氯化苯丙胺鹽比濁法檢測腦脊液蛋白質方法學評價

唐曉霞（靖江市人民醫院檢驗科，江蘇靖江 214500）

目前常用的腦脊液（CSF）蛋白質測定方法有硫酸鈉-磺基水楊酸比濁法、干化學法、染料結合法和鄰苯三酚紅銅絡合法等，但存在易受濕度、時間等因素影響導致假陽性結果，染料黏附比色杯而不易洗脫，成本較高等缺點。為此，本研究對氯化苯丙胺鹽比濁法檢測CSF蛋白質進行了評價和探討，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 無黃疸、無溶血且包括低、中、高蛋白質水平的CSF標本48份。

1.2 儀器與試劑 DXC800全自動生化分析儀及配套質控品、定值血清（美國貝克曼），VITROS350干式生化分析儀及配套雙縮脲法檢測試劑（美國強生），氯化苯丙胺鹽比濁法CSF蛋白檢測試劑盒（北京萬泰德瑞），干擾物質為血紅蛋白、膽紅素、維生素C、葡萄糖等。

1.3 方法 將標本3 000r／min離心5min后吸上清液上機檢測，參數設置如下：主波長520nm，次波長700nm，標本體積12μL，R1 200μL，R2 75μL，測定值高于2 000mg／L時，以生理鹽水稀釋后測定。靈敏度實驗方法參照文獻［1］。精密度實驗方法參照美國臨床和實驗室標準化協會（CLSI）EP5-A文件［2-3］，計算批內、批間、天間和總變異系數（CV）。線性范圍實驗方法：以生理鹽水對定值血清進行系列稀釋，每份稀釋標本做雙份測定，計算平均值，以擬合曲線分析線性范圍。干擾實驗方法：將不同濃度干擾物質與同一份CSF標本按體積比1∶9混合，以等體積生理鹽水作為無干擾標本，各標本測定雙份，計算平均值，以（無干擾標本檢測結果±10%）作為明顯偏差的判斷限。方法學比對實驗方法：因強生公司CSF蛋白質檢測線性范圍寬，對球蛋白和清蛋白檢測靈敏度相似，并已得到臨床認可［4］，故選擇強省公司分析系統作為參考方法（Y），與實驗方法，即氯化苯丙胺鹽比濁法（X）進行比對，比對實驗方法參照CLSI EP9-A文件。

1.4 統計學處理 采用Excel2003軟件進行數據分析，包括計算平均值、標準差及制備回歸曲線等。

2 結 果

2.1 靈敏度 經檢測，該法檢測CSF蛋白質的靈敏度為25.5 mg／L。

2.2 精密度 低、中、高濃度標本檢測批內、批間、日間及總變異系數均小于5%。

2.3 線性范圍 標本蛋白質濃度為60～2 600mg／L，實測濃度與理論濃度具有良好線性關系。

2.4 干擾實驗 高濃度血紅蛋白（0.1g／L）可導致檢測結果出現負偏差；各濃度膽紅素、維生素C、葡萄糖對檢測結果無明顯干擾。

2.5 方法學比對 參考方法與實驗方法檢測結果回歸方程為Y＝0.932X＋12.9，相關系數為0.989。

3 討 論

CSF中的蛋白質主要因脈絡膜毛細血管壁的超濾作用而出現，神經系統亦可自行合成。多種神經系統疾病，如各種原因所致炎性反應、腫瘤、腦外傷、卒中、神經系統退化性病變等均可導致CSF蛋白質濃度升高，而水中毒、CSF外溢癥、甲狀腺功能亢進等可導致其濃度降低。因此，CSF蛋白質濃度的快速、準確檢測對上述疾病的診斷及預后判斷有重要意義［5-8］。

在CSF蛋白質常用檢測方法中，磺基水楊酸比濁法需自配試劑，且操作繁瑣、易產生誤差、標準液不統一、精密度較低、蛋白質易形成凝塊。染料結合法和鄰苯三酚紅銅絡合法對清蛋白的檢測靈敏度高于球蛋白，且染料易污染比色杯。干化學法測定線性范圍寬，對球蛋白和清蛋白檢測靈敏度相似，測定速度快，適用于急診檢測，但成本較高。氯化苯丙胺鹽濁度法利用氯化苯丙胺鹽可與CSF中的蛋白質結合，產生穩定的濁度，通過檢測濁度的變化而確定蛋白質濃度，具有檢測步驟簡便、干擾因素少、誤差較小等優點。本研究參照CLSI文件進行了系列評價，結果表明該檢測方法穩定性好、靈敏度高、線性范圍寬、抗干擾能力較強，適合于臨床推廣應用。

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