PTTG1在肝細胞癌的表達及臨床意義

周臻濤林小軍

1.中山大學附屬梅州市人民醫院腫瘤外一科，廣東梅州514031；2.中山大學腫瘤防治中心肝膽腫瘤外科，廣東廣州510060

垂體腫瘤轉化基因1(Pituitary Tumor Transforming Gene 1,PTTG1)是一種新的癌基因,于1997年首先克隆自大鼠垂體腫瘤[1]。隨后于1998年自人睪丸中克隆出人PTTG1,位于5號染色體長臂5q33[2]。體外實驗顯示,該基因在小鼠成纖維細胞中過表達可導致細胞轉化,體內實驗則顯示可促進腫瘤的形成[1]。在所有被研究的腫瘤細胞(包括肺癌、乳腺癌、結腸癌、垂體腫瘤等)中都有高表達，并與腫瘤的侵襲性相關[2-6]。有關PTTG1在肝細胞癌表達的研究報道較少，2009年1月—2012年期間該研究檢測原發性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma HCC）組織及相應癌旁肝組織中PTTG1蛋白的表達情況，旨在探討其臨床意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集該院行根治性切除，且臨床病理資料完整的肝細胞癌病例標本及相應的癌旁肝組織79例，均經病理組織學證實為肝細胞癌。其中男性69例，女性10例；年齡17～72歲，中位年齡49歲；HBsAg陽性73例；肝功能Child-Pugh分級，Child-A級78例，Child-B級1例；無肝硬化19例，輕度肝硬化39例，中度肝硬化18例，重度肝硬化3例；肝癌組織按Edmondson病理分級標準進行分級，Ⅰ級6例，Ⅱ級41例，Ⅲ級28例，Ⅳ級4例；按2001年第八屆全國肝癌學術會議提出的肝癌臨床分期標準進行分期，I期27例，II期52例，無Ⅲ、Ⅳ期患者。所有標本均用10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋，連續石蠟切片，厚4 μm，每個臘塊切片3張，2張免疫組化染色，另一張作HE染色。

1.2方法

免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法。濃縮型兔抗人PTTG1多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司，工作液濃度1∶200。即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判斷

在普通光學顯微鏡下閱片，在高倍鏡下（400×）隨機觀察5～10個視野，觀察細胞漿的染色深淺和計算胞漿陽性的細胞所占的百分比。染色結果判定標準參照Fromowitz等[7]陽性細胞半定量分級法，在高倍鏡下對細胞染色作如下評分：根據陽性細胞占整個腫瘤細胞的百分數打分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據陽性細胞染色深淺打分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為 3 分；兩項結果相加＜2 分為陰性(-)，2～3 分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7 分為強陽性(+++)，其中-～+視為低表達，++～+++視為高表達。以上結果均由2位病理科醫師采用雙盲法觀察并確定。

1.4 統計方法

數據資料統計分析采用SPSS13.0統計學軟件進行，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 PTTG1在肝癌組織、癌旁肝組織及正常肝組織中的表達

PTTG1在上述各組織中陽性染色位于細胞漿，呈棕黃色顆粒狀，細胞核染色為陰性。在肝癌組織、癌旁肝組織中PTTG1高表達率分別為53.2%、1.3%。兩組間差異有統計學意義（P=0.000＜0.05），見表 1。

表1 2種組織中PTTG1的表達情況[n（%）]

2.2 肝癌組織中PTTG1的表達與臨床病理指標的關系

免疫組化結果顯示PTTG1的表達水平與衛星結節，Edmondson病理分級密切相關。PTTG1在無衛星結節組和有衛星結節組高表達率分別為39.7%、68.7%，兩組差異有統計學意義（P＝0.037＜0.05）；PTTG1 在 Edmondson 分級Ⅰ、Ⅱ組和Ⅲ、Ⅳ組高表達率分別為 38.3%、62.5%，兩組差異有統計學意義（P＝0.035＜0.05）。PTTG1 表達水平與性別、年齡、AFP、HBsAg、肝硬化程度、ICGR15、TNM分期、腫瘤大小及腫瘤包膜狀況無關（P>0.05）。見表2。

