Sysmex XT-1800i全自動血液分析儀復檢規則制定及應用評價

劉春明，馬興璇，龍 康（柳州市中醫院檢驗科，廣西柳州 545001）

一般而言，全自動血液分析儀可對外周血中的原始細胞、幼稚細胞、核左移、異型淋巴細胞及紅細胞、血小板形態異常進行報警，但僅可用于血細胞分析的初篩，當遇到可疑情況，特別是病理條件下，必須通過手工鏡檢進行復查，從而避免漏檢病理標本及發出錯誤的檢驗報告。如何制定血細胞分析復檢規則血液學專家共同關注的問題。2005年國際血液學復檢專家組制定了41條自動血液分析和分類復檢規則（簡稱“國際41條規則”）［1］。本研究以“國際41條規則”為基礎，結合本實驗室實際情況，制定了適合本實驗室的XT-1800i全自動血液分析儀（簡稱XT-1800i分析儀）復檢規則，并對其臨床應用進行了評價。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于本院連續2周住院患者乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本1 841例，其中初診標本1 600例、復診標本241例。

1.2 儀器與試劑 XT-1800i分析儀及配套試劑、校準物、質控物（日本Sysmex），光學顯微鏡（日本Olympus）。采用SCS-1000全血校準物對XT-1800i分析儀進行校準，以包括2個水平的e-check質控物進行室內質量控制，保證檢測結果精密度和準確性。

1.3 方法

1.3.1 標本檢測 以XT-1800i分析儀檢測標本的同時，制備瑞士染色血涂片標本，由本實驗室從事血液形態學檢驗工作并有中級以上職稱者進行鏡檢，每例標本油鏡計數200個細胞進行白細胞（WBC）分類，同時觀察白細胞、紅細胞（RBC）及血小板（PLT）形態。

1.3.2 初步復檢規則的制定 本實驗室制定的初步復檢規則見表1。

表1 XT-1800i分析儀復檢規則

1.3.3 涂片鏡檢陽性判斷標準 根據“國際41條規則”和國內相關陽性規則進行評估［1-2］：（1）RBC明顯大小不均（大小相差1倍以上），中空淡染（淡染區超過一半的RBC多于30%）或發現瘧原蟲；（2）巨大PLT多于15%；（3）PLT聚集；（4）含Dohle小體的粒細胞超過10%；（5）含中毒顆粒中性粒細胞超過10%；（6）空泡變性粒細胞超過10%；（7）原始和幼稚細胞不少于1%；（8）早幼粒細胞和中幼粒細胞不少于1%（9）晚幼粒細胞超過2%；（10）異形淋巴細胞超過5%；（11）有核紅細胞不少于1%；（12）漿細胞不少于1%。

1.3.4 初步復檢規則的評估 1 841例標本以涂片鏡檢為陽性判斷標準，對每條初步復檢規則進行評估，計算真陽性率（TPR）、真陰性率（TNR）、假陽性率（FPR）、假陰性率（FNR）和涂片復檢率。真陽性為至少觸發1條復檢規則且涂片鏡檢符合陽性判斷標準，鏡檢形態學異常與所觸發的規則無需一一對應；真陰性為未觸發復檢規則且鏡檢陰性；假陽性為觸發復檢規則而鏡檢未見異常；假陰性為未觸發復檢規則而涂片鏡檢符合陽性判斷標準；涂片復檢率＝（真陽性數＋假陽性數）／標本總數×100%。

1.3.5 復檢規則的建立及驗證 本次收集的標本均來自住院患者，預期的涂片復檢率可能比實際復檢率稍高，而對于假陰性，國際血液學復檢協作組認為5.0%是保證患者檢測結果可信的最大可接受限。因此，擬定的涂片復檢率為30%，FNR不超過5.0%，而且不能漏檢具有診斷意義的重要參數（如白血病細胞）。FNR過高會大大增加實際工作量，導致報告發放時間延遲。因此，根據初步復檢規則評估結果和實際工作需要，對初步復檢規則部分條款進行修正，并按修正后的規則重新計算TPR、TNR、FPR、FNR和涂片復檢率，在保證FNR較低的前提下盡可能降低FPR。新復檢規則建立后，選擇220例標本（主要為血液病和腫瘤化療患者標本）進行驗證，計算TPR、TNR、FPR、FNR和涂片復檢率。

2 結 果

2.1 初步復檢規則評估結果 應用涂片鏡檢陽性判斷標準對1 841例標本按初步復檢規則進行評估，TPR為28.9%（533／1 841）、FPR為11.9%（220／1 841）、TNR為57.1%（1 051／1 841）、FNR為2.0%（37／1 841），涂片復檢率為40.9%（753／1 841）。鑒于40.9%的復檢率不適用于本實驗室，且大大超出了擬訂的復檢率。因此，對初步復檢規則進行調整，棄用規則9、規則10、規則12及規則14。

2.2 調整后復檢規則評估結果 對調整后的復檢規則重新評估，TPR為14.8%（272／1 841）、FPR為9.4%（173／1 841）、TNR為72.6%（1 337／1 841）、FNR為3.2%（59／1 841），涂片復檢率為24.2%（445／1 841）。

