葛根素對大鼠局灶性腦缺血再灌注的保護作用

顏秀娟

（上饒市第五人民醫院，江西上饒334000）

葛根素，具有耐缺氧、抗衰老、降血脂等作用，并且體外實驗顯示葛根素對神經細胞的凋亡具有保護作用，可以抑制細胞凋亡時自由基的產生[1]。 然而對葛根素對腦缺血/再灌注損傷的保護作用及具體作用機制并不明確。 本文擬建立大鼠中動脈梗塞模型，觀察葛根素對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用，探討其可能的作用機制。

1 材料

1.1 藥品、試劑與儀器

葛根素(中國生物制品檢驗檢定所，批號: 100818-20060)，用時用含丙二醇(0.02%)的生理鹽水溶解(pH7.0)，尼莫地平(民生藥業集團有限公司，批號:100703)，2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)，2' ,7'—二氯熒光素酶(DCFH-DA)等(購自Sigma 公司)，熒光分光光度計(上海精密儀器廠)，多功能酶標儀(Thermo)。

1.2 動物

Waster 大鼠，雄性，體重(200±20) g，南昌大學實驗動物中心提供。

2 方法

2.1 實驗分組

將大鼠隨機分成6 組，每組8 只，分假手術組，缺血再灌注模型對照組，給藥葛根素0.1、1.0、10mg/kg 組和尼莫地平1.0mg/kg 組。手術前15min 尾靜脈給藥，假手術組和模型組給予等量的生理鹽水。

2.2 局灶性腦缺血模型的建立

參照Zea Longa[2]法制作大鼠中動脈閉塞模型，導致局灶性腦缺血1.5h 后，再灌注18h。 假手術組大鼠除不插拴線外，其他步驟同上，術中保持大鼠肛溫(36±1)℃，術后24h，觀察其神經系統癥狀的變化。

2.3 梗死范圍和腦水腫的測定

評分結束后，立即斷頭處死大鼠，取出全腦，去除嗅球、小腦和低位腦干后稱取大腦濕重。

2.4 ROS 的含量及Caspace-3 活性測定

參照Chiarugi[3]的方法采用2' ,7'—二氯熒光素酶測定ROS 的產生。取大腦按重量體積比加入10 倍體積冰冷0.1 mol·L 磷酸鹽緩沖液勻漿后， 離心10min， 取上清液與終濃度為20μmol/L 的DCFHDA37℃下孵育30 min 后，置于冰浴中終止反應檢測熒光強度。

2.5 統計學處理

用SPSS13.0 軟件完成統計學處理，數據以±s 表示。組數的比較采用單因素方差分析，組間比較采用t 檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

3 結果

缺血1.5h 再灌注18h 后， 模型組大鼠出現明顯的神經系統損傷癥狀。大鼠神經癥狀評分明顯高于假手術組。與模型組相比，葛根素能顯著降低神經癥狀評分，并呈劑量依賴性(P<0.05)。大腦中動脈內栓線阻斷法大鼠腦梗死范圍及含水量較假手術組明顯增加(P< 0.01)，與模型對照組相比，給藥劑量組和尼莫地平組均抑制腦梗死的形成，梗死范圍縮小，腦組織含水量減少。 葛根素給藥組可顯著抑制自由基的產生以及Caspase-3 的活性，并和尼莫地平組比較無差異性。

4 討論

本研究采用大腦中動脈內栓線阻斷法建立大鼠缺血/再灌注損傷模型，觀察葛根素對大鼠腦缺血/再灌注的影響，本實驗結果顯示葛根素能顯著抑制腦缺血再灌注ROS 的增加， 從而減小梗死范圍并減輕腦水腫。 caspase-3 是細胞調亡過程中重要的效應性蛋白水解酶。

［1］潘燕,張岫美.葛根素藥理研究近況[J].食品與藥品2005,(12):10-12.

［2］Zea Longa E L, Weinstein P R, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion withoutcraniectomy in the rats[J]. Stroke, 1999, 20(1):84-91.

［3］Chiarugi PG, Pani E, Giannoni L, et al. Reactiveoxygen species as essential mediators of cell adhesion: the oxidative inhibition of a FAK tyrosine phosphatase is required for cell adhesion [J]. J Cell Biol, 2003, 161:933-944.