表2 肝癌組織中PTTG1表達與其臨床病理指標的關系[n（%）]

3 討論

PTTG1基因是一種癌基因，體外實驗顯示，該基因在小鼠成纖維細胞中過表達可導致細胞轉化，體內實驗則顯示可促進腫瘤的形成。PTTG1是Ramaswamy等[2]報道的17種與原發性實體腫瘤轉移有關的基因之一。目前認為PTTG1促進腫瘤發生發展的作用機制主要有以下幾個方面:①作為保全素(Securin)可抑制分裂期細胞姊妹染色單體的分離,使子代細胞非整倍體化，增加突變幾率，促進腫瘤表型惡化；②PTTG1蛋白中含有的PXXP基序可與多種細胞內接頭蛋白的SH3域結合,通過募集多種胞內信號分子,將生長刺激信號傳至核內,激活多種腫瘤相關基因的表達,使細胞發生轉化；③PTTG1可上調bFGF，后者可誘導腫瘤組織新生血管形成，促進腫瘤生長、侵襲與轉移。有關PTTG1在肝癌組織中表達的研究國內外文獻報道不多，Fujii等[8]報道肝癌組織中PTTG1 mRNA表達水平明顯高于癌旁肝組織，PTTG1蛋白在肝癌組織中高表達，定位在胞漿，而在癌旁肝組織中不表達。Su等[9]采用RT-PCR方法檢測147例肝癌組織發現PTTG1 mRNA高表達率為61%（80/147）。該實驗通過免疫組化的方法研究表明PTTG1陽性染色定位于細胞漿中，在肝癌組織中高表達率53.2%，明顯高于癌旁組織的高表達率1.3%(P<0.05)，提示PTTG1在原發性肝細胞癌的發生過程中可能起著某種作用，推測這種作用可能與PTTG1的促進細胞增殖與惡性轉化功能有關，但其確切的作用機制還有待進一步研究。

有關PTTG1與臨床病理指標的研究，在其他腫瘤中的研究較多。Rehfeld等[10]報道在非小細胞肺癌 （nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中，PTTG1高表達的患者淋巴結轉移，遠處轉移發生率高。在結腸癌中的研究[11]表明有周圍淋巴結浸潤的結直腸癌較局限于腸壁的結直腸癌有更高的PTTG1表達。Wen[12]等研究發現PTTG1與胃癌的淋巴結轉移有關。有關PTTG1的表達與肝細胞癌臨床病理指標關系的研究，國內外文獻報道較少。該研究表明，PTTG1的表達水平與衛星結節、病理分級有關，即有衛星結節、分化程度差者PTTG1高表達率較無衛星結節、分化程度好者要高，而與患者性別、年齡、AFP水平、肝炎狀態、肝硬化程度、肝功能儲備情況、TNM分期、包膜情況及腫瘤大小無關。衛星結節、病理分級可反映肝細胞癌惡性程度的高低，與肝細胞癌的預后密切相關。PTTG1高表達與衛星結節有關，提示PTTG1可能參與肝癌的侵襲轉移過程。腫瘤的病理分級反映了腫瘤細胞的分化程度，病理分級越高，分化程度越差，而腫瘤細胞分化越差則惡性程度越高，PTTG1在病理分級高的肝癌中高表達率升高，提示PTTG1可能通過某種機制抑制了肝癌細胞的分化，增強了肝癌的惡性生物學行為。

肝癌的發生發展是一個十分復雜的過程，該研究中顯示肝癌組織中PTTG1的表達明顯高于癌旁肝組織及正常肝組織，肝癌組織中PTTG1的表達水平與衛星結節、Edmondson病理分級相關，提示PTTG1可能在肝癌的發生過程中起著重要作用，并可能參與肝癌的侵襲轉移過程，但具體機制還有待進一步研究。

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