2.3 復檢規則的驗證 220例標本驗證復檢規則，TPR為16.3%（36／220）、FPR為10.9%（24／220）、TNR 為69.1%（152／220）、FNR為3.6%（8／220），主要出現巨大PLT、變異淋巴和晚幼粒細胞漏檢，白血病細胞無漏檢。

3 討 論

“國際41條規則”中，WBC分類復檢規則是以絕對值計算的，且下限很高，鏡檢陽性規則中也沒有WBC分類計數陽性判斷標準，其主要原則是不漏檢白血病細胞，而包括本實驗室在內的國內絕大多數實驗室對WBC分類復檢都是以分類比率計算的。本研究顯示，如采用“國際41條規則”進行WBC分類復檢，則1 841例標本均未觸發單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞復檢規則。因此，本實驗室WBC分類復檢規則中選擇了部分分類比率，即嗜堿性粒細胞比率大于5.0%，淋巴細胞比率大于60.0%（成人）或70.0%（兒童），單核細胞比率大于15.0%。對于是否將桿狀核粒細胞比率超過5.0%、單核細胞比率超過12.0%、嗜酸性粒細胞比率超過10.0%和嗜堿性粒細胞比率超過2.0%納入鏡檢陽性判斷規則，國內學者持不同意見。王厚芳等［3］的研究顯示，納入上述4條規則可導致FNR略微增加，但仍在國際血液學專家組確定的5.0%的可接受范圍內，叢玉隆等［4］的研究則顯示納入上述4條規則將使FNR明顯升高至20.0%（桿狀核粒細胞和單核細胞所致假陰性占90.0%），大大超出國際血液學專家組確定的5.0%的可接受范圍，而棄用該4條規則，FNR降至4.0%以下，FPR增加不到3.0%，且無白血病細胞漏檢。上述研究在納入該4條規則后，其FNR存在明顯差異。究其原因，筆者認為是由于未對WBC分類復檢陽性判斷標準形成共識，而“國際41條規則”沒有WBC分類計數陽性判斷標準，主要原則是不漏檢白血病細胞，若嚴格按照國際規則的陽性判斷標準評估，增加上述4條判斷標準將使FNR大大增加。本實驗室規則的評估中納入了上述4條判斷標準中的2條，并提高了判斷標準，取得了很好的效果。

通過分析初步復檢規則陽性標本，筆者發現FNR較高的規則依次是：嗜酸性粒細胞比率、WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息，僅此4項規則的FNR即高達26.3%。PLT報警主要為PLT分布異常。有學者認為影響PLT分布的因素包括大體積PLT、有核紅細胞（NRBC）、裂片RBC以及彌散性血管內凝血患者的標本［5］。該研究同時發現XT-1800i分析儀阻抗法和光學法計數PLT與參考方法有很好的相關性，儀器所提供的WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息及嗜酸性粒細胞比率較為準確。因此，本實驗室制定的XT-1800i分析儀復檢規則中棄用WBC IP信息、RBC IP信息、PLT IP信息和嗜酸性粒細胞比率這4條規則。對假陰性標本的分析發現，假陰性主要由巨大PLT、PLT聚集、RBC形態異常、異型淋巴細胞、NRBC及少量的中晚幼粒細胞所致，而白血病細胞無漏檢；6例出現幼稚粒細胞漏檢的標本中，3例為血液病患者標本，由于觸發了相應規則而未漏檢，且幼稚粒細胞比率均處在鏡檢陽性判斷標準臨界值附近；另3例標本中，2例為晚幼粒細胞2%，處于鏡檢陽性判斷標準臨界值附近，1例為含中毒顆粒中性粒細胞比率超過10%。

驗證實驗和臨床應用評價表明，本實驗室制定的XT-1800i分析儀復檢規則FNR低于國際血液學專家組確定的5.0%的最大可接受限，有診斷意義的血液病細胞無漏檢，復檢率為24.2%，臨床應用中未出現漏檢、誤檢標本，保證了血液分析的檢驗質量，大大減少了檢驗技術人員手工鏡檢的勞動強度，明顯提高了工作效率，值得推廣應用。

［1］Barnes PW，Mcfadden SL，Machin SJ，et al.The international consensus group for hematology review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（2）：83-90.

［2］中華檢驗醫學雜志編輯委員會.全國血液學復檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數復檢標準釋義［J］.中華檢驗醫學雜志，2007，30（4）：380-382.

［3］王厚芳，孫帝，于貴杰，等.國際血細胞復檢規則在貝克曼-庫爾特系列血細胞分析儀上的應用及改進方案［J］.中華檢驗醫學雜志，2008，31（7）：758-762.

［4］叢玉隆，樂家新.Sysmex XE-2100自動血細胞分析和白細胞分類的復檢規則探討［J］.中華檢驗醫學雜志，2008，31（7）：752-757.

［5］Fujimoto K，Tanaka C.Reference method for platelet enumeration［J］.Sysmex J International，2001，11（1）：33-39.