膠質瘤相關癌基因蛋白－1預測乳腺癌復發轉移的價值

張勇 賈靜 江穎 童漢興 邵葉波 徐靜 朱雋 陸維祺

（1．復旦大學附屬中山醫院普外科，上海 200032；2．福建省泉州市第一醫院普外科，福建泉州 362000）

乳腺癌術后的腫瘤復發、轉移是影響患者生存的關鍵因素。目前臨床上尚缺乏能預測乳腺癌術后腫瘤復發、轉移的特異性指標。膠質瘤相關癌基因蛋白－1（glioma oncogene protein－1，GLI－1））屬 于Hedgehog信號傳導通路下游的轉錄調控因子，它可以激活該信號傳導通路。研究［1］顯示，GLI－1在腫瘤組織內的表達水平與多種惡性腫瘤的腫瘤浸潤深度、淋巴結侵犯、遠隔器官轉移等關系密切。然而目前對乳腺癌病灶中GLI－1的表達水平及其與乳腺癌臨床病理學特征及術后復發轉移的關系尚無定論。本研究擬用免疫組織化學技術檢測乳腺癌原發病灶中GLI－1的表達水平，分析其與乳腺癌臨床病理特征之間的關系，并初步探討GLI－1在預測乳腺癌復發、轉移中的作用。

1 資料與方法

1．1 一般資料 入選標準：2001—2004年入住復旦大學附屬中山醫院普外科、接受首次乳腺癌手術并經病理檢查確診的乳腺癌患者；既往無任何惡性腫瘤病史；上海市患者；術前檢查未見腫瘤轉移；術前未接受放療和（或）化療。

收集有完整隨訪資料的患者221例，在隨訪過程中出現腫瘤轉移、復發者42例，作為復發轉移組；采用統計學軟件從其余患者中隨機抽取42例作為無復發生存組；另隨機抽取2001—2004年在復旦大學附屬中山醫院確診的良性乳腺腫瘤患者30例，作為對照組。

1．2 免疫組織化學法 應用免疫組織化學技術（S－P法）檢測乳腺癌患者原發病灶中GLI－1的表達情況。實驗試劑：GLI－1一抗購自SANTA CRUZ生物科技有限公司、S－P法二抗試劑盒購自上海麥約爾生物技術有限公司。

1．3 GLI－1在乳腺癌病灶中表達水平的判定 染色強度：弱陽性記為1分，中等強度記為2分，強陽性記為3分；陽性細胞百分比：＜5%記為0分，5%～25%記為1分，25%～50%記為2分，50%～75%記為3分，＞75%記為4分。計算免疫反應積分（immunoreactive score，IRS），將上述兩者得分相乘即為每一標本的IRS，IRS 0～6分為GLI－1低表達；IRS 7～12分為 GLI－1高表達［1］。

1．4 統計學處理 采用Stata7．0統計學軟件進行分析，采用χ2檢驗及Logistic回歸分析乳腺癌患者臨床病理特征與預后的關系；采用COX生存分析研究乳腺癌患者臨床病理特征與患者術后總體生存時間的關系。以P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2．1 3組患者病灶中GLI－1的表達 復發轉移組和無復發生存組的84例患者中，乳腺癌病灶中GLI－1 高 表 達 59 例 （70．24%）；低 表 達 25 例（29．76%）；對照組原發病灶中GLI－1的表達為0例。乳腺良性腫瘤與乳腺癌病灶中GLI－1的表達差異有統計學意義（P＜0．01）。

2．2 乳腺癌病灶中GLI－1的表達與臨床病理學特征的關系 見表1。乳腺癌病灶中GLI－1的表達與患者年齡、腋窩淋巴受累情況、腫瘤激素受體表達均明顯相關（P＜0．05），而與其他臨床病理學特征無明顯相關。

表1 乳腺癌病灶中GLI－1的表達水平與臨床病理學特征的相關性n（%）

2．3 乳腺癌病灶中GLI－1表達與腫瘤復發、轉移的關系 乳腺癌患者病灶中GLI－1高表達與術后腫瘤復發、轉移率增高密切相關（P＝0．001）；多因素分析顯示，腫瘤病灶中GLI－1高表達與乳腺癌復發、轉移密切相關（OR＝7．534，95%CI為2．104～26．974）。進一步分析顯示，腋窩受累淋巴結數目不超過3個的乳腺癌患者（pN 0～3）原發病灶中GLI－1的高表達與腫瘤復發、轉移率增高明顯相關（P＝0．009）。腫瘤病灶中 GLI－1高表達與患者術后出現腫瘤肝轉移（P＝0．03）、骨轉移（P＝0．023）密切相關，而與腫瘤的局部復發、對側轉移及肺轉移無明顯相關性（P＞0．05）。

2．4 乳腺癌患者術后總體生存時間的COX生存分析 腫瘤病灶中GLI－1的表達水平對患者術后生存時間有明顯影響（HR＝1．852，95%可信區間為1．146～2．994），腫瘤病灶中 GLI－1高表達的患者術后總體生存時間明顯縮短。

