高效液相色譜法測定算盤子中牡荊素含量

唐 哲 ，韋少宣 ，廖厚知

（1.中國人民解放軍第303醫院藥劑科，廣西 南寧 530021； 2.廣西中醫學院藥學院中藥教研室，廣西 南寧530021； 3.廣西匯科藥物研究所，廣西 南寧 530007）

算盤子 Glochidion puberum（Linn.）Hutch.為大戟科植物，又名橘子草、蟬子草、西瓜樹、果合草、血泡木等，全株入藥，味微苦、澀，性涼，有小毒，歸大腸、肝、肺經，具清熱利濕、解毒消腫之功，主治濕熱瀉痢、黃疸、淋濁、帶下、發熱、咽喉腫痛、癰瘡癤腫、漆瘡、濕疹、蟲蛇咬傷[1]。牡荊素為算盤子的有效成分之一，具有多種生理活性，臨床可用于治療心血管疾病，且具有防癌抗腫瘤、抗炎、解痙、降壓等作用[2]。本研究中建立了牡荊素的含量測定方法，旨在為算盤子的質量標準制訂提供實驗室依據。現報道如下。

1 儀器與材料

LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津制作所）；SPDM10Avp紫外檢測器（日本島津制作所）；AB265－S型分析天平（梅特勒－托利多）；UV－2450型分光光度計（日本島津制作所）；SG8200HBT型超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。牡荊素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111687－200602）；乙腈為色譜純、鹽酸、冰乙酸均為分析純；算盤子藥材分別采自廣西玉林地區（G1）、桂林地區（G2）、百色地區（G3）、河池地區（G4）、柳州地區（G5）、梧州地區（G6）、南寧地區（G7），購于廣西玉林藥市（G8）、柳州中藥材市場（G9）、南寧中藥材市場（G10），植物樣本由廣西匯科藥物研究所工程師廖厚知采集并鑒定為大戟科算盤子屬算盤子 Glochidion puberum（Linn.）Hutch.，標本存放于廣西匯科藥物研究所藥用資源標本室。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:島津 Thermo BDS Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；保護柱:YWG C18保護柱（10 mm × 4.6 mm）；流動相:乙腈 － 0.2% 冰乙酸溶液（22 ∶78）；流速:1.0 mL／min，柱溫:室溫；檢測器:日本島津SPD－M10Avp紫外檢測器，檢測波長為340 nm。理論板數按牡荊素計不低于3000，此條件下牡荊素與其他成分分離度不低于1.5。

2.2 溶液制備

精密稱取牡荊素對照品適量，加乙腈制成每1 mL含30 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品粉末（過3號篩）0.5 g，精密稱定，置 100 mL具塞錐形瓶中，加石油醚（60～90℃）50 mL，超聲波振蕩30 min，過濾，殘渣揮干石油醚，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，稱定質量，超聲波振蕩60 min，放冷，再次稱定質量，用50%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按確定的色譜條件測定。在此條件下，樣品中牡荊素的理論板數為3894，分離度為2.1，與其他成分分離良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取牡荊素對照品10.23 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 1，2，3，4，5 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。按上述色譜條件，分別進樣10 μL，測定，以峰面積積分值（Y）對牡荊素進樣量（X，μg）進行回歸分析，得回歸方程Y＝320033X＋ 24790，r＝0.9998(n＝5)。結果表明，牡荊素進樣量在0.1023～0.5115 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:取牡荊素對照品溶液（30.69 μg ／mL），按上述色譜條件，依法操作測定，重復進樣6次，測定色譜峰面積，計算RSD為0.39%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一批樣品（G1）溶液 10 μL，依法制備供試品溶液，在 2，4，6，8，24，48，72 h 時間隔進行分析，測定色譜峰面積。結果的 RSD為0.55%(n＝7)，表明供試品溶液制備后72 h內穩定。

重復性試驗:取同一批號樣品6份（G1），依法制備供試品溶液，測定含量進行分析。結果平均含量為 2.413 mg／g，RSD為1.80%，表明測定方法重復性好。

加樣回收試驗:取已知準確含量（2.413 mg／g）的樣品 6份（G1），每份取 0.25 g，精密稱定，置 100 mL 量瓶中，精密加入 0.6 mL牡荊素對照品溶液（1.011 g／L），揮去甲醇，按供試品溶液制備方法制備，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件下測定牡荊素峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 牡荊素加樣回收試驗結果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

取算盤子10批，按上述方法測定，結果表明，廣西不同產地的算盤子中牡荊素含量在0.1286% ～0.3917%之間，平均含量為 0.2296% ，見表 2。

表2 樣品含量測定結果（n＝10）

3 討論

算盤子作為廣西民間一味常用道地藥材，但其相關文獻報道較少，目前還沒有其質量控制的相關報道。為此，本研究中以算盤子中牡荊素的含量作為測定指標，建立方法，旨在為算盤子藥材的質量控制提供含測依據。

流動相選擇:參考相關文獻[2－5]，試驗比較了甲醇 －水溶液（40 ∶60）、乙腈 －0.5% 甲酸溶液（20 ∶80）、乙腈 －3% 醋酸溶液（11 ∶89）、乙腈 －1% 醋酸溶液（14 ∶86）、乙腈 － 0.2% 冰乙酸溶液（22∶78），前兩種流動相的分離度均達到要求，但流動相甲醇 －水溶液（40∶60）的峰形不夠好，流動相乙腈 －0.5%甲酸溶液（20∶80）峰形稍有拖尾，牡荊素出峰時間相對較晚，后兩種流動相出峰時間均在35 min以上，且峰形不好。流動相乙腈 －0.2%冰乙酸溶液（22∶78）得到的牡荊素峰形好，對稱，保留時間適宜，且分離度達到分析要求，故選擇。

提取溶劑選擇:去除雜質時考察了石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、三氯甲烷，三種溶劑，結果石油醚（30～60℃）提取液顏色稍淺，石油醚（60～90℃）與三氯甲烷提取溶液顏色無明顯差異?？紤]三氯甲烷對環境的破壞，故放棄，選擇石油醚（60～90℃）作為雜質的去除溶劑。提取溶劑考察了甲醇、乙醇，結果在超聲提取的條件下，乙醇提取不完全，而甲醇則有著很好的提取率。

提取方法選擇:比較了加熱回流、索氏提取、超聲提取3種方法。結果3種提取方法提取的牧荊素含量無明顯差異，考慮超聲提取方法簡單、易于操作、耗時少等優點，選擇超聲提取法。

提取時間選擇:考察了除雜后甲醇超聲提取30，60，90 min，結果60 min與90 min無明顯差異，并對樣品提取后殘渣進行了再次提取及高效液相色譜法測定，結果無待測組分特征峰出現，說明甲醇超聲60 min已提取完全。

[1]王國才，梁潔平，王 英，等.算盤子的化學成分[J].中國天然藥物，2008，6（4）:251 － 253.

[2]羅婭君，邊清泉，陳 佳，等.HPLC法測定牧荊中牡荊素的含量[J].廣西植物，2011，31（3）:418 －421.

[3]譚瑞璞，劉海周，梁曉原.HPLC法測定千針萬線草中牧荊素的含量[J].云南中醫學院學報，2009，32（4）:28 － 32.

[4]仲 英，楊尚軍，王 菊，等.高效液相色譜法測定山楂葉總黃酮中牧荊素含量[J].時珍國醫國藥，2000，11（10）:871 －872.

[5]陳 化.高效液相色譜法測定小葉榕中牧荊素的含量[J].時珍國醫國藥，2008，19（9）:2122 － 2123.