犢牦牛腐敗梭菌病診斷

張西云，李生慶，胡國元

（青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，青海 西寧 810006）

1 發(fā)病情況

本病呈散發(fā)。患牛營養(yǎng)不良，30多頭牛中有18頭出現(xiàn)咳嗽癥狀，6頭出現(xiàn)腹瀉癥狀?；寂？人猿跗?，用青、鏈霉素治療，6頭好轉(zhuǎn)，另12頭仍有咳嗽癥狀，并死亡2頭。

2 癥狀及剖檢變化

病牛精神萎頓，食欲不振，咳嗽，體溫達(dá)40～41℃。剖檢見咽喉部和氣管周圍有淡黃色的水腫液，氣管黏膜充血，心包內(nèi)有滲出液，肺氣腫，大面積瘀血，小葉邊緣呈黑色，表面呈灰白色或白色，部分組織充血，肺門淋巴結(jié)形態(tài)、色澤、質(zhì)地?zé)o變化，其他器官無眼觀變化。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

3.1 臟器觸片 無菌取病死牛肝、脾、肺觸片，瑞特氏染色，鏡檢，結(jié)果見粗大桿菌和雙球菌。

3.2 臟器培養(yǎng) 無菌取病死牛肝、脾、肺接種于鮮血斜面和厭氣肝湯中，37℃培養(yǎng)24h，結(jié)果鮮血斜面和厭氣肝湯培養(yǎng)基中均有細(xì)菌生長。對培養(yǎng)物進(jìn)行抹片，沙黃染色，鏡檢，結(jié)果見鮮血斜面培養(yǎng)物以雙球菌為主，厭氣肝湯培養(yǎng)物以大桿菌為主。鮮血斜面培養(yǎng)物經(jīng)劃平板接種得到雙球菌，厭氣肝湯培養(yǎng)物經(jīng)加熱得到梭狀芽孢桿菌。

3.3 動物接種 無菌取病死牛肺臟剪碎、研磨，按1∶5加入無菌生理鹽水混勻后靜置，取靜置后的上清液，以0.2 mL/只的量，皮下注射于2只小白鼠，結(jié)果，2只小白鼠分別于注后15h、17h死亡。剖檢小鼠，其皮下充血，有膠凍樣滲出，腹腔滲出物較多，消化道漿膜充血，肝、脾、腎腫脹，心、肺無眼觀變化。肝被膜觸片，染色，鏡檢，見長絲狀、短鏈狀或單個存在的大桿菌。接種小白鼠肝臟于厭氣肝湯后鏡檢，見與病死牛臟器鏡檢相同的結(jié)果，厭氣肝湯培養(yǎng)物培養(yǎng)至48 h開始形成芽孢，芽孢呈檸檬狀，培養(yǎng)至72h，幾乎全部形成芽孢體。

3.4 動物試驗(yàn) 分別將雙球菌和大桿菌接種于普通肉湯和厭氣肝湯中，37℃培養(yǎng)24h。

將雙球菌培養(yǎng)物分別以0.2～0.4 mL/只的量皮下注射于2只小白鼠，結(jié)果，2只小白鼠一周后仍健活。

將大桿菌培養(yǎng)物原液以0.2 mL/只的量皮下注射于2只小白鼠后，觀察其發(fā)病死亡情況，同時將該培養(yǎng)物用生理鹽水稀釋后，在毒力范圍內(nèi)皮下注射于小白鼠，并測定最小致死劑量。結(jié)果，注射原液的小白鼠在注射后12h左右死亡，同時測得該菌的最小致死劑量為500MLD/mL。剖檢死亡小白鼠，其皮下及腹腔病變與前述接種小白鼠相同。

4 診斷

臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果表明犢牦牛死亡是由腐敗梭菌引起的。

5 小結(jié)

5.1 腐敗梭菌為土壤常在菌，氣溫多變、多雨潮濕季節(jié)及轉(zhuǎn)群造成犢牦牛體質(zhì)下降時，其可引起發(fā)病。適時接種疫苗，尤其在牦牛轉(zhuǎn)群或進(jìn)入換季草場前進(jìn)行加強(qiáng)免疫是預(yù)防本病的有效方法。

5.2 病牛死亡后應(yīng)及時采取病料送檢，因?yàn)楦瘮∷缶４嬖谟趧游锵纼?nèi)，其可在動物死后的數(shù)小時內(nèi)大量繁殖并進(jìn)入臟器，若不及時送檢則可造成誤診從死亡動物臟器分離到的腐敗梭菌必須通過接種試驗(yàn)才能確定其致病性。

5.3 腐敗梭菌培養(yǎng)物離心上清液皮下和靜脈注射小白鼠時毒力較弱，表明其代謝產(chǎn)物中的抗原成分較少，故只有采用菌液制備滅活菌苗進(jìn)行免疫才能保證免疫效果。