3 討 論

GLI－1是Hedgehog信號傳導通路下游的轉錄調控因子之一，是該信號傳導通路活化的標志。Hedgehog信號通路在果蠅、多種脊椎動物及人類胚胎發育過程中的細胞分化和增生中起著重要作用。最近研究［1］表明，Hedgehog信號通路與多種惡性腫瘤的侵襲和轉移有密切的關系。Hedgehog信號通路的異常活化與乳腺癌的發生、進展也密切相關，乳腺癌病灶中GLI－1表達水平明顯高于正常乳腺組織［2－3］。

本研究發現，乳腺癌病灶中GLI－1表達率明顯高于良性乳腺腫瘤（P＜0．01），說明 GLI－1的高表達率可能和惡性腫瘤的發生相關。本研究結果還顯示，乳腺癌病灶中GLI－1高表達與腫瘤復發轉移率的增高及患者術后生存時間的縮短密切相關，與國外研究結果［4］一致，提示乳腺癌病灶中GLI－1的表達水平有望成為乳腺癌預后評估的一個新指標。

有學者［4－5］認為，乳腺癌病灶中 GLI－1的表達水平與患者腋窩淋巴受累情況明顯相關，GLI－1的表達水平可作為臨床分期輔助指標［4］。目前對于pN1期乳腺癌的合理治療尚有爭議［6－8］。我們建議對GLI－1高表達的pN1期乳腺癌患者應采取更為積極的治療策略。

本研究結果顯示，乳腺癌病灶中GLI－1表達水平與ER受體表達有關，提示Hedgehog信號傳導通路可能參與激素介導的乳腺癌發生過程。此外，本研究結果還顯示，乳腺癌病灶中的GLI－1表達水平與乳腺癌 HER－2表達無明顯的相關性，說明Hedgehog信號傳導通路可能獨立于表皮生長因子家族調控途徑，而自行調控乳腺癌的發生及進展過程。因此，是否可將該信號通路作為乳腺癌治療新的分子靶點是今后的研究課題。

乳腺癌的骨轉移機制一直是研究的熱點。近期的研究［9－10］發現，Hedgehog信號傳導通路在調控乳腺癌骨轉移過程中也有重要的作用。Hedgehog信號傳導通路通過促進腫瘤細胞釋放甲狀旁腺激素相關肽而促進骨質破壞以及腫瘤骨轉移，但目前該調控過程的機制尚不清楚［11］。本研究認為，GLI－1在該調控過程中可能具有重要作用，值得今后進行進一步研究。本研究中的腫瘤復發肝轉移患者，其原發病灶中GLI－1表達率明顯高于未發生腫瘤肝轉移的患者，而目前尚無類似報道，提示Hedgehog信號傳導通路在腫瘤細胞轉移過程中可能還有其他未知的調控途徑。因此，對Hedgehog信號通路促進腫瘤轉移機制的研究，可能為乳腺癌的分子診斷、預后判斷以及分子靶向治療開辟新的方向。

［1］ Souzaki M，Kubo M，Kai M，et al．Hedgehog signaling pathway mediates the progression of non－invasive breast cancer to invasive breast cancer［J］．Cancer Sci，2011，102（2）：373－381．

［2］ Kubo M，Nakamura M，Tasaki A，et al．Hedgehog signaling pathway is a new therapeutic target for patients with breast cancer［J］．Cancer Res，2004，64（17）：6071－6074．

［3］ Mukherjee S，Frolova N，Sadlonova A，et al．Hedgelog signaling and response to cyclopamine differs in epithelial and stormal cells in benign breast cancer［J］．Cancer Biol Ther，2006，5（6）：674－683．

［4］ Haaf AT，Bektas N，von Serenyi S，et al．Expreeion of the glioma associated oncogene homolog（GLI）I in human breast cancer is associated with unfavourable overall suivival［J］．BMC Cancer，2009，9（26）：298．

［5］ Xuan YH，Lin ZH．Expression of Indian Hedgehog signaling molecules in breast Cancer［J］．J Cancer Res Clin Oncol，2009，135（2）：235－240．

［6］ Livi L，Paiar F，Simontacchi G，et al．Loco regional failure pattern after lumpectomy and breat irradiation in 4185patients with T1and T2breast cancer．Implications for nodal irradiation［J］．Acta Oncologica，2006，45（5）：564－570．

［7］ Overgaard M，Nielsen HM，Overgaard J，et al．Is the benefit of postmastectomy irradiation limited to patients with four or more positive nodes，as recommended in international consensus reports？A subgroup analysis of the DBCG 82b＆c randomized trials［J］．Radiother Oncol，2007，82（3）：247－253．

［8］ Reddy SG，Kiel KD．Supraclavicular nodal failure in patients with one to three positive axillary lymph nodes treated with breast conserving surgery and breast irradiation，without supraclavicular node radiation［J］．Breast J，2007，13（1）：12－18．

［9］ Stecca B，Ruizi A．A GLI1－p53inhibitory loop controls neural stem cell and tumor cell numbers［J］．EMBO J，2009，28（6）：663－676．

［10］ AlexakiⅥ，Javelaud D，Van Kempen LC，et al．GLI2－mediated melanoma invasion and metastasis［J］．J Natl Cancer Inst，2010，102（15）：1148－1159．

［11］ Pratap J，Wixted JJ，Gaur T，et al．Runx2transcriptional activation of Indian hedgehog and a downstream bone metastatic pathway in breast cancer cells［J］．Cancer Res，2008，68（19）：7795－7802．