亞甲藍血漿病毒滅活效果及應用*

付慧敏 歐陽江 左鋒華

（江西省血液中心 南昌330046）

輸血技術是現代醫學不可或缺的重要治療手段，目前的血液檢測由于受檢測技術、檢測項目等因素的影響，無法完全阻斷經血液傳播疾病的發生，血漿病毒滅活技術能有效地阻斷經輸血傳播病毒的傳播。本中心自2009年7月開始全面推廣應用亞甲藍病毒滅活血漿成分，在這期間對血漿進行亞甲藍病毒滅活前、滅活后的質量進行檢測分析，經臨床使用取得滿意的療效?，F報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料 醫用病毒滅活箱（上海輸血技術有限公司），無菌接合機（日本泰爾茂公司），一次性使用滅活輸血過濾器材（上海輸血技術有限公司），一次性熔接片（日本泰爾茂公司），BACTBC9050全自動細菌培養儀，721分光光度計，SUPELCO.VISIPREPTM亞甲藍濾取裝置，收集來自南昌地區5家綜合醫院住院期間輸注亞甲藍病毒滅活血漿3次以上的輸血漿患者200例情況，由醫生和護士記錄報告給本中心。

1.2 亞甲藍病毒滅活血漿成分制備 采用一次性使用病毒滅活輸血過濾器在無菌接管機上通過無菌熔接片與本中心制備好的普通冰凍血漿相連接，將血漿緩緩轉移至一次性使用病毒滅活輸血過濾器材中的光照袋中，在此過程中亞甲藍也隨血漿緩緩加入到光照袋中，直至全部轉移完成。隨后將光照袋放入醫用滅活箱進行可見光光照，光照強度30 000-35 000 LUX，時間為35m in，溫度恒定在2～6℃，且整個過程都在水平振動，以確保在可見光光照下亞甲藍與血漿充分混合，達到病毒滅活的作用。光照結束后，再將血漿進行過濾，將光照袋中的血漿通過病毒滅活輸血過濾器（光照袋自帶）過濾，濾除血漿中的亞甲藍。病毒滅活輸血過濾器是一種血漿過濾器，用于濾除臨床使用的亞甲藍病毒滅活血漿中殘留病毒滅活劑亞甲藍和可能攜帶病毒的白細胞，屬于一次性使用醫療用品[1]。過濾完成，血漿流入終產品袋中，熱合封口，留樣進行檢測。每次滅活后留取5份樣本進行檢測，目前本中心只對普通冰凍血漿進行滅活，共留取140份標本。依據《中華人民共和國國家標準-全血及成分血質量要求》，主要測定：（1）血漿蛋白含量，亞甲藍殘留量和無菌試驗；（2）病毒滅活效果的測定：委托上海血液中心上海輸血研究所輸血傳染病研究室進行病毒滅活效果檢測。采用啖皰疹病毒（VSV）和Sindbis病毒作為指示病毒，以細胞病變法檢測滅活前后病毒滴度，Vero細胞作為指示細胞，病毒滴度按Karber法計算。

2 結果

2.1 病毒滅活效果 見表1。Sindbis病毒滅活前病毒滴度（lgTCID50/m L）為 4.5～6.5，滅活后為 0.5；VSV病毒滅活前病毒滴度為4.5～6.5，滅活后為0.5，病毒降低量均≥4，病毒滅活效果符合國家規定要求[2]。

表1 病毒檢測結果

2.2 亞甲藍病毒滅活后血漿（普通血漿）質量檢測結果 見表2。完全符合《中華人民共和國國家標準-全血及成分血質量要求》GB18469-2012對病毒滅活冰凍血漿質量控制的要求。質量指標：血漿容量及血漿蛋白含量、亞甲藍最終殘留量均能達到質量要求。亞甲藍殘留量根據臨床輸注量，用最大濃度輸注量不超過臨床較低劑量0.5%，屬于安全的劑量范圍內。

表2 病毒滅活冰凍血漿質量檢測結果

3 討論

當前輸血存在兩大風險，即輸血免疫反應和輸血疾病的傳播。血站在防止經輸血的疾病傳播投入很大，對常見的傳播性病毒采取不同試劑不同人員檢測兩次來把關，這種做法仍存在風險，疾病處于窗口期，試劑靈敏度和操作人員因素都可能導致病毒傳播的發生，還有很多沒有被要求檢測的病毒都可能在輸血過程中發生傳播。據報道[3]，采用血清學試驗方法，美國輸血傳播HBV、HCV和HIV病毒感染的殘余風險分別為1/63 000、1/103 000和1/493 000。目前我國國內乙肝感染和攜帶人數已達到1.3億，占全國人口數近10%，HIV的感染和攜帶也不容樂觀，輸血后丙肝感染率也是與日俱增，檢測方法一直都是血清學試驗為主，因此輸血后病毒傳播風險是無法避免的。

應用亞甲藍進行病毒滅活能夠有效地抑制輸血傳播病毒，其原理：亞甲藍是臨床用于亞硝酸及氰化物中毒的解毒劑，它能在可見光誘導下使氧化損傷病毒的核酸斷裂，包膜破損，從而使病毒失去感染能力。血漿中沒有細胞等有形成分，可能殘存的病毒含量高，應用亞甲藍病毒滅活技術處理方便，無殘留，不影響血漿中其它成分的含量和功能。

[1]張霞,周雯,王友森.環氧乙烷在滅菌物品中殘留量測定及毒性研究進展[J].中國消毒學雜志,2005,22(2):217-218

[2]中華人民共和國衛生部,中國國家標準化管理委員會.中華人民共和國國家標準[S].北京:中國標準出版社,2012.11

[3]Schreiber GB,Busch MP,Kleinman SH,et al.The risk of transfusion-transmitted viral infections.The retrovirus epidemiology donor study[J].N Engl JMed,1996,334(26):1 685-1 690