸為藤黃總酸的主要有效成分之一，且在主要成分中含量最高（21.75%-36.59%）[5]；在一定程度上可以代表藤黃總酸質量.在藤黃總酸注射液和總藤黃酸親水凝膠骨架片質量評價時均選擇藤黃酸含量為評價指標.

本試驗綜合藤黃酸含量和干浸膏得率評價提取工藝.

試驗結果顯示最佳工藝條件為A2B3C1D3，5倍90%乙醇超聲提取3次，每次1小時.為進一步開發藤黃提供了參考依據.

〔1〕南京醫學院.藥材學[M].北京:人民衛生出版社, 1960.1161.

〔2〕楊企錚,賈淑杰,李德華.中藥藤黃的近代研究[J].中國腫瘤臨床,1994,21(6):464-466.

〔3〕柯仲成，張輝，桂雙英.貫葉金絲桃總黃酮提取工藝研究[J].中國中醫藥信息雜志，2009,16(4): 48-50.

〔4〕桂雙英,王舉濤,葉杰勝,等.正交試驗法優選桔梗總皂苷的提取工藝[J].安徽中醫學院學報, 2011,30(5):63-64.

〔5〕江再茂,李遐方,李克，等.高效液相色譜法測定藤黃藥材中藤黃酸[J].中草藥，2008,39(3):445-447.

〔6〕柳文媛,馮鋒,尤啟冬，等.藤黃總酸注射液中藤黃酸的高效液相色譜法測定[J].江蘇藥學與臨床研究,2003,11(1):16-18.

R284.2

A

1673-260X（2013）09-0130-03

亳州職業技術學院院級課題（BYK201202）；安徽省高校自然科學研究項目2項（No：KJ2010A210）；（No：KJ2012A186）